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1、1.1 DNA 重组技术的操作工具一，操作工具（一）限制酶来源：原核生物特点：识别双链 DNA分子的某种特定核苷酸序列,并使每一条链中特定的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂.结果：产生粘性末端和平末端（二） DNA连接酶分类：大肠杆菌 DNA连接酶和 T4DNA连接酶作用于磷酸二酯键（三）运载体种类：质粒，动植物病毒，噬菌体衍生物运载体要具备的条件：一个或多个限制酶切割位点自我复制才能有标记基因可编辑资料 - - - 欢迎下载一，目的基因的猎取：1.2 基因工程的基本操作程序可编辑资料 - - - 欢迎下载1. 目的基因：符合人们需要的,编码蛋白质的结构基因 .2. 猎取目的基因的方法（ 1）从
2、基因文库中猎取目的基因基因组文库基因文库cDNA 文库（ 2）利用 PCR 技术扩增目的基因. PCR：是一项在生物体外复制特定 DNA 片段的核酸合成技术.前提条件：已知目的基因的核苷酸序列.原理： DNA 复制 （ 3）人工合成法：基因较小,核苷酸序列已知,可以人工合成.二，基因表达载体的构建（ 1）表达载体的组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因等.（ 2）启动子：位于基因的首端,它是RNA聚合酶的结合的部位,驱动基因转录产生mRNA .（ 3）终止子：位于基因的尾端,终止转录.（ 5）标记基因：鉴别受体细胞是否含有目的基因.（ 6）不同的受体细胞及目的基因导入受体细胞的方法不同,基因
3、表达载体的构建上也会有所差别.三，将目的基因导入受体细胞方法： 1将目的基因导入植物细胞1农杆菌转化法2_基因枪法3花粉管通道法 2. 将目的基因导入动物细胞方法：显微注射 技术.可编辑资料 - - - 欢迎下载3. 将目的基因导人微生物细胞方法：用Ca2+处理细胞.四，目的基因的检测与鉴定（ 1）检测转基因生物的染色体的DNA上是否插入了目的基因方法： DNA分子杂交 （ 2）检测目的基因是否转录出了mRNA方法 :DNA 分子杂交 （ 3）检测目的基因是否翻译成蛋白质的方法： 抗原 - 抗体杂交 1.4蛋白质工程的崛起1. 基因工程在原就上只能生产自然界已存在的蛋白质.2. 蛋白质合成的过
4、程：从预期的蛋白质功能动身,设计预期蛋白质结构,估量应有的氨基酸序列,找到相对应的脱氧核苷酸序列.3. 蛋白质工程可以制造自然界中本没有的蛋白质.2.1 植物细胞工程一.植物组织培养1. 概念：在（无菌 ）和（人工）把握条件下,将离体的器官，（组织），（细胞）,培养在人工配制的（ 培养基 ）上, 赐予适宜的培养条件, 诱导其产生 （ 愈伤组织 ），从芽, 最终形成完整的植株.2. 过程（注：表示过程名称.表示培养基名称.）（）（）外植体幼苗（）（）过程中主要是细胞的分裂 .过程中既有 分裂 ,又有（分化）.3. 原理：（细胞全能性）4. 培养基（ 1）外形：（ 固体）培养基（ 2）成分： 1）
5、有机养分成分 2 ） 无机养分成分3 ）激素 4 ）琼脂（ 3）培养基中的有机养分物质通常是（蔗糖）.（ 4）培养基中的无机养分物质包括（水 ），（ 无机盐）.5. 植物组织培养中涉及到的激素种类及作用.（ 生长素）,作用是诱导细胞分裂和（根 ）的分化 .（细胞分裂素）,促进细胞分裂和（ 芽 ）的分化.（ 赤霉素）,刺激培养细胞的（伸长）,使从芽或小植株快速长高.6. 判定题（相关概念的懂得）（ 1）细胞再分化,是指已经分化的细胞失去其特有的结构和功能的过程.（ F）（ 2）在理论上植物的任何一个细胞都具有发育成完整植株的潜力.（ T）（ 3）生物的组织器官的不同,从根本上说是由于细胞中表达出
6、的蛋白质的种类不同.（ T）（ 4）植物细胞培养的结果只能是发育成完整的植株.F二，植物体细胞杂交可编辑资料 - - - 欢迎下载1. 概念：将（ 不同）种的植物体细胞,在确定条件下融合成（杂种细胞 ）,并将其培养成新的植物体的过程.2. 原理：（细胞全能性）3. 过程：（ 1）去除（细胞壁）,获得有活力的（原生质体）.方法：（酶解法 ）,需要的酶（纤维素酶），（ 果胶酶）.（ 2）诱导（ 原生质体 ）融合.人工诱导方法： （物理法 ），（化学法 ）,常用的化学试剂是（ PEG ）.融合类型有（ 3 ）种.（ 3）（细胞壁再生）.该过程进行时细胞中哪种细胞器比较活跃（高尔基体）.（ 4）杂种细
7、胞的组织培养. （过程同植物组织培养. ） 三，实际应用1. 植物组织培养技术的优点：1） 快速繁殖2）保持物种的优良特性2. 在进行作物脱毒是,常常选用的植物的（分生区）,如茎尖.3. 所谓人工种子就是以植物组织培养的得到的（胚状体），（ 不定芽），顶芽和腋芽等材料,经过人工（薄膜）包装得到的种子.4. 单倍体育种的优点： （缩短育种年限）.5. 单倍体育种的过程：植物花粉进行（花药离体培养）长成幼苗,然后用（秋水仙素 ）处理使染色体加倍,这样便可得到稳固遗传的优良品种.6. 通过植物细胞发酵,可以获得很多种细胞产物,例如（蛋白质）， 香料 等.可编辑资料 - - - 欢迎下载一，动物细胞培
8、养2.2 动物细胞工程可编辑资料 - - - 欢迎下载1. 概念 是指从动物机体中取出相关的组织,分散成单个细胞, 然后,放在适宜的培养基中, 让细胞生长和增殖.组织的选取选择（幼龄）动物或（胚胎）细胞用（胰蛋白酶）或（胶原蛋白酶）处理组织,将其分散成单个细胞.培养基从状态上来看, 属于 液体 培养基. 从养分成分上看, 属于（ 合成）培养基.动物细胞培养液中除了一些已知的养分成特别,仍需要添加（血清），（血浆 ）等自然成分.增殖的方式是（有丝分裂）.动物细胞培养的条件：1） 无毒，无菌环境 2 ） 养分 3）温度和 ph4）气体环境2. 过程（1） 取动物（组织块）（2） 剪碎（3） 用（胰
9、蛋白酶）处理分散成单个细胞（消化）（4） 制成（细胞悬液）（5） 转入培养液中进行（原代）培养.（6） 当细胞显现（接触抑制） ,重新消化处理进行（传代 ）培养.3. （ 10）代以内的细胞,保护正常的二倍体核型.（ 10-50）代的细胞,细胞核型可能会发生 转变.（ 50代以后）的细胞,少部分细胞获得不死性.目前使用的细胞是（冷冻）储存的（ 10 代）以内的细胞.4. 动物细胞培养中, CO2的作用是（ 添加抗生素的目的是（防止染菌保护培养液 PH ）.定期更换培养液的目的是）.（排除代谢废物）.可编辑资料 - - - 欢迎下载5. 判定（1）动物细胞培养可以培养出单个个体.（ F）（2）动
10、物细胞培养只能得到更多的细胞.二，动物细胞核移植（ F）1. 概念 将动物的一个细胞的（核）,移入一个已经（去除）细胞核的（卵母细胞）中,使其重组并发育成一个新的（胚胎）,最终发育成功一个个体.2. 过程（1） 取体细胞,进行（动物细胞培养）.（2） 取（卵母细胞）,在体外培养到（减二中期 ）时期,然后去核（3） 诱导体细胞与去核（卵母细胞）融合,构建重组（胚胎）.诱导方法有（物理法）（化学法）（灭活病毒 ）.（4） 用物理，化学方法激活受体细胞完成分裂和发育.（5） 胚胎（移植）（6） 产生克隆动物.三，动物细胞融合1. 概念 将两个或多个细胞, 结合成一个细胞的过程. 融合后形成的具有原先
11、两个或多个细胞遗传特性的单核细胞,称为（杂交细胞）.2. 动物细胞融合常用的诱导方法（物理法）（化学法） （灭活病毒 ）.四，单克隆抗体化学性质单一，特异性强的抗体称为单克隆抗体.2. 特点：特异性强，灵敏度高3. 过程：（ 1）免疫小鼠注射特定的抗原.（ 2）猎取 B 淋巴细胞.（ 3）从患骨髓瘤的小鼠体内猎取骨髓瘤细胞.（ 4）诱导骨髓瘤细胞和B 淋巴细胞融合.（ 4）选择培养基选择出杂交瘤细胞.（ 5）选择出能产生专一抗体的杂交瘤细胞.（ 6）注射到小鼠腹腔内或体外培养.（ 7）从小鼠腹水中或培养液中提取抗体.4. 杂交瘤细胞的特点：既能快速大量繁殖,又能产生专一的抗体.1.概念由单个
12、B 淋巴细胞经过无性繁殖（克隆） ,形成基因型相同的细胞群,这一细胞群所产生的3.1 体内受精和早期胚胎发育一，精子的发生1. 场所： 睾丸的曲细精管 2. 时期：从 初情期开头,直到 生殖机能衰退终止.3. 发生的三个阶段：可编辑资料 - - - 欢迎下载精原细胞 有丝分裂可编辑资料 - - - 欢迎下载第一阶段多个精原细胞染色体复制可编辑资料 - - - 欢迎下载初级精母细胞M次级精母细胞其次阶段 M精子细胞可编辑资料 - - - 欢迎下载第三阶段_变形 精子可编辑资料 - - - 欢迎下载4. 精子细胞的变形过程细胞核精子头的主要部分高尔基体顶体中心体精子的尾线粒体线粒体鞘细胞内的其它物
13、质原生质滴二，卵子的发生1. 场所： 输卵管，卵巢 2. 时期：从 胚胎显现性别分化 到生理机能衰退（绝经） .3. 排卵：指 卵子从_卵泡排出.4. 卵泡形成是在时期完成的.5. 发生的三个阶段： 卵原细胞可编辑资料 - - - 欢迎下载有丝分裂多个卵原细胞胎儿时期可编辑资料 - - - 欢迎下载初级卵母细胞卵泡被细胞包围,形成 _卵泡.可编辑资料 - - - 欢迎下载M 次级卵母细胞第一极体M 一般不进行 M 在受精过程 _完成受精第 二 极 体 合子 退化消逝三，受精1. 场所:_ 输卵管 2. 定义：受精是 精子和 卵子,结合形成 合子的过程.3. 受精的实质是： 精核与卵核结合 4. 受精的标志： 在卵黄膜与透亮带之间显现两个极体 5. 受精预备包括： 精子获能和 卵子的预备.6. 当卵子发育到 减数其次次分裂中期 期时,才具备受精
