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1、实验五 小麦萌发前后淀粉酶活力的比较一、实验目的n1学习测定淀粉酶活力的方法。n2了解小麦萌发前后淀粉酶活力的变化。二、实验原理n休眠种子中主要含有-淀粉酶，而-淀 粉酶是在萌发过程中形成的。种子萌发 时，淀粉酶活性随萌发时间迅速增加， 将淀粉分解成小分子糖类，供幼苗生长 。n-淀粉酶水解非还原端的第二个-1,4- 糖苷键，水解产物为麦芽糖。u淀粉的水解产物麦芽糖有还原性能与3，5-二硝基水杨酸试剂反应，使其还原生成红色3-氨基-5-硝基水杨酸。u在一定范围内，其颜色深浅与淀粉酶水解产物的浓度成正比，可用麦芽糖（或葡萄糖）浓度表示，用比色法测定淀粉生成的还原糖的量，以单位重量样品在一定时间内生
2、成的麦芽糖的量表示酶活力。 三、试剂 n1. 0.1标准麦芽糖溶液 20毫升：精确称量 100毫克麦芽糖，用少量水溶解后，移入 100ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度。n2pH 6.9，0.02摩尔L磷酸缓冲液 100毫 升n31淀粉溶液100毫升：1克可溶性淀粉溶 于100毫升 0.02摩尔L磷酸缓冲液，其中含 有 0.006摩尔L氯化钠。n413,5-二硝基水杨酸试剂: 1g 3,5- 二硝基水杨酸溶于20毫升2摩尔L的氢 氧化钠溶液和50毫升水中；再加人30克 酒石酸钾钠，定容至100毫升。若溶液 混浊，可过滤。n51氯化钠溶液300毫升n6海砂5克四、操作步骤n1种子发芽：n小麦种子浸泡2
3、.5 h后，放人25恒温箱内或在室温下发芽。n 2 酶液提取：n 取发芽第三天或第四天的幼苗15株，放人 乳钵内，加适量石英砂，加 1氯化钠溶液10 毫升，用力磨碎。在室温下放置 20分钟，搅 拌几次。将提取液离心（1500转min）6 7分钟。将上清液倒人量筒，测定酶提取液的 总体积。进行酶活力测定时，将酶提取液用 Ph6.9的磷酸缓冲液稀释10倍。n取干燥种子15粒作为对照（提取步骤同上）。n3酶活力测定：n （1）取25毫升刻度试管4支。编号。按下表要求加人各试剂（各试剂须25预热10分钟）。1（干种子 ）2（湿种子 ）3（标标准管 ）4（空白管 ） 酶液0.50.5-标标准麦芽 糖溶液
4、-0.5-淀粉溶液1111蒸馏馏水-0.5n将各管混匀，放在25，水浴中保温3 分钟后，立即向各管中加人1 3，5-二 硝基水杨酸溶液2毫升。（？）n（2）取出各试管，放人沸水浴中加热5 分钟。冷至室温，加水稀释至25毫升。 将各管充分混匀。n（3）用空白管作对照；在500nm处测 定各管的光吸收值，记录结果。n4计 算n本实验规定：25时3min内水解淀粉释放1mg麦芽糖所需的酶量为1个酶活力单位（U）。n根据溶液的浓度与光吸收值成正比的关系，即：A标准A未知C标准C未知nC（酶液管浓度）A酶C标准A标准n则15粒种子或幼苗的总活力单位= C酶N酶V酶nN为酶液的稀释倍数nV为提取酶液的总体积
