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1、薄层液基细胞检测技术(TCT)及临床意义一，薄层液基细胞学检测技术（TCT技术）研究发展背景 薄层液基细胞学检测技术（Thin-Cytologic Test TCT），液基薄层细胞制片检查系统处理技术诞生于1991年美国等国家，率先应用于妇科细胞学检查，国内从2001年开始作液基细胞学筛查宫颈癌的研究，使该项技术得到迅速发展，被称之为一场细胞学制片技术的革命。TCT从根本上解决了常规脱落细胞制片假阴性率高、丢失细胞率高（80%）和涂片质量差等技术难题，使宫颈癌的阳性检出率达95%以上，为脱落细胞学诊断作出了重大贡献。但是过去该技术需要国外的制片机、细胞保存液等，它的价格昂贵，在国内也只能是一些
2、大医院才能开展该项目，在基层医院的推广则比较缓慢。后来国内的一些厂家研发了半自动的离心法制片机，并自主研发了细胞保存液，大大地降低了薄层液基细胞的制片成本，从而使该项技术易于被广大基层医院所接受并且进行推广使用。目前，它已成为筛查宫颈癌最好的推荐方法之一，为宫颈癌的早期诊断和治疗提供了非常明确的诊断依据，是一项非常值得推广应用的临床检验技术。二，产品作用原理： 通过采集阴道或宫颈分泌物，获得脱落细胞后浸入液基细胞处理试剂中进行处理，试剂中的裂解成分能对红细胞进行裂解，去除红细胞对检验结果造成的干扰；同时试剂中的固定成分能保存固定白细胞、脱落上皮细胞等有价值的细胞；并使包裹在黏液中的有效细胞充分
3、分离出来，防止有价值细胞的丢失。将有效细胞制备成细胞悬液，最后通过过滤离心方法清除黏液对制片的干扰，制成脱落细胞薄片。可用HE染色、巴氏染色或其他免疫组织化学染色等方法使细胞着色，再通过人工观察分析来检查阴道或宫颈的细胞形态，诊断子宫颈癌及其癌的前期变化、人乳头瘤病毒和单纯疱疹病毒感染。三，主要开展的检查项目： 宫颈脱落细胞检查、胸腹水脱落细胞检查、尿沉渣检查、痰液脱落细胞检查、支气管刷片细胞检查。特别适用于所有的女性的宫颈癌的早期诊断。四，TCT优点： 1、保存液试剂盒有裂解红细胞功能，能快速裂解采集样品中的红细胞，裂解能力强，裂解更完全，能去除血液对检验结果造成的干扰。2、试剂盒含有细胞固
4、定剂成分，能快速对样品中的白细胞、脱落上皮细胞等有检验价值的细胞进行固定保存，防止有效细胞发生自溶。经试剂盒固定保存的细胞，细胞形态完好，能保持样品采集时细胞的原始形态，不会发生膨胀、固缩等形态变化，保证检验对有效细胞的数量和质量要求。3、试剂盒对粘液具有稀释作用，能分离出大量包埋在粘液中的有效细胞。使更多有检验价值的细胞被保存下来，提供充足的细胞数量，为检验结果的准确提供保证；同时，处理后的样品经低速离心过滤后能彻底清除样本中的粘液，有效防止粘液对样品检验结果的干扰。4、处理过的样本经过低速离心后可制成均匀单层的细胞薄片，达到检验要求。5、经试剂盒处理的脱落细胞对生物染色剂具有亲和性，有利于
5、生物染色剂着色，为诊断工作提供了方便。6、试剂盒使用简单，操作方便，大大节省了制备样品标本的时间，同时克服了传统检查方法的不足。五，宫颈癌是常见的恶性肿瘤之一，发病率位于女性恶性肿瘤的第二位，据相关组织公布全世界每年大约有20万名妇女死于这种疾病。近年筛查发现，发达国家发病率明显下降，而发展中国家的发病率是发达国家的6倍，我国妇女宫颈癌的发病率和死亡率占世界的1/3，可见改善卫生状况，及时就诊，早发现、早治疗极为重要。 子宫颈癌严重威胁女性健康哪些人容易患子宫颈癌？ 1.人乳头状瘤病毒（HPV）感染者 2.多个性伴侣者 3.早婚多育者 4.2050岁子宫颈癌高发 5.宫颈上皮不典型增生 6.口
6、服避孕药子宫颈癌的常见临床表现？ 1.早期患者可以没有任何表现。 2.性生活后出血，如妇科检查及便后接触性出血，晚期子宫颈癌常表现为大量出血。 3.有的可以出现腰、腿痛，下肢肿胀，排便、排尿困难，尿血，便血等。 4.年轻患者也可以表现为经期延后，周期缩短，经量增多等。 5.老年性患者常主诉绝经后不规则流血。预防措施？ 1.妇科检查 2.液基细胞学检查 3.宫颈活体组织检查薄层液基细胞学（TCT）检查的临床意义 是普查子宫颈癌，早期诊断，早期治疗，降低宫颈癌死亡率的有效方法。尤其是通过发现宫颈癌上皮内病变采取合适的处理，可阻止这些癌前病变发展为宫颈癌。近年来发现，过去的传统抹片存在许多局限性，比
7、如细胞数量相对较少，其阳性检出率低，容易漏诊等现象。 TCT细胞学检查取样方便，易于定期复查，于传统抹片相比，在制片上有重大的突破，使图像更加清晰，便于诊断，可以早期确诊癌及癌前病变，及时给予相应的治疗，有效降低宫颈癌的发病率和死亡率，大大提高了妇女的生活质量。哪些人应定期做TCT宫颈病变的检查？ 18岁以上有性生活的女性应每年做一次宫颈细胞学检查，当发现有宫颈糜烂，宫颈肥大，在性生活后宫颈出血，绝经后阴道不规则流血的症状都应该立即进行宫颈细胞学检查. 我们在日常工作中最常诊断的结果是：HPV(人乳头瘤病毒）感染，LSIL（低度鳞状上皮内病变）,HSIL(高度鳞状上皮内病变),ASCUS(意义
8、不明确的不典型鳞状细胞）,还有就是轻、中、重度炎症。 HPV感染是所有子宫颈癌前病变及子宫颈癌发病的主要病因。 HPV感染分为一过性和持续性感染。只有高危型HPV持续性感染才是宫颈癌发生的致病因素。 高危型HPV与LSIL（低度鳞状上皮内病变）和HSIL（高度鳞状上皮内病变）都有关，但更多见于HSIL。最常见的为HPV16型.专家指出，宫颈癌发病的危险因素包括高危HPV感染、初次性生活年龄、生产次数、文化程度等。子宫颈癌是目前唯一病因明确的癌症，最能被有效预防、早期发现和有机会治愈的癌症。 子宫颈癌前病变与早期癌多无症状，妇科检查亦难发现，出现症状时80%以上已成为浸润癌，难以治愈。从HPV感
9、染到宫颈癌前病变可长达5-15年，但是只要定期筛查以及HPV感染期和癌变前期的及时治疗，就能降低子宫癌患病率和死亡率。 LSIL（低度鳞状上皮内病变）共同特征： 1.胞浆成熟，为表层和中表层细胞 .2.核不同程度异型：包括深染，大小，数量和形状的变化 3.一般无核仁，即使有也不明显 4.细胞边界清楚，可单个或成片排列。 HPV感染常出现“挖空细胞化”，“挖空细胞化”的诊断要点： 1.核周空晕：透亮，不规则，宽幅。 2.核的异型。 3.周边浓集的胞浆。 HPV感染可以引起非常明显的核周空晕，但并不是出现了核周空晕就一定是HPV感染，在糖原溶解，核固缩等情况下都可以出现核周空晕现象。因此要掌握HP
10、V感染所致挖空细胞的核周空晕三个要点：第一，透亮。这个特点在低倍镜下都非常的明显，透亮的感觉就如一张白纸，不着任何色彩，与糖原溶解所致的朦胧感是很好鉴别的。第二，不规则。HPV感染引起的空晕，一般都不圆整，而糖原溶解引起的则是非常规则的圆形或者椭圆形。第三，宽幅。HPV感染引起的核周空晕幅度往往较宽，有的时候，幅度过宽把周边的胞浆都压缩成了一层皮。这个特点能很好的区分HPV感染与核固缩引起的核周小空晕。 核的异型可以从小到大，有时候HPV感染引起的核异型程度很小，可能仅仅表现为核的深染，偏位。但有时候核的异型程度很大，能达到CIN1的形态学改变。此外，双核的出现也是HPV感染一个比较常见的特点
11、。双核加空晕往往提示有HPV感染的可能。 胞浆的改变主要体现在表层或浅表层的细胞。HPV感染引起的病变细胞，胞浆由于被推挤到周边，染色加深，境界清楚。 掌握了这三个特点，诊断HPV感染就思路比较清楚了，也能很好的避免把糖原溶解误诊为HPV感染。 HPV与宫颈癌的关系： 上个世纪90年代以前，已有研究发现HPV与宫颈癌有关，90年代以后，被确认为宫颈癌的主要病因。 99.7%的宫颈癌都可检测到高危HPV DNA.而HPV阴性者几乎不会发生宫颈癌 。宫颈癌成为目前人类所有癌症病变中唯一一个病因明确的癌症。HPV分为高危型与低危型，低危型常引起外生殖器湿疣等良性病变，高危型与宫颈癌及宫颈上皮内瘤变相
12、关。 高危型中，主要致病性的HPV 16和18型。有研究表明16型更常见在鳞癌病变，18型更常见在腺癌病变。 在基因水平上，又分为游离型与整合型两种感染形式。游离型是指病毒DNA位于宿主染色体之外，侵犯鳞状上皮底层细胞，表现为宫颈良性病变，CIN1；整合型是指病毒基因整合到宿主细胞的DNA中，侵犯鳞状上皮由底层到中表层细胞，表现为CIN3，宫颈癌。LSIL(低度鳞状上皮内病变) 诊断要点： 1.细胞成熟，多为表层或中表层的细胞。 2.核增大，面积常大于中层鳞状细胞的3倍。 3.核有轻度异型，包括核膜的轻度不规则，核染色质增粗等。 中层鳞状细胞的判断标准： 1.网状核 （1012um） 2.成熟
13、的淡蓝染的胞浆 3.核浆比约为1：5 。小结： LSIL的细胞形态学改变是从ASC-US到LSIL到HSIL的一个演变的过程。核的增大是鉴别ASC与LSIL的重要指标，核浆比的增大是鉴别LSIL与HSIL的重要指标，而核的异型程度不断增大是贯穿整个演变过程。掌握了这些重要指标，再结合整张片子中病变细胞的“数量与质量”，以及病史，做出正确的判读就要容易很多。 LSIL的临床处理 ：约85%的LSIL病变被检测有高危型HPV感染，当然，通过HPV检测发现病人是否持续感染高危型病毒，对判断，预估“病变进展”是有一定意义的。 LSIL的早期处理措施为阴道镜检查. HSIL（高度鳞状上皮内病变）诊断要点
14、： 1.高核浆比 2.核的异型性，尤其是核明显不规则及核染色质增粗. 诊断标准： 1.病变细胞比LSIL的小且较不“成熟”。 2.可单个，成片或成堆出现。 3.核深染，大小，形态不一，核染色质粗，核膜不规则。 4.核浆比明显增高。 5.一般没有核仁，偶尔可见。 HSIL中的其它形态特点： 1.角化性病变。 2.鳞状上皮内病变累及腺体。 3.小细胞的高级别鳞状上皮内病变。 4.成串的高级别鳞状上皮内病变。 5.梭形的高级别鳞状上皮内病变。 角化性病变 ：虽然大多数H SIL的特征是高核浆比，但是有一些HSIL的胞浆丰富，异常角化。其特点是核深染，有一定异型。有时出现怪异的蝌蚪状细胞。 需要注意的
15、是往往这类细胞核致密，深染，很难看清楚核的内部结构，需要与变性造成的角化细胞鉴别。小细胞的HSIL ：肿瘤细胞体积非常小，且往往细胞数量不多，很容易漏诊。 诊断的要点在于观察细胞与细胞中间的大小，形态差异以及单个细胞不规则的核膜结构。 需要鉴别的是不成熟鳞化细胞，组织细胞，副基底层细胞及IUD的改变。成串排列的HSIL ：很多时候是由于混杂在黏液中形成的串状，细胞体积一般较小。高倍镜下能清晰的观察到HSIL所具有的特点。 需要鉴别的是化生细胞，组织细胞。HSIL的鉴别诊断 1.宫颈管细胞 2.鳞状化生细胞 3.炎性细胞团 4.萎缩性改变 5.子宫下段内膜细胞 6.子宫内膜细胞等。HSIL的误诊
16、病例中，最常见的现象是将深染的，细胞界限不清楚的，核信息表达不清晰的高核浆比细胞误判。 包括：宫颈管细胞，子宫内膜细胞，副基底层细胞，化生细胞，组织细胞，修复细胞，疱疹病毒感染等等。判断一张制片染色效果是否满意，不是观察散在的鳞状上皮细胞，而是观察成团的细胞。 判断指标：细胞界限是否清楚，排列结构是否显示完整，核的信息是否表达清晰。只有成团细胞观察清楚的片子才是合格的液基制片。 只有细胞核信息表达清晰的细胞才是有诊断价值的细胞。关于HSIL判读的个人体会： 1.片子质量是前提：建议平常染色核浆都稍微淡染一点，当肿瘤细胞出现的时候，大多有染色加深的改变，便于判读是其次，减少误诊是关键。 2.对细胞核的判读最重要：单个细胞强调核染色质的
