奥氮平和细胞色素P450酶1A2基因多态性临床效果关系研究分析奥氮平可以有效的控制精神分裂症,但会导致体重增加、血脂异常、转氨酶升高、泌乳素升高等不良反应奥氮平通过细胞色素P450酶1A2(CYP1A2)氧化代谢生成4’-N-脱甲基-奥氮平(DMO),而DMO生成与奥氮平清除有关[1,2],并且在体外表现出较大个体差异[3]本研究拟通过观察精神分裂症患者CYP1A2(rs2470890)、CYP1A2(rs2069521)基因位点多态性与奥氮平临床疗效,探讨rs2470890、rs2069521基因多态性与奥氮平临床疗效之间的关系一、材料、对象与方法1研究对象来自郑州大学第一附属医院2015年5月到2016年7月的住院或门诊患者104例为研究对象本研究经郑州大学第一附属医院科研和临床试验伦理委员会批准所有患者均签署知情同意书诊断与入选标准符合中国精神病障碍分类及诊断标准(CCMD-3)中关于精神分裂的症诊断标准阳性和阴性症状量表(PANSS)总分>60分,年龄13～58岁,汉族2药品、试剂与仪器奥氮平,规格:每片5mg,批号:160118,江苏豪森药业有限公司生产血液基因组柱式小量提取试剂盒CW2087,康为世纪生物科技有限公司生产。
22R离心机,美国BeckmanCoulter公司产品3治疗方法所有患者均予以奥氮平治疗,起始剂量为5.0～10.0mg·d-1,根据患者的年龄、疗效、药物不良反应逐渐加量,直至取得较好疗效或达到最大推荐剂量,最大剂量为10.0～20.0mg·d-1所有患者均治疗6周4观察指标与疗效评定于治疗前和治疗后,测量所有患者的体重,用酶偶联法检测生化指标水平于治疗前和治疗后,用PANSS量表进行评估,并用PANSS减分率来评估临床疗效PANSS减分率=[(治疗前评分-治疗后评分)/(治疗前评分-基线30分)×100%]将减分率≥50%设为有效组,减分率<50%设为无效组5CYP1A2基因多态性检测采集患者外周静脉血2～3mL置于EDTA抗凝管中,按照血液基因组柱式小量提取试剂盒说明书提取患者DNA于-20℃保存采用SequenomMassArray系统基因分型方法对患者进行基因检测,所需引物均用AssayDesigner3.1软件进行引物设计CYP1A2(rs2470890)基因上游引物为5’-ACGTTGGATGGCCTCAGAATGGTGGTGTCT-3’,下游引物为5’-ACGTTGGATGTCTACGGGCTGACCATGAAG-3’,退火温度46.1℃;CYP1A2(rs2069521)基因上游引物为5’-ACGTTGGATGTCCTTTTCCTGTTCCAGGAC-3’,下游引物为5’-ACGTTGGATGTGTCACAGCCAAGAGGAATC-3’,退火温度53.6℃。
5μLPCR反应体系含有双蒸水1.8μL,10×PCR缓冲液0.5μL,25nmol·L-1氯化镁溶液0.4μL,25mmol·L-1dNTP混合液0.1μL,0.5μmol·L-1引物混合液1μL,5U·μL-1DNA聚合酶0.2μL,10ng·μL-1DNA1μL反应过程为94℃预变性15min,94℃变性20s,分别在46.1℃、53.6℃退火30s,72℃延伸1min,循环45次,72℃最后延伸3min6统计学处理用SPSS17.0软件进行统计分析计数资料用χ2检验用HWE检验基因型是否符合Hardy-Weinberg平衡,两样本间用Mann-Whiteny秩和检验,多个样本间用Kruskai-Wallis秩和检验二、结果1患者服药前后体重和生化指标变化经过6周的奥氮平治疗,检测结果表明患者服药前后谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、甘油三酯(TG)、泌乳素(PRL)均明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05),见表1服药前104名患者的体重为(62.62±12.87)kg,服药后体重为(65.67±12.91)kg,前后有显著性差异(P<0.05)表1奥氮平对各检测指标的影响2精神分裂症患者奥氮平治疗前后PANSS量表分值变化精神分裂症患者的PANSS评分量表治疗前为80.25±7.01,第1周末为67.54±7.81,第2周末为57.64±4.88,第4周末为47.75±4.22,第6周末为42.18±2.92。
第1周末与治疗前相比,PANSS总分有显著性减小(P<0.05);第2周末与第1周末相比,PANSS总分有显著性减小(P<0.05);第4周末与第2周末相比,PANSS总分有显著性减小(P<0.05);第6周末与第4周末相比,PANSS总分也有显著性减小(P<0.05)3不同疗效精神分裂症患者基因型和等位基因频率分布奥氮平治疗有效组、无效组基因型和各等位基因频率分布见表2其中CYP1A2(rs2470890)、CYP1A2(rs2069521)基因型均有4例患者未测出CYP1A2(rs2470890)、CYP1A2(rs2069521)基因型和等位基因均没有显著性差异(P>0.05),(rs2470890)、(rs2069521)单核苷酸多态性位点的分布符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05),表明本研究样本具有良好的代表性表2有效组和无效组多药耐药基因CYP1A2(rs2470890)、CYP1A2(rs2069521)的等位基因和基因型频数和频率分布的比较(n,%)三、讨论细胞色素P450酶1A2(CYP1A2)基因位于15号染色体上,包括7个外显子和6个内含子,是重要的肝药酶,其酶活性表达水平个体间差异可达10～200倍[4]。
KIM等[5]人研究分析了150名韩国志愿者DNA样本的378个SNP基因位点,发现rs2470890最小等位基因(MAF)为0.153,rs2069521的MAF为0.057,与本研究结果rs2470890的MAF为0.100,rs2069521的MAF为0.060基本一致KUO等[6]人研究了158名中国台湾抑郁症患者CYP1A2(rs2069521)基因多态性和艾司西酞普兰的代谢的关系,结果显示CYP1A2的遗传变异可能会影响艾司西酞普兰的代谢SINGH等[7]人研究了33例患有精神分裂症的印度人,结果显示rs2470890单核苷酸多态性(SNP)与奥氮平临床疗效没有显著关联本研究结果表明了CYP1A2(rs2470890)、CYP1A2(rs2069521)在中国人中等位基因频率,得出这两个SNP位点与奥氮平临床疗效的无显著性关联但是目前研究样本量较小,仍然需要进一步大样本量重复研究,由于影响奥氮平的临床疗效应为多基因共同作用,下一步将继续探究其他基因与奥氮平的临床疗效关系刘克锋,赵杰,杨勇杰,薛莹,张晓坚.细胞色素P450酶1A2基因多态性与奥氮平临床疗效的相关性分析[J].中国临床药理学杂志,2020,36(12):1631-1634.。