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1、实验九实验九人类人类X染色质的观察染色质的观察哈尔滨师范大学哈尔滨师范大学 生命科学与技术学院生命科学与技术学院遗传学教研室遗传学教研室2010年年3月月一、实验目的一、实验目的 1. 掌握观察与鉴别掌握观察与鉴别X染色质的简易方法；染色质的简易方法； 2. 识别识别X染色质的形态特征及所在部位。染色质的形态特征及所在部位。 1. X-染色质的发现染色质的发现p1949年年M.L.Barr等研究发现：等研究发现： 雌猫神经元细胞间期核内雌猫神经元细胞间期核内凝缩的深染小体。凝缩的深染小体。p进一步发现：其它雌性哺乳动物（包括人类）也同样有这种进一步发现：其它雌性哺乳动物（包括人类）也同样有这种
2、结构。结构。p而且在其它细胞的间期核中也可以见到这一结构，称之为而且在其它细胞的间期核中也可以见到这一结构，称之为Barr小体小体（巴氏小体巴氏小体）。）。p研究表明，巴氏小体是研究表明，巴氏小体是X染色体异固缩的结果，也称为染色体异固缩的结果，也称为X染染色质色质或或X小体小体，在细胞周期中比有活性的，在细胞周期中比有活性的X染色体复制染色体复制稍晚。稍晚。二、实验原理二、实验原理2.莱昂氏假说莱昂氏假说 (Lyon hypothesis)p1961年年 M.F.Lyon提出：提出： 正常雌性哺乳动物正常雌性哺乳动物体细胞体细胞中的两条中的两条X染色体之一染色体之一在遗传性状表达上是在遗传性
3、状表达上是失活的；失活的； 在同一个体的不同细胞中，在同一个体的不同细胞中， X染色染色体失活是体失活是随机随机而而恒定恒定的；的； 失活现象发生在失活现象发生在胚胎发育的早期胚胎发育的早期。3.剂量补偿效应剂量补偿效应 (dosage compensation)o由于雌性由于雌性体细胞体细胞中的两个中的两个X染色体中的一个发生染色体中的一个发生异固缩异固缩（也称（也称为为Lyon化现象化现象），失去活性，这样保证了雌雄两性体细胞中，失去活性，这样保证了雌雄两性体细胞中都只有一条都只有一条X染色体保持转录活性染色体保持转录活性，使两性，使两性X连锁基因产物的连锁基因产物的量保持在相同水平上量保
4、持在相同水平上，这种效应称为，这种效应称为X染色体的剂量补偿。染色体的剂量补偿。o Barr小体的数目小体的数目 X染色体数目染色体数目 14.莱昂氏假说的修正（新莱昂氏假说）莱昂氏假说的修正（新莱昂氏假说）o（1）提出：）提出：1967年，美国的遗传学家年，美国的遗传学家Ohno 提出提出45，X46，XX；47XXY46，XY，这两个不等式是否成立的疑问。这两个不等式是否成立的疑问。 o（2）按照莱昂假说应该是两者完全相同，但）按照莱昂假说应该是两者完全相同，但45，X与与47，XXY实际是两种综合症。实际是两种综合症。 o（3）修正：）修正：1974年，失活的年，失活的X染色体上并非染色
5、体上并非全部基因都呈莱昂化失活。全部基因都呈莱昂化失活。 5. X染色质检查的应用染色质检查的应用oX染色质检查广泛应用于临床，作为染色质检查广泛应用于临床，作为性别鉴定性别鉴定和和性染色体异常性染色体异常的一种辅助诊断方法。的一种辅助诊断方法。 例如：克氏综合症（例如：克氏综合症（XXY）、特纳氏综合征）、特纳氏综合征（XO） 、其它性染色体异常的患者如、其它性染色体异常的患者如XXX，XXYY等。等。三、实验材料、器具和药品三、实验材料、器具和药品材料材料：女性口腔黏膜细胞、发根细胞。：女性口腔黏膜细胞、发根细胞。器具器具：显微镜、载玻片、盖玻片、无菌：显微镜、载玻片、盖玻片、无菌 牙签等
6、。牙签等。药品药品： 60%醋酸醋酸 、45%的醋酸的醋酸 、 石炭酸品红。石炭酸品红。四、实验方法四、实验方法1.口腔黏膜细胞口腔黏膜细胞X染色质（染色质（Barr小体）显示方法小体）显示方法 取材取材：漱口：漱口34次后，用无菌牙签从面颊部内侧刮取次后，用无菌牙签从面颊部内侧刮取口腔黏膜细胞，第一次的刮取物弃去，在原位重复刮口腔黏膜细胞，第一次的刮取物弃去，在原位重复刮23下，涂在载玻片上；下，涂在载玻片上； 固定固定：加一滴：加一滴60%醋酸醋酸固定固定5min，用滤纸吸去多余，用滤纸吸去多余醋酸；醋酸； 染色染色：加一滴石炭酸品红染色：加一滴石炭酸品红染色2min； 制片制片：盖上盖片
7、，：盖上盖片，垫上上滤纸用拇指用拇指压片；片； 镜检镜检：低倍：低倍高倍。高倍。2. 发根毛囊根毛囊细胞的胞的X染色质（染色质（Barr小体）小体）显示方法示方法 取材取材：拔取女性：拔取女性带毛囊毛囊细胞的胞的头发，置于，置于载玻片上；玻片上； 固定固定：在毛囊上滴加一滴：在毛囊上滴加一滴45%的醋酸的醋酸（或（或5mol/L盐酸）酸） 固定固定5min，吸掉多余的醋酸；，吸掉多余的醋酸； 染色染色：用：用镊子将子将软化的毛囊剥下，加一滴化的毛囊剥下，加一滴石炭酸品石炭酸品红 染色染色23min； 制片制片：盖上盖片，：盖上盖片，垫上上滤纸用拇指用拇指压片；片； 镜检：低倍：低倍高倍。高倍。
8、X染色质的辨别：染色质的辨别：（1 1）低倍镜下检出典型的可数细胞，标准是：）低倍镜下检出典型的可数细胞，标准是： 核质呈网状或细颗粒状分布核质呈网状或细颗粒状分布 核膜清晰，核无缺损核膜清晰，核无缺损 染色适度染色适度 周围无杂菌周围无杂菌 在高倍镜下进一步观察。在高倍镜下进一步观察。五、观察结果五、观察结果pX染色质是一结构致密的浓染小体，轮廓清楚染色质是一结构致密的浓染小体，轮廓清楚，大小大小11.5m ；p形形态：微凸形、三角形、卵形、短棒形微凸形、三角形、卵形、短棒形等，常附于核等，常附于核膜膜边缘或靠近内或靠近内侧。 （2）高倍镜下观察）高倍镜下观察X染色质的形态特征及所在部位：染
9、色质的形态特征及所在部位：X染色质染色质箭头所示为巴氏小体箭头所示为巴氏小体（女性细胞（女性细胞左左中存在，男性细胞中存在，男性细胞右右中没有）中没有）o从理论上讲从理论上讲，正常女性的间期细胞中都应该有一个，正常女性的间期细胞中都应该有一个X染色质，但染色质，但事实上事实上由于个体的生理状态、染色方由于个体的生理状态、染色方法、染色技术以及法、染色技术以及X染色质在细胞核中的位置不同，染色质在细胞核中的位置不同，实际检查中不可能在每个细胞中都看到。实际检查中不可能在每个细胞中都看到。o正常女性间期细胞核中正常女性间期细胞核中X染色质阳性率一般约为染色质阳性率一般约为1030%，有的可高达，有的可高达50%以上，在男性间期以上，在男性间期细胞核中则平均低于细胞核中则平均低于1%。六、作业六、作业1.观察观察50个女性可数的细胞，并计算巴氏小个女性可数的细胞，并计算巴氏小体细胞所占的百分比。体细胞所占的百分比。2.绘制绘制3个典型的显示个典型的显示X染色质的细胞。染色质的细胞。
