阴道微生态评价课件

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1、阴道微生态评价及其适宜技术 阴道微生态评价课件护理生殖道关注微生态 最重要！阴道微生态评价课件阴道粘膜阴道正常菌群阴道免疫系统阴道微生态概念阴道防御系统阴道微生态是阴道最重要的防御系统阴道微生态评价课件阴道原籍菌(乳酸杆菌)数量:8x107 cfu/ ml5%95%123 正常育龄妇女阴道菌群由六种不同种类的细菌以及念珠菌、支原体等组成。正常阴道内有100种微生物存在。这些微生物在阴道内形成生态平衡。阴道菌群（阴道的微生态系统）阴道微生态概念阴道微生态评价课件CFU (Colony-Forming Units) 经培养所得菌簇形成单位的英文缩写。 细菌（可见）和真菌的测量单位。cfu:colo

2、ny-forming unit，菌落形成单位，将稀释后的一定量的菌液通过浇注或涂布的方法，让其内的微生物单细胞一一分散在琼脂平板上，待培养后，每一活细胞就形成一个菌落。与常规利用显微镜对微生物数量进行测量不同，主要是对可见（即多数情况下形成菌落）的细菌数量进行测量的单位。 意思就是每毫升菌液中含有多少单细胞！ 阴道微生态评价课件阴道粘膜上皮细胞纵切面示意图纵切面示意图（过路菌）乳杆菌（原籍菌）（条件致病菌）是由不同种属的宿主传来的是其自身宿主个体对其无免疫反应或低免疫反应，是宿主个体固有的菌群 是由同种属不同宿主个体传来的阴道微生态概念阴道微生态评价课件乳杆菌的作用机制u分解糖原，维持阴道酸性

3、环境。u产生多种抑菌物质：乙酸、16-18碳脂肪酸 H202、乳酸菌素、硬脂酸等。u竞争粘附：也称占位性保护。u竞争营养物质：大量定位于阴道中的乳杆菌处 于竞争优势状态，利用阴道上皮 细胞中的糖原，减少其他细菌的 碳源供应，通过竞争营养物质而 干扰一些厌氧菌如白色假丝酵母 菌（白念）的生长。阴道微生态评价课件维持酸性环境形成保护性菌膜杀灭致病菌乳酸杆菌正常阴道菌群作用阴道微生态平衡的核心：维持乳酸菌特别是产H2O2乳酸菌在阴道菌群中的优势地位！ 在阴道粘膜表面形成一层保护性菌膜，防止入侵微生物在阴道粘膜上定植 乳酸菌产生的乳酸使阴道分泌物维持酸性环境；乳酸菌产生的H2O2可杀灭入侵的致病菌。阴

4、道微生态概念阴道微生态评价课件 乳杆菌数量减少，生化指标标改变变， 阴道微生 态态破坏阴道菌群失调 各类阴道炎 加重阴道菌群失调各种诱因各类阴道炎的共性-源于或伴有微生态破坏！为什么要关注阴道微生态阴道微生态评价课件菌群演变造成菌群结构改变，特点：1、厌氧菌需氧菌、等条件致病菌大量增加 2、乳酸菌特别是产过氧化氢乳酸菌减少或消失所有的阴道感染都源于或伴有阴道微生态改变阴道微生态评价课件 乳酸菌%厌氧菌%加德纳菌%支原体% LB- LB正常80-10070-100 10-400-30 20-40宫颈炎10-4010-3030-5020-4060-80BV 0-20 0-10 40-70 60-8

5、0 40-60滴虫阴道炎10-400-2010-300-3020-40霉菌阴道炎20-500-4020-3010-4020-30 老年性阴道炎0-200-1040-6020-4050-60阴道微生态评价课件 通过形态学、生物化学、 免疫学和分子生物学 等 方法所获得的阴道菌群 数量和功能方面的信息 分析阴道菌群结构的演替正常优势菌的菌群数量与功能变化条件致病微生物菌群数量与功能变变化外来致病微生物菌群数量与功能变变化 机体反应应水平如何评价阴道微生态？ -阴道微生态评价的内涵为什么要关注阴道微生态阴道微生态评价课件形态学生物标志物 菌群数量与功能的变化形态学评价-菌群数量的变化： 形态学的方法

6、系统的方法-阴道微生态评价内容阴道微生态评价的内容阴道微生态评价课件 标本中细菌分布、排列的密集程度， 即每克或每毫升标本中的菌落数。 分级标准(放大倍10100观察每视野平均细菌数)I级 （记为“+”）1个9个 II级 （记为“+”） 10个99个 III级 （记为“+”） 100个以上 IV级 （记为“+ +”） 细菌聚集成团 (涂片中所见细菌种类) I级 （记为“+”） 能辨别13种细菌； II级 （记为“+”） 能辨别46种细菌； III级 （记为“+”） 能辨别710种细菌； IV级 （记为+） 能辨别11种以上细菌。(局部有无炎症-菌群的致病性) 有无白细胞、脓细胞渗出， 有无吞噬

7、现象等。？菌群的密集度机体炎性反应菌群的多样性优势菌阴道微生态形态学评价 存在的问题 形态学评价结果的可靠性 与实验室人员的技能和责任有关 不能了解阴道菌群中正常优势菌和有害菌的功能阴道微生态评价的内容阴道微生态评价课件 A、正常优势菌功能生物学标志 B、致病微生物与条件致病微生 物增殖的生物学标志 C、机体反应性的生物学标志了解菌群数量的变化形态学评价生物标志物了解菌群数量与功能的变化阴道微生态系统评价阴道微生态评价的内容阴道微生态评价课件 唾液酸苷酶BV 门冬酰胺蛋白酶霉菌性阴道炎胱胺酰蛋白酶滴虫性阴道炎乳酸脱氢酶急性化脓性阴道炎透明质酸酶BV、淋菌性阴道炎白细胞酯酶宫颈炎及各种阴道感染

8、短链脂肪酸（如乙酸、琥珀酸）增加 单胺和多胺增加（胺试验阳性） 菌胞壁糖类（如阿拉伯醇糖）增加阴道微生态评价的方法生物化学方法微生物学方法分子生物学方法免疫学方法1 优势菌(乳酸菌)功能的生化标志物2 致病与条件致病微生物增殖的生化标志物3 机体反应性的生化标志物 乳酸菌代谢包括：过氧化氢、 乳 酸 乳酸菌素微生物代谢产物细菌、衣原体等病原体大量增殖白细胞吞噬病原体过多病原体释放的水解酶和毒素分解白细胞壁白细胞酯酶释放到胞外分泌物中白细胞酯酶活性增高。阴道微生态评价课件过氧化氢浓度SNA活性LE活性生态优势菌指标致病菌指标宿主反应指标卫卫生部十年百项计项计划推广项项目江西省星火计计划项项目浙江

9、省医药卫药卫生科技重点推广项项目 了解阴道菌群结构和功能的变化， 评价阴道的微生态状况阴道微生态评价适宜技术 阴道微生态评态评价适宜技术术-细菌性阴道病联合测定技术介绍阴道微生态评价课件标本采集要规范 各种病原体的性质和检测要求的不同，决定了标本的种类、取材部位、和保存条件标本运输方式等都有不同，采集标本上如有错误或疏忽，都会影响检验结果。标本采集的规范阴道微生态评价课件 一般阴道感 染诊断的取 材，须取阴 道后穹隆部 位的分泌物。取材前，要用一取材前，要用一支棉签揩去取材支棉签揩去取材 部位堆积的脓液，部位堆积的脓液，用另一支棉签取用另一支棉签取材，为提高阳性材，为提高阳性率，还可采用重率，

10、还可采用重复两次取材或两复两次取材或两个部位的标本混个部位的标本混 合后检验的方法合后检验的方法。 要尽量使用 大一些的棉 签取样，要 将棉签在取 材部位旋转 并停留20秒 要使用试剂盒 配套的保存液 保存标本。标 本在2-8保存 不宜超过2天。取材之前24小时内，应无性交、无盆浴或阴道冲洗；在48小时内未使用阴道润滑剂或阴道“兴奋剂”等化学物质一般要求取材部位要准确取材方法要得当标本量要充足标本要正确保存及时检验正确取材要把握一下几点标本采集的规范阴道微生态评价课件检验原理nH2O2阴道乳酸杆菌标志物n唾液酸苷酶NAase加德纳菌、游动弯曲杆 菌等BV致病菌的标志物。n白细胞酯酶炎性细胞的标

11、志物。阴道微生态评价课件H2O2（反应装置上部的反应孔） 阴道液中过氧化氢经过过氧化物酶作用，释放出新生态氧，后者在4-氨基安替吡啉存在下，使3,5-二氯-2-羟基苯磺酸氧化成红色或紫色，在反应系统中加入3,5-二氯-2-羟基苯磺酸的拮抗物，当标本中H2O2浓度2mol/L，反应结果呈红色或紫色，呈色深度与H2O2 浓度成正比，标本中H2O2浓度 2mol/L，反应结果呈蓝色。结果判读：u 阴性：显红色、紫色或蓝紫色u 阳性：蓝色u参考范围： 2mol/L为阴性阴道微生态评价课件唾液酸苷酶活性测定（反应装置中部的反应孔） 唾液酸苷酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚神经氨酸盐，释放出溴吲哚基遇重氮盐

12、起反应呈红色或紫色，呈色深度与唾液酸苷酶活性呈正比。结果判读：u阴性：不显色或黄色u阳性：红色、紫色或蓝色，显蓝色表示唾液酸 苷酶活性浓度很高。u参考范围： 7U/ml为阴性阴道微生态评价课件白细胞酯酶（反应装置下部的反应孔） 白细胞酯酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸盐，释放出溴吲哚基，后者在氧的条件下呈蓝色或绿色，呈色深度与白细胞酯酶活性成正比。结果判读：参照比色板比色判读结果u阴性：“-”或“”u阳性：“+”、“+”、“+”u参考范围：白细胞酯酶7U/ml为阴性阴道微生态评价课件 产过氧化氢乳酸 菌占优势地位 粘膜修复 炎症消失 无引发BV的 细菌繁殖正 常正 常阴 性异 常增 高阳 性

13、过氧化氢浓度LE活性SNa活性乳酸菌减少或消失各种阴道感染致病菌、条件致病菌增加阴道微生态评价适宜技术阴道微生态评价课件纠正了以白细胞升高才为“炎症”的生殖道感染的概念阴道感染诊断治疗思路的新突破临床用途指导妇产科临床医师从微生态角度重新审视妇科感染性疾病；关注感染及治疗后的阴道微生态状况，树立“将阴道微生态恢复正常作为阴道炎治疗的最终目标”的理念。A、弥补现有白带常规检查只做形态学检查、不做生化检查，不能准确判断感染的程度及阴道微生态、不能评价预后等不足；B、 阴道微生态评价C、从微生态角度评价阴道炎是否治愈；D、阴道生态制剂的用药指标；E、了解产后阴道生态，确定是否恢复性生活；F、BV诊断

14、与疗效评价，需氧菌阴道炎、衣原体感染筛查。阴道微生态评价意义阴道微生态评价课件机体反应的生化标志物 白细胞对细菌的吞噬过程阴道微生态评价的内容阴道微生态评价课件 白细胞数量与白细胞酯酶的关系 白细胞酯酶与被破坏的白细胞数量成正比而白细胞数量与采样、涂片、月经周期有关阴道微生态评价课件检测结果参考阴道微生态评价课件序号过过氧化氢浓氢浓度唾液酸苷酶白细细胞酯酯酶临临 床 判 读读12mol/L-正常、无致病菌感染22mol/L-+阴道清洁度下降，阴道炎症32mol/L+-BV致病菌感染早期42mol/L+BV感染早期，并有可能伴有其他混合感染，如宫颈炎。52mol/L+-细菌性阴道炎62mol/L-月经期、阴道冲洗后，阴道生态平衡遭破坏72mol/L-+其他生殖道感染82mol/L+细菌性阴道病，预后不良，伴有其他感染。n阴道微生态评价课件阴道分泌物检验结果n阴道微生态评价课件线索细胞（clue cell） 在脱落的阴道鳞状上皮细胞上粘附有大量的加德纳尔菌,上皮细胞互相粘连成团,细胞边缘不齐似锯齿壮,表面粗糙,有许多大小不等的颗粒或斑点,似撒有一层胡椒粉。核结构模糊不清或碎解,有时细胞呈溶解样。 阴道微生态评价课件阴道微生态评价课件