集安、露水河人参多糖中总糖含量测定

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1、- 1 - 集安、露水河人参多糖中总糖含量测定1 前 言人参( Panax ginseng C.A.M eyer)为五加科多年生草本植物,素有“百药之王”的美誉。中国最早的药学典籍神农百草经就已经把人参列为上品,具有大补元气、安神益智、生津固脱、调补五脏、强精通脉、延缓衰老等功效。人参种类繁多,不同类型的人参其品质各异、疗效不同、市场价格悬殊1。影响人参品质的因素很多,主要包括人参的生长环境、人参的种类、根的形态、采收季节以及生长年龄等。其中,人参的生长年龄被认为是影响和判断人参品质最为重要的因素。生长百年的老山参被视为珍宝,价格是普通人参的数百倍2。本实验对人参多糖中总糖含量进行了测定,方法

2、新颖、操作简便。2 材料、仪器与试药2.1 材料本实验所选用的人参样品为露水河、集安不同年生的人参,经张连学教授鉴定为五加科多年生草本植物人参(Panax ginseng C.A.Meyer ) 。集安、露水河分 7 个采收期:萌动期、出苗展叶期、 开花期、绿果期、红果期、采收期和枯萎期; 集安地区采收的是26 年生、露水河地区采收的36 年生。2.2 仪器与试药2.2.1 仪器离心机 ( 北京医用离心机厂 ) ;水浴锅(天津泰斯特有限公司) ;酒精计 ( 四川蜀牛玻璃仪器有限公司 ) ;真空干燥器 ( 四川蜀牛玻璃仪器有限公司) ;电子天平(余姚纪铭称重校验设备有限公司) ;722分光光度计

3、 (上海精密仪器厂 )。2.2.2 试药无水葡萄糖(成都化学试剂厂) ;浓硫酸;苯酚;无水乙醇;五氧化二磷;正丁醇;氯仿;氯化钠;氢氧化钠(均为北京化工厂)。3 实验方法3.1 人参多糖提取- 2 - 3.1.1 人参粗多糖的提取取 15g 人参粉末,以 10 倍量量蒸馏水浸泡过夜后,沸水煮提4 小时,再分别以 8倍量、6 倍量蒸馏水沸水煮提4 小时, 合并提取液。提取液经双层白绸子过滤, 水浴 (6070)加热浓缩至 1020mL 后,向其中加入无水乙醇至其最终浓度为80%,室温下过夜。次日 3500r/min 离心 10min 后,收集沉淀,放入盛有 P2O5的真空干燥器中真空干燥,即得人

4、参多糖4-5。3.1.2 人参粗多糖的纯化向所得的多糖沉淀中加入95%的乙醇,充分醇洗,以3500r/min 离心 10min 后,除去上清液,再向沉淀中加入乙醚(相当于沉淀10 倍量的乙醚),充分搅拌, 3500r/min离心 10min 后,除去上清液,重复三次后,将多糖沉淀放入盛有P2O5的真空干燥器中真空干燥5-6。3.2 苯酚- 硫酸法测总糖含量3.2.1 葡萄糖标准曲线精密称取无水葡萄糖约10.0mg 于 100mL 容量瓶中,以蒸馏水定容至刻度,混匀,使之浓度为 0.1mg/ml。分别吸取此溶液1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL,臵于10mL 容量瓶中,依

5、次补加蒸馏水至刻度。 分别从中取出 2ml 溶液加入 10ml 具塞刻度试管中,以蒸馏水做对照, 分别向其中加入 1.0mL6%的苯酚溶液,摇匀,再迅速加入 5.0mL的浓硫酸,充分振荡,摇匀后,冷却至室温。于波长为490nm 处测定吸光度值 A,以质量浓度为横坐标( X) ,以吸光度值( A)为纵坐标( Y) ,进行线性回归,得回归方程为:A=0.0058C-0.0459,r=0.9998,在 19.899 g线性关系良好7。3.2.2 样品中总糖含量测定准确称取适量多糖样品配制成浓度0.1mg/mL 的溶液,取 1mL 多糖样品溶液向其中加入 0.5mL6%的苯酚, 2.5mL 浓硫酸,充

6、分震荡摇匀后,冷至室温,于波长490nm处测其吸光度值 A。根据多糖样品的吸光度值,对照标准曲线计算出两地样品中的总糖含量8-9,结果见表 1、2。4 结果与分析4.1 集安人参多糖中总糖含量测定- 3 - 表 1 集安总糖含量百分比(%) Table 1 Jian total sugar content(%)日期萌动期出苗展叶 期开花期绿果期红果期采收期枯萎期二年 生31.55 39.27 38.49 36.88 36.37 32.96 33.55 三年 生33.08 41.47 40.23 39.81 38.02 35.28 36.99 四年 生33.35 43.34 42.47 41.9

7、5 39.54 35.37 38.27 五年 生38.97 49.00 47.29 45.61 43.46 40.35 41.96 六年 生43.51 52.56 51.03 49.80 47.91 44.27 45.38 从表中可以看出:(1)集安地区26 年生人参根多糖中总糖含量最大值均出现在出苗展叶期,分别为39.27、41.47、43.34、49.00和 52.56。(2)集安地区人参根多糖中总糖含量的总体规律是总糖含量最大值出现在出苗展叶期,并且随着参龄的增长而缓慢增加。4.2 露水河人参多糖中总糖含量测定表 2 露水河总糖含量百分比(%) Table 2 Lu shuihe tot

8、al sugar content (%)日期萌动期出苗展叶 期开花期绿果期红果期采收期枯萎期三年 生33.75 38.81 38.24 37.81 36.68 35.28 四年 生34.69 40.01 39.15 38.62 37.54 36.05 36.93 五年 生38.97 44.34 43.96 42.95 42.13 40.35 41.96 六年 生43.51 49.24 48.36 47.81 46.57 44.28 从表中可以看出:(1)露水河地区 36 年生人参根多糖中总糖含量最大值均出现在出苗展叶期,分别为38.81%、40.01、44.34、49.24。(2)露水河地区人

9、参根多糖中总糖含量的总体规律是总糖含量最大值出现在出苗展叶- 4 - 期,并且随着参龄的增长而缓慢增加。5 结论本实验采用了苯酚硫酸法测定人参多糖中总糖含量,得到集安、露水河两地区各年生的人参根多糖中总糖含量的总体变化规律是呈随着参龄的增长而缓慢增长的趋势。总糖含量的最高值的出现时期均在出苗展叶期,只是最高值不同。参考文献 1 中华人民共和国药典2005 年版 S 北京:化工工业出版社 2 吴建海,林宏英,赵李宏等 . 同仁堂红参与高丽红参品质的初步比较研究 J 中国中药杂志, 2007,32(7) :576 3 张峻松,贾春晓,毛多斌等 . 碘显色法测定烟草中的淀粉含量 J 烟蕈科技烟草化学

10、, 2004,5:25 4 郑虎占,董泽宏,佘靖 . 中药现代研究与应用(一) M. 北京:学苑出版社 . 1997,19 5 张树政糖生物学:生命科学中的新前沿 J. 生命的化学, 1999,19(3) :103106 6 杜昱光化学与生命科学交叉新领域糖生物学与寡糖工程 J. 中国微生态学杂志,2000,12(3) :251 7 徐任生 天然产物化学北京科学出版社 M. 2004,9 第二版 8 清水岑夫茶血糖降下作用 J. 茶( 日) ,1987 ,3 :24 27 9 汪东风,谢晓凤,王泽农等. 粗老茶中的多糖含量及其保健作用 J. 茶叶科学,1994 ,14(1) :73 74致 谢本论文是在张春红教授的悉心指导和关怀下完成的。从论文的选题、设计到完成,都得到了老师的耐心指导和无微不至的关怀。她严谨细致、一丝不苟的作风一直是我工作、学习中的榜样;她循循善诱的教导和不拘一格的思路给予我无尽的启迪。同时也感谢学长杨艳文的全程指导和大力帮助。在整个实验过程中,学长杨艳文对- 5 - 我的实验进展和生活都给予了极大的关心。谨向学长杨艳文表示由衷的感谢!最后,向多年来所有鼓励、关心、支持和帮助过我的领导、老师、师兄师姐和同学朋友表示真诚的感谢!并真诚的祝愿你们身体健康、万事如意、心想事成!

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