第8章维生素B6测定

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1、第第8 8章章 维生素的测定维生素的测定8.1 8.1 维生素维生素B6B6的测定的测定8.2 VB28.2 VB2的测定的测定8.3 8.3 高效液相色谱法测定维生素高效液相色谱法测定维生素 维生素：维持人体生理功能所必需的、含维生素：维持人体生理功能所必需的、含量极少但具有重要生理功能的、含量极微量极少但具有重要生理功能的、含量极微的天然有机物质。的天然有机物质。 维生素种类：维生素种类： 水溶性水溶性:VB1:VB1、VB2VB2、VB6VB6、VB12VB12、VCVC 脂溶性：脂溶性：VAVA、VDVD、VEVE、VKVK 维生素维生素B1B1。保持循环、消化、神经和肌内正常功能；调

2、整。保持循环、消化、神经和肌内正常功能；调整胃肠道的功能；构成脱羧酶的辅酶，参加糖的代谢；能预胃肠道的功能；构成脱羧酶的辅酶，参加糖的代谢；能预防脚气病。防脚气病。 维生素维生素B2B2。又叫核黄素。核典素是体内许多重要辅酶类的。又叫核黄素。核典素是体内许多重要辅酶类的组成成分，这些酶能在体内物质代谢过程中传递氢，它还组成成分，这些酶能在体内物质代谢过程中传递氢，它还是蛋白质、糖、脂肪酸代谢和能量利用与组成所必需的物是蛋白质、糖、脂肪酸代谢和能量利用与组成所必需的物质。能促进生长发育，保护眼睛、皮肤的安康。质。能促进生长发育，保护眼睛、皮肤的安康。 维生素维生素B5(B5(泛酸泛酸) )。抗应

3、激、抗寒冷、抗感染、防止某些抗。抗应激、抗寒冷、抗感染、防止某些抗生素的毒性，消除术后腹胀。生素的毒性，消除术后腹胀。 维生素维生素B6B6。在蛋白质代谢中起重要作用。治疗神经衰弱、。在蛋白质代谢中起重要作用。治疗神经衰弱、眩晕、动脉粥样硬化等。眩晕、动脉粥样硬化等。 维生素维生素B12B12钴胺素。抗脂肪肝，促进维生素钴胺素。抗脂肪肝，促进维生素A A在肝中的在肝中的贮存；促进细胞发育成熟和机体代谢；治疗恶性贫血。贮存；促进细胞发育成熟和机体代谢；治疗恶性贫血。 维生素维生素B13B13乳酸清。乳酸清。 维生素维生素B15B15潘氨酸。主要用于抗脂肪肝，进步潘氨酸。主要用于抗脂肪肝，进步组织

4、的氧气代谢率。有时用来治疗冠心病和慢性组织的氧气代谢率。有时用来治疗冠心病和慢性酒精中毒。酒精中毒。 维生素维生素B17B17。剧毒。有人认为有控制及预防癌症的。剧毒。有人认为有控制及预防癌症的作用。作用。 对氨基苯甲酸。在维生素对氨基苯甲酸。在维生素B B族中属于最新发现的中属于最新发现的维生素之一。在人体内可合成。生素之一。在人体内可合成。 肌醇。维生素肌醇。维生素B B族中的一种，和胆碱一样是亲脂肪族中的一种，和胆碱一样是亲脂肪性的维生素。性的维生素。 维生素维生素C C。连接骨骼、牙齿、结缔组织构造；对毛。连接骨骼、牙齿、结缔组织构造；对毛细血管壁的各个细胞间有粘合功能；增加抗体，细血

5、管壁的各个细胞间有粘合功能；增加抗体，增强抵抗力；促进红细胞成熟。增强抵抗力；促进红细胞成熟。 维生素维生素P P。 维生素维生素PP(PP(烟酸烟酸) )。在细胞生理氧化过程中。在细胞生理氧化过程中起传递氢作用，具有防治癞皮病的成效。起传递氢作用，具有防治癞皮病的成效。 维生素维生素M(M(叶酸叶酸) )。抗贫血；维护细胞的正常。抗贫血；维护细胞的正常生长和免疫系统的功能。生长和免疫系统的功能。 维生素维生素T T。帮助血液的凝固和血小板的形成。帮助血液的凝固和血小板的形成。 维生素维生素U U。治疗溃疡上有重要的作用。治疗溃疡上有重要的作用。8.1 8.1 维生素维生素B6B6测定测定 1

6、 1、适用范围、适用范围 本标准适用于所添加维生素本标准适用于所添加维生素B6B6的测定。的测定。 测定范围为测定范围为0.080.083.5g/mL3.5g/mL。2 2、 原理用水提取，在原理用水提取，在pH7pH7条件下，用荧光法条件下，用荧光法测定维生素测定维生素B6B6。维生素B6测定 3 3、 试剂和溶液试剂和溶液 3.1 pH73.1 pH7缓冲液称取缓冲液称取29.3023g29.3023g磷酸氢二钠磷酸氢二钠GB 1263GB 1263和和3.8115g3.8115g柠檬酸，于柠檬酸，于100mL100mL容量瓶中，用煮沸后冷容量瓶中，用煮沸后冷却的水，溶解并定容至刻度。混匀

7、备用。却的水，溶解并定容至刻度。混匀备用。 3.2 3.2 维生素维生素B6B6标准贮备溶液称取标准贮备溶液称取40mg40mg中国药典参中国药典参照标准维生素照标准维生素B6B6，或复合维生素中国药典参照标，或复合维生素中国药典参照标准准B640mgB640mg， B1100mg B1100mg，B250mgB250mg准确至准确至0.0001g0.0001g于于100mL100mL容量瓶中，加水溶解定容至刻度，此液容量瓶中，加水溶解定容至刻度，此液1mL1mL含含400g400g的维生素的维生素B6B6。 3.3 3.3 维生素维生素B6B6标准工作溶液标准工作溶液 汲取汲取3.23.2贮

8、备液贮备液1mL1mL于于100mL100mL容量瓶中加水稀容量瓶中加水稀释至刻度，混匀，此液释至刻度，混匀，此液1mL1mL含含4g4g的维生素的维生素B6B6。维生素B6测定 4 4 仪器设备仪器设备 4.1 4.1 荧光分光光度计；荧光分光光度计； 4.2 4.2 分析天平：感量分析天平：感量0.0001g0.0001g。 4.3 4.3 实验室用器皿实验室用器皿 容量瓶容量瓶 1000mL 1000mL，100mL100mL，50mL50mL，25mL25mL。 刻度移液管刻度移液管 10mL 10mL，5mL5mL，1mL1mL。维生素B6测定 5 5 、分析步骤、分析步骤 5.1

9、5.1 试样的选取和制备试样的选取和制备 选取有代表性的试样，粉碎通过选取有代表性的试样，粉碎通过0.28mm0.28mm孔筛，孔筛，用四分法缩减至用四分法缩减至100g100g，密封保存，以防试样维，密封保存，以防试样维生素生素B6B6变化或变质。变化或变质。 5.2 5.2 测定步骤测定步骤 5.2.1 5.2.1 维生素维生素B6B6的提取的提取 称取试样称取试样0.50.52g2g，准确至，准确至0.0001g0.0001g于于100mL100mL容量瓶中，加水溶解后，定容至刻度，振容量瓶中，加水溶解后，定容至刻度，振荡荡1 12min2min，静置待沉清，或离心，静置待沉清，或离心4

10、00r/min400r/min10min10min。 维生素B6测定 5.2.2 5.2.2 试样的测定试样的测定 移取试样的上清液移取试样的上清液1mL1mL40gVB640gVB6于于25mL25mL容量瓶中，参加容量瓶中，参加3.13.1pH7pH7缓冲液至刻度，混缓冲液至刻度，混匀，用匀，用1cm1cm石英比色杯，置入荧光分光光度计内石英比色杯，置入荧光分光光度计内，于激发波长，于激发波长326nm326nm、发射波长、发射波长395nm395nm测定其测定其荧光强度。荧光强度。 同时做空白试验。同时做空白试验。维生素B6测定 5.2.3 5.2.3 工作曲线的绘制工作曲线的绘制 取取

11、0.000.00，0.500.50，1.001.00，1.501.50，2.002.00，2.50mL2.50mL维生维生素素B6B6标准工作液标准工作液3.33.3分别于分别于25mL25mL容量瓶中容量瓶中，参加，参加pH7pH7缓冲液缓冲液3.13.1至刻度，混匀，用至刻度，混匀，用1cm1cm石英比色杯，置入荧光分光光度计内，于激石英比色杯，置入荧光分光光度计内，于激发波长发波长326nm326nm、发射波长、发射波长395nm395nm测定其荧光强测定其荧光强度，以荧光强度为纵坐标，维生素度，以荧光强度为纵坐标，维生素B6B6量为横坐量为横坐标，绘制工作曲线。标，绘制工作曲线。维生素

12、B6测定 6 6 分析结果计算和表述分析结果计算和表述 维生素维生素B6B6的含量的含量mg/kgmg/kg按下式计算：按下式计算： VB6VB6mg/kgmg/kgMD/WMD/W1000/10001000/1000MD/W MD/W 式中：式中：MM工作曲线上查得维生素工作曲线上查得维生素B6B6含量，含量，g/mLg/mL； WW试样的质量，试样的质量，g g； DD试样的总体积，试样的总体积，mLmL。维生素维生素B6B6测定测定 7 7 、允许差、允许差 7.1 7.1 每个试样称取两份平行测定，取算术平均值每个试样称取两份平行测定，取算术平均值为测定结果并保存两位小数。为测定结果并

13、保存两位小数。 7.2 7.2 维生素维生素B6B6含量少于含量少于40mg/kg40mg/kg以下，平行测定以下，平行测定结果相对差值不大于结果相对差值不大于1010，维生素，维生素B6B6含量大于含量大于40mg/kg40mg/kg的平行测定结果相对差值不大于的平行测定结果相对差值不大于5 5。/P/P8.2 8.2 维生素维生素B2B2测定测定 1 1、适用范围、适用范围 本标准规定了饲料中维生素本标准规定了饲料中维生素B2B2测定方法。测定方法。 本标准适用于维生素本标准适用于维生素B2B2的测定。待测液中维生的测定。待测液中维生素素 B2B2检测浓度为检测浓度为0.050.050.2

14、g/mL0.2g/mL。维生素B2测定 2 2、方法原理、方法原理 维生素维生素B2B2即核黄素即核黄素C17H20N1O6C17H20N1O6在在440nm440nm紫外光激发下产生绿色荧光，在一定浓度范围内紫外光激发下产生绿色荧光，在一定浓度范围内 其荧光强度与核黄素浓度成正比。用连二亚硫酸其荧光强度与核黄素浓度成正比。用连二亚硫酸钠复原核黄素成无荧光物质，由复原前后荧光钠复原核黄素成无荧光物质，由复原前后荧光 强度之差与内标荧光强度的比值，计算样品核黄强度之差与内标荧光强度的比值，计算样品核黄素的含量。素的含量。维生素B2测定 3 3、试剂和溶液、试剂和溶液 3.1 3.1 盐酸溶液，盐

15、酸溶液，0.1mol/L0.1mol/L：将：将8.5mL8.5mL盐酸盐酸GB GB 622622用水稀释至用水稀释至1000mL1000mL。 3.2 3.2 盐酸溶液，盐酸溶液，1mol/L1mol/L。 3.3 3.3 氢氧化钠氢氧化钠GB 629GB 629溶液，溶液，1mol/L1mol/L。 3.4 3.4 冰乙酸冰乙酸GB 676GB 676。 3.5 3.5 冰乙酸溶液，冰乙酸溶液，0.02mol/L0.02mol/L：将：将1.8mL1.8mL冰乙酸用冰乙酸用水稀释至水稀释至1000mL1000mL。 3.6 3.6 高锰酸钾高锰酸钾GB 643GB 643溶液，溶液，40

16、g/L40g/L。 3.7 3.7 过氧化氢过氧化氢HG 31082HG 31082溶液，溶液，100mL/L100mL/L。现用现配。现用现配。 维生素B2测定 3.8 3.8 核酸素标准溶液核酸素标准溶液 3.8.1 3.8.1 核黄素贮备液核黄素贮备液：核黄素中国药典参照标准：核黄素中国药典参照标准，于五氧化二磷枯燥器中枯燥，于五氧化二磷枯燥器中枯燥24h24h，称取，称取0.0500g0.0500g，溶，溶解于解于0.02mol/L0.02mol/L乙酸溶液乙酸溶液4.54.5中，在蒸汽浴上恒速搅中，在蒸汽浴上恒速搅动直至溶解，冷却后稀释至动直至溶解，冷却后稀释至500mL500mL。盛入棕色瓶滴加甲。盛入棕色瓶滴加甲苯覆盖，低温苯覆盖，低温4 4保存。保存。 该溶液每毫升含该溶液每毫升含0.1mg0.1mg核黄素。核黄素。 3.8.2 3.8.2 核黄素贮备液核黄素贮备液：取核黄素贮备液：取核黄素贮备液4.8.14.8.110mL10mL用用0.02mol/L0.02mol/L乙酸溶液稀释至乙酸溶液稀释至100mL100mL，盛于棕色，盛于棕色瓶中滴加甲苯覆盖，低温瓶中滴