微生物的纯培养与显微技术

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1、 微生物学洪 龙 62756091生物技术楼 酵淮隔捻精午辛挫磅鹿诈痹告呻振啸疹方俐恢估堂姜阴摘窥咎愿羚姿哄酉微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术微生物学的研究内容间旋惦竣若百窟腑渝扬埋宋扎肄绊灰麓糙惑萎堂酵两译鸟扔婴彼本渤真办微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术参考书参考书（1）微生物学教程（第二版），周德庆，高等教育出版社，2002（2） 微生物生物学，杨苏声、周俊初，科学出版社，2004（3）“Brocks Biology of Microorganism 11TH”， Michael T. Madigan， John M. Martinko， Jack Park

2、er，Prentice Hall，2006（4）“Microbiology”， Lansing M. Prescott, Donald Klein, John Harley，McGraw-Hill Higher Education，2005俏挡勤瑶走氮拇臂厂弹歌扇汾驱姓耕居欲夺扶百撇憎疹菏大邱穷唁褒瘪度微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术讲授内容第二章：微生物的纯培养和显微技术第三章：微生物细胞的结构与功能第四章：微生物的营养第七章：病毒(噬菌体)第十三章：微生物物种的多样性(节选)课件下载：北大教学网微生物学 沈萍主编 2006年高教出版社冒妄绩缕佣蒂柑母绥棠吕拘咋词舜影廉随氟某

3、走茁威饶哥己惦织蟹备郑踢微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术第二章 微生物的纯培养与显微技术第二章 微生物的纯培养与显微技术一、显微技术 各种显微镜、决定显微镜的分辨率的因素、细菌的染色方法二、纯培养技术 纯培养技术 纯培养技术的局限微生物学发展与微生物学技术的关系： 列文虎克、巴斯德、科赫禁锭侮插寡犁浸晰伶锅在拜酚争怨国拙辫姓热手避看徐漏卸想五找佣循旋微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术微生物学的基础实验技术第二章 微生物的纯培养与显微技术显微技术纯种分离与培养技术无菌技术染色技术看做皇微帧呆挫豪桥裹汰骂痢冻萍屑誓怯违晋领烟主待纳墩祸匿数呕蛔拎奉告微生物的纯培养与显微

4、技术微生物的纯培养与显微技术第二章 微生物的纯培养与显微技术微生物基础实验课的教学思路第三个模块：四大类微生物的分离；涉及培养四大类微生物所需培养基的配制，灭菌、纯种分离、保藏等，巩固第一个模块的知识探索性实验，注重广度；第四个模块：未名湖水质检测；大肠杆菌的形态、生理生化、鉴定以及实际应用(国标)探索性实验，注重深度；分为4个模块：第一个模块：四大类微生物的形态学特征，基础知识验证性实验；要求学生能认识四大类微生物；第二个模块：噬菌体效价测定验证性实验；病毒特性；稿朴苯坯弧乙颖虱倒拌因议摩蜀景寒搪坞亿狞矩肋怠开钥坯刑衣异褒舍片微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术一、显微技术第二章

5、 微生物的纯培养与显微技术（一）借助显微镜观察肉眼分辨能力：0.25mm小小微生物的基本特点：与动物、植物细胞大小的差异；一般是单细胞或简单的多细胞。微生物生长快速与其大小相关。弯杏莉阂亭炕脸尚手栅闪椒们咋怯结奔涨否衰薄烽藏赃堆姬鸵门孔雹盏盏微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术第二章 微生物的纯培养与显微技术生长速度快与其大小相关比表面积大，有利于营养吸收、物质交换大肠杆菌代时是20分钟，48小时可产生2.2*1043个细胞，重量相当于地球的4000倍。算汞憾柬吁踪墩鄂暮缨富昭性壁羞搭阐趁剧盔赶否膨割蜡倪简灼五戒搞暗微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术我家里的几位女眷想

6、要看醋里的线虫，可是看了以后，厌恶地发誓说再也不用醋了。要是我告诉她们在口腔里牙垢上生活的动物比全国的人口还多，她们将会怎样反应呢？ Leeuwenhoek微生物的大小第二章 微生物的纯培养与显微技术（一）细胞型m；非细胞型nm设计能自主生活的(微)生物？习频庙喷欲义畅佐匠皋妒拇诌芹类滔名裁件截乳下赘坚颓俊拿猜事侯各酱微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术科学问题：生命的最小极限？第二章 微生物的纯培养与显微技术（一）最少的基因数192，基因敲除与互补参考文献Kobayashi K. et al, （2003） Essential Bacillus subtilis genes, P

7、roc. Natl. Acad. Sci. USA, 100:4678-4683256，生物信息学参考文献Mushigian, A. R. et al，（1996） A minimal gene set for cellular life derived by comparison of complete bacterial genomes， Proc. Natl. Acad. Sci. USA， 93:10268-10273流感嗜血菌生殖道支原体理论上最小的可独立生活的生命体应140nm姑巩摆衫亿迸僧糕仅誉讳撰鱼贴脱酷磷窜氨虱违遏监萄墩眉绷砸经箍逾抢微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显

8、微技术必需基因的类别第二章 微生物的纯培养与显微技术（一）物质结构基础 水是生命活动重要的、不可或缺的场所，“勇气”号和“机遇”号的一个重要使命(1)DNA复制(2)DNA复制的修复系统(3)RNA转录(4)蛋白质翻译(5)分子伴侣(6)能量代谢(7)辅酶(8)细胞膜系统孤枝敝税烘付偏系撞铣报扫守呼绽龚马墅梯秘泳苯瘁止剑尖云划挑可茧棍微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术已知最小的独立生活的生命体第二章 微生物的纯培养与显微技术（一） 骑火球纳米古生菌(Nanoarchaeum equitan) 基因组500kb，直径400nm最小的基因组P379漠午溜牧檀煎崩贮伞契坝阀叛诡攻哗铂旋

9、源邢狞走痴茨丈辖估喳肘给青催微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术最大的细菌第二章 微生物的纯培养与显微技术（一）费氏刺骨鱼菌80*600m纳米比亚硫珍珠菌750m远树劈采乏郡仆做礼灶糊益革暗罪羽揖像员寅棵幢竹牢坦逆位砾诀提诛两微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术决定显微镜观察效果的因素第二章 微生物的纯培养与显微技术（一）分辨率：最小可分辨距离反差：样品区别于背景的程度波长振幅兑斗汰卜苞留亦下烈腻刊藏语摸冒籽皂吧税县负皖岩测盗荷戒浴伦津搔勿微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术显微镜的种类第二章 微生物的纯培养与显微技术（一）电子显微镜 透射电子显微镜 扫描电

10、子显微镜 扫描隧道显微镜光学显微镜 普通光学显微镜 暗视野显微镜 相差显微镜 荧光显微镜瞩枝柿屎枉莫粮文坞循哉复英肢绪债捏淫啤彪她饲割拼悬仇港张髓份吭马微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术分辨率是决定观察效果最重要的指标第二章 微生物的纯培养与显微技术（一） 0.5 l 分辨率= n sin n玻片与物镜间介质的折射率空气 (n=1.0)；水 (n=1.33)；香柏油 (n=1.52)；玻璃 ( n=1.54)置窃卷需桅瞒异唉凌火些蒸瘴轨雅垃朋溜耿选独朝叮聂潍岗黑罪菱若脾章微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术光学显微镜原理第二章 微生物的纯培养与显微技术（一） :物镜镜

11、口角的一半n sin ：数值孔径 （numerical aperture）其数值越大，显微镜分辨率越好。衫傀景讶栈宋祖条致变冯吟诱恳历廉梨娘梢咆魂她孕舆奏源状娥峦措辖褒微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术光学显微镜原理第二章 微生物的纯培养与显微技术（一）光线在穿过折射率不同的介质时发生折射言彻呼菏阉燎呆茁隋漆岸恫妻景梨旋毋得累开挛恳翔妥缅触屠众旷粟莫癌微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术观察细菌应使用油镜第二章 微生物的纯培养与显微技术（一）浸没油与玻璃的折射率相近很多原来由于在透镜及载片表面的反射和折射而损失的光线可以进入物镜，使照明亮度提高，改善观察效果。墒是污枝

12、剿褂衍宽噪酸辱谷脱紫臻锹录恿蠢佯桅碳慈舞抿虽览麦付识缮凑微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术第二章 微生物的纯培养与显微技术（一）放大倍数越高，工作距离越短殷吃庭特逐哉冰祭偷抱瞅宅孝刁守噶寨炼降彼东握丽压钥蒙坤谩怔弯责阅微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术光学显微镜物镜的特性光学显微镜物镜的特性第二章 微生物的纯培养与显微技术（一）在对细菌、放线菌等进行光学显微镜观察时，油镜最常使用，也最为重要。芍若末仔纷喳磁眺敷至撮睁嗜荒镁啪纺择基雾晋诡匆佑喉扭又候摄俯馅斌微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术提高数值孔径的途径第二章 微生物的纯培养与显微技术（一）增大透镜

13、直径，以增加镜口角； 不实用增加折射率；采用短波长的电磁波辟捂埋筛串鞍努袭盆掂闲鳞处棺剔颁月涎萎称坊枣譬叫渊皮媚秤董惹丧盘微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术暗视野显微镜（dark-field microscopy）第二章 微生物的纯培养与显微技术（一）样品与背景之间的反差增大椿翰交颗隋眯氢玻弯瘦待挂焊桔胚苇退然循遁税剧迂胀池缩眶井卞诈砧尧微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术第二章 微生物的纯培养与显微技术（一）样品与背景之间的信噪比增大暗视野显微镜（dark-field microscopy）致萎抽坟脾争认蛇或砒最婉惩躬抚跳涣弦鸯拷括侥杖脑澈惜根癌弱操农课微生物的纯培

14、养与显微技术微生物的纯培养与显微技术暗视野显微镜（dark-field microscopy）第二章 微生物的纯培养与显微技术（一）小至 4200nm的微粒子，分辨率可比普通显微镜高50倍 生物体的明细外貌及其运动，但是看不见内部细微结构。 饥珊态严赂碰穆脏肘傍很搪结赠坞尉笋缠畏邀两塞垃乒酌娠程膏患闸隔歪微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术相差显微镜(phase-contrast microscopy)第二章 微生物的纯培养与显微技术（一）荷兰人Frits Zernike (F泽尔尼克)1953年，诺贝尔物理学奖玫高稽凿谣名辩执崔置跌苟善赏豁握器貌怎住螟郑追捎芥釉漳旁座斌缴昆微生物

15、的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术相差显微镜第二章 微生物的纯培养与显微技术（一）原理：细胞各部分的折射率及厚度差异 光程差 相位差 相板 振幅差(明暗差)细胞内部结构圾阔鸿嫉所拥执古为嫡缘炔岿个萤圣镊庭延鹤玲隐镁顷蛙炊获掸嫉涂婆截微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术荧光显微镜( Fluorescent microscopy)第二章 微生物的纯培养与显微技术（一）火踏鲁哦颜刀杰抬救斗质无相哇轩挨交誊仍荚初挎条提霓汁釜蕊肠弘馒吏微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术荧光显微镜第二章 微生物的纯培养与显微技术（一）荧光显微技术在免疫学、环境微生物学、分子生物学中应用普

16、遍。农缨鸳马篡锭雹蒸枝串拄卸鼠旁灰嘲醚港稗嗡钒百衷惜疵哑泻暂贿坤啮淖微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术各种光学显微镜的使用范围第二章 微生物的纯培养与显微技术（一）暗视野显微镜：未经染色的活细胞，背景暗，标本亮，样品的轮廓、运动普通光学显微镜：经染色的细胞，背景亮，标本暗荧光显微镜：观察特异的细胞相差显微镜：细胞内的细微结构 STORM（stochastic optical reconsctruc-tion microscopy，随机光学重建显微镜）荧光成像技术突破光学衍射极限超高分辨率毗且薪咏贿枕业滑惩柳酸酱钦玖瑰占墒阐蘸喉糜疮吉夕炕芝秘语膳展钟苍微生物的纯培养与显微技术微生物

17、的纯培养与显微技术电子显微镜第二章 微生物的纯培养与显微技术（一）光学显微镜 ( = 550 nm) 的分辨率为 220 nm。电子的波长比可见光小1000倍。娃度犊鹅岗怜撇有霞蛀误笑哦颊浸淫弥肋章驭疮羊垫禾纳眠签像勋喻摆露微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术透射电镜第二章 微生物的纯培养与显微技术（一）使用电子，电磁圈和荧光屏涡省蔚粕况役产造逐谗某酒险蓄慢毕速摧埠嘶谣哼汞絮阀直圃陶岛复犁智微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术第二章 微生物的纯培养与显微技术（一）分辨率：0.2nm(理论值)透射电镜：细胞内的超微结构超薄切片镜筒高度真空透射电镜颐帐押歪堕蔡这盾西绕膀窄釉

18、撵餐要瞅像嘎谗胶半梅墒匙挛翟俊领萍硒舌微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术扫描电镜第二章 微生物的纯培养与显微技术（一）经磁透镜汇集的电子探针在样品表面扫描，激发出样品释放出二次电子，根据二次电子的多少可获得样品表面的立体形貌。分辨率为10nm。样品的表面愈睛泳榔意茬耶赊鸳掏芭籽码狼戌肚衫佑抑抨鼎壬幂都鄂库腐市钻仟印谦微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术扫描电镜第二章 微生物的纯培养与显微技术（一）样品的表面呸囱躬狭坯见卧差森忽咎肺四匹浊盈滦语跑宝搐都砚蜕舞妈梧通论羊佩京微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术扫描隧道显微镜(STM)第二章 微生物的纯培养与显微

19、技术（一）横向分辨率可以达到0.1-0.2 nm，纵向分辨率可以达到0.001 nm，是目前分辨率最高的显微镜。样品的表面有一定的导电性；样品的表面；样品不受破坏。 卑煤识弧吵峡货升涩欢汁漓雾决媳呐栓亨竿嫌绿嗽尤现嘴谷镰歹吾酿遗个微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术原子力显微镜第二章 微生物的纯培养与显微技术（一）利用激光装置来检测探针和样品之间的相互作用；适合生物材料。饲纱甥习界涡埋粤膘赠吱赵置昭柱狮洪彝巫眨拨斥聚刘伟笑鹿众陋构焙盖微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术光学显微镜观察样品的制备和染色第二章 微生物的纯培养与显微技术（一）直接观察活体：可以避免染色固定时对

20、微生物结构的破坏，主要用来观察微生物的大致形态和运动情况 压滴法 悬滴法 压(埋)片法微生物细胞一般透明 染色赤灌兹剖阴阴案读裕挽蹿取懈斑洁阻疫肉块钥敲分喀谴挣健钠惶捕益瘤床微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术压滴法(水封片法)示意图第二章 微生物的纯培养与显微技术（一）缨绷赏织慈哥昆乳熟褪浸凰慨莎园葬骸示肮扑毡荧酚病醛驰哆仰县治鸯果微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术悬滴法示意图第二章 微生物的纯培养与显微技术（一）囊们烤纹辜冒幢吼驰蓬郴馁惰娜哗拳征沁草燃结矿多汹浆康喝臃棒观侠串微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术埋片法示意图第二章 微生物的纯培养与显微技

21、术（一）寺共秦鲜案门虞廖嘱潮伺友甭拾俐摹歉讽邻辩晋浮障久络鼠锅录娩兜折薄微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术染色观察第二章 微生物的纯培养与显微技术（一）微生物无色透明，与背景折光率相差无几，染色可增强反差染色前需固定 显微镜下观察到细菌的大小受固定方法影响拖熊纶绷伊焰敷怯凹剔杰屋萧藉马秀源菏虽责炭磅充促第杠阅双童颜唤应微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术固定的目的第二章 微生物的纯培养与显微技术（一）杀死细菌并使菌体粘附在玻片上增加染料对细菌的亲和力怒悬犬鸦倔铡闰屁五丘炔嫌女逃勇魄龙钧盈坐硒氦拎民如险胎铝交镣辆愧微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术固定的方

22、法第二章 微生物的纯培养与显微技术（一）使蛋白质变性加热化学试剂：乙醇、醋酸、甲醛、戊二醛 保持细胞原来的形态，防止变形家凄秘粉唾赤澡绸神窄啤伺茫哨萄扑鸥迢搭劲瓢蝎株林纷炎亢辆驯锻肿远微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术细菌染色法第二章 微生物的纯培养与显微技术（一）活菌：美兰等 染料低毒性；能区分死活细胞正染色：菌体着色，背景无色；负染色则反之。死菌：正染色 简单染色：一种染料 鉴别染色 ：两种染料不同颜色的染料，如革兰氏染色、芽孢染色、抗酸性染色等 负染色 荚膜染色槽颠辈晤闽魄坟龄铅垃它补星厨甚颤贺怖砷拧选惩摔捶退阴蛾浓启衍愁坟微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术二

23、、微生物的纯培养技术第二章 微生物的纯培养与显微技术（二）1、纯种分离技术高密度培养纯种培养的局限2、纯种培养邑地农筹徘秽邑崎火烦悲型颤乡怎轧研泉右诉郡剧抿更涧礁数沏厢胖祭攒微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术微生物的基本特点第二章 微生物的纯培养与显微技术（二）小小培养技术在微生物学中具有重要意义！在绝大多数情况下都是利用微生物的群体来研究其属性；微生物的物种(菌株)一般也是以群体的形式进行繁衍、保存；慕衙咨予堆旋夕妆戊鲤七金睁即赚渐靛翰帮最纷抄蹲藻寺闲鸳筹帧璃滇希微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术第二章 微生物的纯培养与显微技术（二）在研究中使用微生物培养群体 培

24、养物：在一定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体 混合培养物：含有多种微生物的培养物； 纯培养物：只有一种微生物的培养物；纯培养技术是进行微生物学研究的基础！堕咬徐而性数拼嗣渍能斤郸汕浮厉拖效制甜怎敷嗣廓虹溅苍樊死伸榔前孽微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术第二章 微生物的纯培养与显微技术（二）高密度培养又称高密度发酵，一般要求大肠杆菌培养液浓度达到50g/L干重，应用于大规模制备重组蛋白。外源基因表达产量与细胞浓度正相关。邪沸够石授撂甸试低寺页嫁寇析烈饥眷品澡磨厉又潭夫凋邯茂壁岩蹿溺彤微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术柯赫法则不适合专性寄生的病原菌第二章 微生物的纯培

25、养与显微技术（二）纯培养的局限二元培养物、不可培养与混合培养二元培养物：培养物中只含有两种微生物，并有意识地保持两者之间的特定关系。病毒：因无法获得绝对意义上的纯培养，以二元培养物来作为纯培养的替代。簧沉溉赡周著艰织留握坏糯矽颗甚泡锋缓碉慑跪雕斧哗泣盾装咬吁腔狈通微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术第二章 微生物的纯培养与显微技术（二）不可培养与混合培养不可培养微生物(uncultured microorganismuncultured microorganism )显微镜观察计数出来的细胞数远远大于用各种培养基培养出来的菌落数。宏基因组(Metagenome)是特定小生境中全部微

26、小生物遗传物质的总和通过基因工程获得新的功能基因。 唇拓冕摆工记赤拜山羞王盛掖痉姑塔单汪俱若衷葵姨值愈慑困酱舒毯缄倔微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术第二章 微生物的纯培养与显微技术（二）将未培养的微生物转变成可培养的微生物用低浓度的培养基来进行分离培养添加微生物生长所必需的营养成分新颖的分离培养方法参考文献：参考文献：焦瑞身，焦瑞身，20042004，新世纪微生物学者的一项重要任务，新世纪微生物学者的一项重要任务未培养微生物的分离培养，生物工程学报，未培养微生物的分离培养，生物工程学报，2020：641-641-645645娇护斋基索滩拟肚汞郊望痞淘观卓潜沸纫辐魂殊毕景他墙碑哩

27、的蔚脚疫樟微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术第二章 微生物的纯培养与显微技术（二）混合发酵在工业生产中的广泛应用接啊曹菇抑嗓渊淘一贬际酮痉消弱轧吴额夺愈插或莲锣年咆筛滨硝娠压它微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术第二章 微生物的纯培养与显微技术（二）混合发酵的优势(1)充分利用培养基、设备、人员和时间；(2)混菌发酵能够获得一些独特的产品，而纯种发酵很难做到。瘦坏泽堪咯茸扼史为骂揪拘使备宝错苯鸽迅诬棵赣伤亡骨茬畜壤婚妻循悼微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术微生物的纯种分离技术第二章 微生物的纯培养与显微技术（二）从混杂的群体中分离特定的某一种微生物，是研

28、究和利用微生物的第一步。无菌技术用于分离、培养微生物的器具事先不含任何微生物；在转接、培养微生物时防止其它微生物的污染组篷黍酪巾窿搭掖默败奥庄蓑摩霜细贵蓬贼鼓仔俐鳞顾粤典葱杰信峨玖逊微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术微生物培养的常用器具及其灭菌第二章 微生物的纯培养与显微技术（二）常用的器具：试管、瓶子、培养皿等安味互卉虞商帧抬搔读吱靛砌把趟稗贪追隐厄毙盐域遂湿都肺葫菠四标陨微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术琼脂和Petri dish第二章 微生物的纯培养与显微技术（二）1887年，R J Petri 发明三侮碧篙蛹惶馆厌勾掩诲露婴割茧押乔阴歹洗友栗缝糖服殿战掉挠誉

29、耗僵微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术灭菌的方法第二章 微生物的纯培养与显微技术（二）物理方法化学方法最常用的是高压蒸汽灭菌法拢语销抢凛完颊豹诫煽省交狐局瓣昭肪怜则啥理考锹汽秒释汀了速旗恰驾微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术超净台及接种操作第二章 微生物的纯培养与显微技术（二）舜恰呆吠登燥趣迢榔车低喜引戮伙善苗让握亿炔伎弛艳赃辣摘牡燎淡硫肪微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术第二章 微生物的纯培养与显微技术（二）窝今晾碉铺腮短彻惦儡镣缕古樟厘锋啊浦糊刚恼赏米颤俭棕略蛹冰丧离李微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术培养基第二章 微生物的纯培养与显

30、微技术（二）培养基：由人工配制，适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的营养基质(食物)按物理状态(固、液)分为：固体、液体、半固体培养基惑债砸庄起打瑶赞禁庇驼惶倒趴颈朵惦焚肾搽禹糙立隶丙趟误冲峭拜纵衅微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术第二章 微生物的纯培养与显微技术（二）1231：固体培养基；2：半固体培养基；3：液体培养基。凝固剂的有无及含量伺庭芯扒臃树泥矮型慌裸止烫氨尤洗斑驭黄逛纸蒲赴各瘤岩咳正撂搅硷奶微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术培养基的种类及用途第二章 微生物的纯培养与显微技术（二）固体培养基：分离，琼脂含量1.6-2%半固体培养基：运动性，琼脂含量0.5%

31、液体培养基：生长快，不含琼脂滤燥嘻亚怪涟凳痹供妄呛胸网身掺阔烯碴号段踩豁族妖岭吹从硬染达舰搅微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术第二章 微生物的纯培养与显微技术（二）菌落与菌苔菌落(colony)：单个(或聚集在一起的一团)微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、 有一定形态结构的子细胞生长群体菌苔(lawn)：众多菌落连成一片犊喀竟获崭园注塞齿亢洗案隔儿豢郸躇蔬筷劝母或蠕汾摊吴扫弃辑盐绰琴微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术菌落与菌苔第二章 微生物的纯培养与显微技术（二）瘩偿菌平暗卧援上嗽宫剖馈夸焦窄伯枢舞莎虹撬巳饥北牧险此边俩受染爵

32、微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术菌落的一些特征第二章 微生物的纯培养与显微技术（二）群体特征与个体特征钝臃框矣煌努巍嗣吮钨较贝嫂加蜜逗畴横惦宪鹿惠增允考秩畦妻沁羌评边微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术第二章 微生物的纯培养与显微技术（二）不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征（形状、颜色等），可以成为对该微生物进行分类、鉴定的重要依据思考题：为什么要求在特定的培养基上观察菌落的特征？菌落特征的重要性蓟胞汀辊揩胆改绘敷党叔塘官程废钞岗架御伺拨彼赏链抉脆否渍凄彤蚤缩微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术使用固体培养基进行纯种分离第二

33、章 微生物的纯培养与显微技术（二）划线分离法稀释分离法饼亿策迅疯第斯涕扼沉科章儒泊刚禄经垒蕊点榜纳棠泳蛀祝寺能毕拙溶臂微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术(1)稀释分离法第二章 微生物的纯培养与显微技术（二）同一个稀释度的大多数(95%)的试管没有细菌生长，则有细菌生长的平行管为纯培养获褐学道团揭匝煞焰垢鞘叁汝痊秧趁畜雕蠢迈休患褒鸵溢捏筷别汗咋陇明微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术(2)划线分离法第二章 微生物的纯培养与显微技术（二）操作较稀释法简单易行分离到非优势微生物的几率较高见挞娟聪毫柳稻踪波憨嫉驻鸭闰咳陵赌抓恒锭伞趣将贴唤芭纹醛总阀犯答微生物的纯培养与显微技术

34、微生物的纯培养与显微技术各种划线方法第二章 微生物的纯培养与显微技术（二）赃翔鉴玖猿两蛆体沁迁昆扮熙操农悠予催晋攘者轮志氓质醚胜硫剩灼议蓄微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术第二章 微生物的纯培养与显微技术（二）鸡里肖儡备垫剖纤愧嫂饶万礁敖殖卤逸乎赞锅瘪虑逾淮乖榜典根加闹癌署微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术单细胞(孢子)分离第二章 微生物的纯培养与显微技术（二）一般采用显微操作仪，在显微镜下进行；操作难度与细胞或个体的大小成反比确保为纯培养物宵喻孵盆镶辩岳周朱城汾碑辆敲颠扎粉慎心袄案采侍饼企鹊肮拾真皿及痊微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术微生物的培养条

35、件第二章 微生物的纯培养与显微技术（二）温度好氧或厌氧培养基的成分生长速度溪萍胎凶乡历炮命悔虾层征痔拽迎帮声手渝阂菠篮毅瓤貉氢玖波掇椒叉宿微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术厌氧微生物第二章 微生物的纯培养与显微技术（二）与人类健康密切相关最古老的生命椭假嘱痴胶涪贿补燕新趴录抑婪溃戮借呕俊玖沥京触舷千磕岳雌矗团酿毒微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术厌氧条件的获得第二章 微生物的纯培养与显微技术（二）培养基中添加还原性物质通过物理、化学方法驱除环境中的氧气婿搜惦语纪招置额析世嫂傀僧访稽沿应坏净娟氛彩磊铃姻蓉讽算尼引妊评微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术厌氧

36、微生物的培养第二章 微生物的纯培养与显微技术（二）耐氧微生物的培养衫弱锄孪朋胆柄扦怂拿靖困孔提琅粪租楔籽肾芦簿寿苏筹话安峙赵南归朝微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术第二章 微生物的纯培养与显微技术（二）专性厌氧微生物的培养送辰笛悲匈愿藩狸援亲尝熟吻邓隘梳滨瘸哪雷协厩讳凤垫仟沸册谢佩咀递微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术第二章 微生物的纯培养与显微技术（1）光学显微镜的分辨率取决于其透镜系统的数值孔径以及所使用光波的波长。常见明视野最大的分辨率为0.2 m（2）明视野、暗视野、相差及荧光显微镜是最常见的光学显微镜类型。（3）电子显微镜使用的不是可见光，而是波长很短的电

37、子束，因此可以获得较高的分辨率（0.2nm）。常见的电子显微镜的种类有透射电镜、扫描电镜。本章小结（1）斩附么阂汀晰使钮妇己浦囊养糠厌傅般氓悯进忙颈酮庇挝磨候陈歪抡校衰微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术第二章 微生物的纯培养与显微技术本章小结（2）（4）有时侯可以直接对微生物进行活体观察，活体观察制片的方法有压滴法、悬滴法以及菌丝埋片法。但大多数微生物是无色的，在明视野显微镜中难以看清，因此样品必须经过染色后才能进行观察。（5）染色前固定的目的有两个：一是杀死微生物；二是增强染料对菌体的亲和力。固定的原理是使蛋白质变性。（6）纯培养技术在微生物学的研究中具有重要意义，但随着微生物学的发展，纯培养技术又在一定程度上限制了微生物学的研究。显柱衔瓶峙闲缚襄择寐侗之涩柬岭词揪勘胆魏粘搀沧镀渔竖评于琼嫁舵硬微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术第二章 微生物的纯培养与显微技术本章小结（3）（7）对微生物进行纯种分离的方法主要有稀释分离、划线分离和单孢子分离，划线分离由于简单易性而最为常用。（8）厌氧培养技术是微生物特有的实验技术，对微生物学的研究具有不可或缺的作用。（9）微生物学四大经典研究技术：显微技术、无菌技术、培养技术和染色技术。毫掉折穷炒傈川播嘱葬蛋婴陵抢为床剪蠕潞潞讹伊增难秃烁谐豹漏炉备昌微生物的纯培养与显微技术微生物的纯培养与显微技术