《2.1微波辅助萃取气相色谱质谱联用分析石蒜中的加兰他敏ppt课件》由会员分享，可在线阅读，更多相关《2.1微波辅助萃取气相色谱质谱联用分析石蒜中的加兰他敏ppt课件（33页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、微波辅助萃取微波辅助萃取气相色谱气相色谱质谱联用质谱联用分析石蒜中的加兰他敏分析石蒜中的加兰他敏指导老师：指导老师：李攻科教授李攻科教授报告人：报告人：汪军霞汪军霞1.前言前言n前苏联科学家首次分离出了加兰他敏。前苏联科学家首次分离出了加兰他敏。n加兰他敏是一种具有可逆性和选择性的乙酰胆碱酯酶加兰他敏是一种具有可逆性和选择性的乙酰胆碱酯酶抑制剂抑制剂AChE），可以作为治疗），可以作为治疗AD的药物。的药物。 1.1加加兰他敏及其他敏及其氢溴酸溴酸盐的化学性的化学性质和和组成成分子式分子式 ：C17H21NO3 分子量分子量 ：287.36化学名称化学名称 ：4a,5,9,10,11,12-H
2、exahydro-3-methoxy-11-methyl-6H-benzofuro3a,3,2-ef2benzazepin-6-ol 1.2分析研究现状分析研究现状u药理作用研究概况药理作用研究概况u加兰他敏的传统提取方法加兰他敏的传统提取方法u加兰他敏的分析检测方法加兰他敏的分析检测方法1.2.1药理作用研究概况药理作用研究概况u重症肌无力重症肌无力u脊髓前角灰质炎小儿麻痹症后遗症脊髓前角灰质炎小儿麻痹症后遗症u术后肠肌麻痹术后肠肌麻痹u尿潴留尿潴留u解箭毒解箭毒u阿尔茨海默病阿尔茨海默病1.2.1.1药理作用特点药理作用特点u具具有有可可逆逆性性和和选选择择性性的的乙乙酰酰胆胆碱碱酯酯酶酶
3、抑抑制剂制剂AChE）u作用时间长作用时间长u无毒性或致癌作用无毒性或致癌作用u耐受性好耐受性好1.2.2加兰他敏的传统提取方法概述加兰他敏的传统提取方法概述n传统生产工艺：将石蒜通过乙醇热提，洗涤，萃取，重结晶，得到氢溴酸加兰他敏原料药。n缺点：能耗高、原辅料损耗大、生产周期n长，而且加兰他敏提取不完全。1.2.3加加兰他敏的分析他敏的分析检测方法方法综述述u薄层色谱薄层色谱TLC）u高效液相色谱高效液相色谱HPLC）u气相色谱法气相色谱法GC）u免疫分析法免疫分析法IA）u高效毛细管电泳高效毛细管电泳HPCE）u联用方法联用方法1.3微波辅助萃取技术微波辅助萃取技术u微波辅助萃取原理微波辅
4、助萃取原理u微波辅助萃取特点微波辅助萃取特点u微波辅助萃取系统微波辅助萃取系统uMAE在植物提取中的应用在植物提取中的应用1.3.1微波辅助萃取原理微波辅助萃取原理u微波加热有两种机理：离子传导和偶极微波加热有两种机理：离子传导和偶极子转动。子转动。u物质吸收微波的程度主要取决于其介电物质吸收微波的程度主要取决于其介电常数，被萃取物质进入介电常数小，微常数，被萃取物质进入介电常数小，微波吸收能力相对较差的萃取剂中波吸收能力相对较差的萃取剂中。1.3.2微波辅助萃取特点微波辅助萃取特点u升温速度快升温速度快u加热均匀加热均匀u选择性好选择性好u萃取效率高萃取效率高u伴有生物效应伴有生物效应1.3
5、.3微波辅助萃取系统微波辅助萃取系统高压密闭微波萃取系统：磁控管波导管微波腔波形搅拌器循环装置转台1.3.4MAE在植物提取中的应用在植物提取中的应用u最早的报道来自最早的报道来自1986年，匈牙利学者年，匈牙利学者Ganzler K用微波提取了羽扇豆、玉米等作物中的油脂、用微波提取了羽扇豆、玉米等作物中的油脂、棉籽酚等有效成分棉籽酚等有效成分 。u国内外已有很多将国内外已有很多将MAE应用于中药中有效成应用于中药中有效成分提取的文献报道。分提取的文献报道。u本实验室的研究人员在这方面也做了大量的工本实验室的研究人员在这方面也做了大量的工作。作。 2实验部分实验部分u仪器及操作条件仪器及操作条
6、件u试剂和样品试剂和样品u样品处理过程样品处理过程u定性和定量定性和定量2.1仪器及操作条件仪器及操作条件仪器仪器Mars型微波炉型微波炉CEM，USA）；）；R201旋旋转转蒸蒸发发仪仪上上海海申申科科机机械械研研究究所所）；HP-6890GC-5973MSD配配 G1701B.02.05工作站工作站Hewlett-Packard，USA）;DB-5MS熔融毛细管柱熔融毛细管柱J&W，CA）。）。操作条件操作条件u色色谱谱条条件件：升升温温程程序序初初温温150，保保持持3min，以以6/min的的速速度度升升至至300，保保持持5min。进进样样口口温温度度250，不不分分流流进进样样。载
7、载气气为为高高纯纯氦氦气气，流流速速1.0mL/min。u质质谱谱条条件件：接接口口温温度度280，EI，电电子子能能量量70eV，离离子子源源温温度度230，四四极极杆杆温温度度150，质质量量扫扫描描范范围围50550amu。2.2试剂和样品试剂和样品u氢溴酸加兰他敏标准品购自氢溴酸加兰他敏标准品购自Sigma公司。公司。u甲甲醇醇、乙乙醇醇、石石油油醚醚沸沸程程：90120）、乙乙醚醚、丙丙酮酮、乙乙酸酸乙乙酯酯、盐盐酸酸、浓浓氨氨水水、碳碳酸酸钠钠分分析析纯纯试试剂剂，广广州州化化学试剂厂）。学试剂厂）。u石蒜：鳞茎棕黑色片状物，有特殊香味。石蒜：鳞茎棕黑色片状物，有特殊香味。2.3样
8、品处理过程样品处理过程u前处理：前处理：粉碎，过筛，储存在干燥器中。粉碎，过筛，储存在干燥器中。u微波辅助萃取：定量称取样品放入微波微波辅助萃取：定量称取样品放入微波罐中，加入一定体积的萃取溶剂，在一罐中，加入一定体积的萃取溶剂，在一定的控制温度下萃取一定的时间。取出定的控制温度下萃取一定的时间。取出萃取液，过滤，滤液旋干后甲醇溶解，萃取液，过滤，滤液旋干后甲醇溶解，定容至定容至5mL。u乙乙醇醇加加热热回回流流萃萃取取：准准确确称称取取1 1 g g石石蒜蒜样样品品，放放入入圆圆底底烧烧瓶瓶中中，加加入入一一定定体体积积的的萃萃取取溶溶剂剂，水水浴浴加加热热回回流流2 2 h h后后，冷冷却
9、却过过滤滤，再再旋旋转转蒸蒸发发至至近近干干，用用甲甲醇醇定定容容至至5 5 mLmL，取，取1 L1 L用用GC-MSGC-MS测定。测定。2.4定性和定量定性和定量采采用用未未经经衍衍生生化化的的GC-MS方方法法进进行行定定性性，以以峰峰面面积积定定量，不分流进样，进样量量，不分流进样，进样量1L。图一图一加兰他敏甲醇标准溶液色谱图加兰他敏甲醇标准溶液色谱图图二石蒜样品的甲醇溶液色谱图标记为1的是加兰他敏的峰）3结果与讨论结果与讨论u微波萃取溶剂的选择微波萃取溶剂的选择u微波条件的优化微波条件的优化u微波辅助萃取方法的线性范围、检出限、微波辅助萃取方法的线性范围、检出限、回收率和精密度回
10、收率和精密度u和传统方法的对比和传统方法的对比3.1微波萃取溶剂的选择微波萃取溶剂的选择u正确选择萃取溶剂是实现高效率萃取的关键正确选择萃取溶剂是实现高效率萃取的关键u步骤。步骤。uMAE中，所选的溶剂应满足以下条件：中，所选的溶剂应满足以下条件：u1具有吸收微波及将微波转化为热能的具有吸收微波及将微波转化为热能的u才干；才干；u2能够选择性的从样品基体中将待测物分离能够选择性的从样品基体中将待测物分离萃萃u取出来；取出来；u3方便于后续处理过程。方便于后续处理过程。uu表1不同溶剂萃取效率的比较溶剂溶剂甲醇甲醇乙醇乙醇丙酮丙酮 乙酸乙酯乙酸乙酯加兰他敏加兰他敏的含量的含量0.02320.00
11、64 3.2微波条件的优化微波条件的优化实验号实验号颗颗 粒粒 度度/mesh溶溶剂剂体体积积/ml辐辐射射温温度度/C辐辐射射时时间间/min峰面积峰面积相对峰面积相对峰面积12040106551190630236.8220402075152139457666.1320403085252701214583.5440601075252263187869.9540602085532366940100640603065153147510697.27601085151890484158.48602065252198145967.9960307552535062978.3表表2微波萃取条件的正交实验设
12、计及峰面积结果微波萃取条件的正交实验设计及峰面积结果OAD9(43)）表3各因素不同水平对应的峰面积之和及平均值（%）注：Ki峰面积之和；ki峰面积平均值。颗粒度颗粒度mesh溶剂体积溶剂体积mL辐射温度辐射温度辐射时间辐射时间minK160313023534430216536286769623871K286473924757429756937708371774523K366236929838378807828392671625482k120194341178143402178762223207957k228824641252476582312569423924841k322078976279
13、459602609464223875161图三颗粒度、溶剂体积、控制温度、辐射时间于萃取效率的影响表表4优化的微波萃取条件优化的微波萃取条件颗粒度颗粒度mesh溶剂体积溶剂体积mL辐射温度辐射温度辐射时间辐射时间min4060208553.3微波辅助萃取方法的线性范围、微波辅助萃取方法的线性范围、检出限、回收率和精密度检出限、回收率和精密度表表5线性范围、检出限、回收率和精密度线性范围、检出限、回收率和精密度线性方程线性方程Y=3.3048E5X1.2784E7线性相关系数线性相关系数R0.9996线性范围线性范围10100mgL-1检出限检出限3.42mgL-1回收率回收率99.3%RSD7
14、.9%(n=6)3.4和传统方法的对比和传统方法的对比表表6微波萃取法与乙醇加热回流萃取法测定微波萃取法与乙醇加热回流萃取法测定加兰他敏的结果比较加兰他敏的结果比较加兰他敏的含量加兰他敏的含量/mgL-1RSD/%(n=6)萃取时间萃取时间/min微波萃取法微波萃取法96.64.45乙醇加热回乙醇加热回流萃取法流萃取法99.49.91204.结论结论本实验建立了本实验建立了MAEGCMS分析石蒜中分析石蒜中加兰他敏的方法，并且利用正交设计实验优化加兰他敏的方法，并且利用正交设计实验优化了微波萃取测定石蒜样品中加兰他敏的条件了微波萃取测定石蒜样品中加兰他敏的条件,方法平均回收率方法平均回收率99
15、.3%，检出限，检出限3.42mgL-1，RSD=4.4%，线性范围，线性范围10100mgL-1。将本方法与乙醇加热回流提取法相比，结果表将本方法与乙醇加热回流提取法相比，结果表明本方法省时、精密度好、操作简便，适合于明本方法省时、精密度好、操作简便，适合于石蒜中加兰他敏的快速测定。石蒜中加兰他敏的快速测定。致致谢u在在本本论论文文的的研研究究工工作作和和写写作作过过程程中中，得得到到了了许许多多人人的的指导、关心和帮助。指导、关心和帮助。u首首先先，要要衷衷心心感感谢谢我我的的导导师师李李攻攻科科教教授授，感感谢谢她她对对我我认真严谨的悉心指导和无微不至的关怀。认真严谨的悉心指导和无微不至的关怀。u在在整整个个论论文文设设计计和和操操作作过过程程中中，栾栾伟伟师师兄兄给给予予极极大大的的支支持持和和帮帮助助，从从他他身身上上我我学学到到了了大大量量的的知知识识和和科科学学的的研研究究方方法法；实实验验室室的的许许多多老老师师和和同同学学也也给给予予了了我我大大量量帮助和有益指点帮助和有益指点。u特特此此鸣鸣谢谢中中山山大大学学化化学学与与化化学学工工程程学学院院综综合合化化学学实实验验创新研究基金的资助创新研究基金的资助！谢谢
