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1、临床兽医学专业毕业论文临床兽医学专业毕业论文 精品论文精品论文 镉对体外培养大鼠大脑皮镉对体外培养大鼠大脑皮质神经细胞的毒性损伤及质神经细胞的毒性损伤及 NACNAC 保护效应的研究保护效应的研究关键词：镉关键词：镉 大脑皮质神经细胞大脑皮质神经细胞 毒性损伤毒性损伤 细胞凋亡细胞凋亡 脂质过氧化脂质过氧化摘要：为探讨镉对体外培养大鼠大脑皮质神经细胞的毒性机理，本研究建立了 体外培养新生 24h 内 SD 大鼠大脑皮质神经细胞的镉损伤模型。采用尼氏染色法、 荧光染色法、MTT 法及脂质过氧化相关酶试剂盒测定等方法，利用倒置相差显 微镜、透射电子显微镜、荧光显微镜、流式细胞仪等观察并检测添加不同
2、浓度 的醋酸镉(5mol/L、10mol/L、20mol/L)12h 后，对神经细胞的形态学变 化、凋亡率、线粒体膜电位、细胞内Ca2+i、ROS 含量以及脂质过氧化相关酶 的影响，并采用乙酰半胱氨酸(NAC)对醋酸镉进行干预，评价其对神经细胞的保 护效果，以及用免疫组化法测定镉对神经细胞内金属硫蛋白(MT)表达的影响。 结果显示：(1)体外原代培养的神经细胞在第 6d 形态最佳、活力最强，可用于 进一步试验研究。(2)不同浓度镉对培养的神经细胞分别作用 12h、24h，结果 显示，染镉组细胞胞体短直径和突起长度较对照组有极显著差异 (Plt;0.01)，随镉浓度的递增，抑制作用增强；染镉 1
3、2h 后，线粒体肿胀 变形，嵴模糊，基质外流，且呈现剂量效应关系。(3)Hoechst33258 染色 5min，染镉组细胞核皱缩、呈新月形，染色质致密浓染，甚至核碎裂；细胞凋 亡率较对照组逐渐上升。(4)各染镉组细胞线粒体膜电位逐渐降低，其中 20mol/L 组较对照组有极显著差异(Plt;0.01)。(5)各染镉组细胞内 Ca2+i 下降，与对照组比较，差异极显著(Plt;0.01)。(6)镉作用培养 的神经细胞 12h 后，细胞内 ROS 含量随镉浓度的增加，逐渐上升，其中 10mol/L 组和 20mol/L 组与对照组相比，差异极显著(Plt;0.01)。 GSH-Px 活性较对照组
4、降低，20mol/L 组差异显著(Plt;0.05)，而 CAT 活 性和 MDA 含量则极显著升高(Plt;0.01)，SOD 活性与对照组相比，逐渐升 高，但差异不显著(Pgt;0.05)。(7)NAC 保护组与染镉组比较，各保护组 细胞凋亡率、ROS 含量、细胞内Ca2+i、CAT 活性均有所下降，GSH-Px 活性升 高，SOD 活性及 MDA 含量下降。(8)染镉组 MT-III 表达量明显增加。 结论： (1)镉可抑制细胞分化，影响神经细胞形态，减少细胞间连接，破坏线粒体的正 常形态，且呈现剂量效应关系。(2)镉诱导神经细胞凋亡是镉引起细胞损伤的机 制之一，表现为神经细胞凋亡数增多
5、，线粒体膜电位下降、细胞内Ca2+i 上 升，呈现剂量效应关系；(3)镉的神经毒性与细胞的脂质过氧化有关，表现为神 经细胞的脂质过氧化相关酶的活性变化，且该变化与染镉剂量存在剂量效应关 系；(4)NAC 具有拮抗镉毒性的作用，表现为 NAC 对镉引起的神经细胞凋亡率上 升，细胞内Ca2+i 上升具有一定的抑制作用，同时在一定程度上可缓解镉引 起的氧化损伤；(5)镉暴露导致神经细胞内 MT-III 表达量增加。正文内容正文内容为探讨镉对体外培养大鼠大脑皮质神经细胞的毒性机理，本研究建立了体 外培养新生 24h 内 SD 大鼠大脑皮质神经细胞的镉损伤模型。采用尼氏染色法、 荧光染色法、MTT 法及
6、脂质过氧化相关酶试剂盒测定等方法，利用倒置相差显 微镜、透射电子显微镜、荧光显微镜、流式细胞仪等观察并检测添加不同浓度 的醋酸镉(5mol/L、10mol/L、20mol/L)12h 后，对神经细胞的形态学变 化、凋亡率、线粒体膜电位、细胞内Ca2+i、ROS 含量以及脂质过氧化相关酶 的影响，并采用乙酰半胱氨酸(NAC)对醋酸镉进行干预，评价其对神经细胞的保 护效果，以及用免疫组化法测定镉对神经细胞内金属硫蛋白(MT)表达的影响。 结果显示：(1)体外原代培养的神经细胞在第 6d 形态最佳、活力最强，可用于 进一步试验研究。(2)不同浓度镉对培养的神经细胞分别作用 12h、24h，结果 显示
7、，染镉组细胞胞体短直径和突起长度较对照组有极显著差异 (Plt;0.01)，随镉浓度的递增，抑制作用增强；染镉 12h 后，线粒体肿胀 变形，嵴模糊，基质外流，且呈现剂量效应关系。(3)Hoechst33258 染色 5min，染镉组细胞核皱缩、呈新月形，染色质致密浓染，甚至核碎裂；细胞凋 亡率较对照组逐渐上升。(4)各染镉组细胞线粒体膜电位逐渐降低，其中 20mol/L 组较对照组有极显著差异(Plt;0.01)。(5)各染镉组细胞内 Ca2+i 下降，与对照组比较，差异极显著(Plt;0.01)。(6)镉作用培养 的神经细胞 12h 后，细胞内 ROS 含量随镉浓度的增加，逐渐上升，其中
8、10mol/L 组和 20mol/L 组与对照组相比，差异极显著(Plt;0.01)。 GSH-Px 活性较对照组降低，20mol/L 组差异显著(Plt;0.05)，而 CAT 活 性和 MDA 含量则极显著升高(Plt;0.01)，SOD 活性与对照组相比，逐渐升 高，但差异不显著(Pgt;0.05)。(7)NAC 保护组与染镉组比较，各保护组 细胞凋亡率、ROS 含量、细胞内Ca2+i、CAT 活性均有所下降，GSH-Px 活性升 高，SOD 活性及 MDA 含量下降。(8)染镉组 MT-III 表达量明显增加。 结论： (1)镉可抑制细胞分化，影响神经细胞形态，减少细胞间连接，破坏线粒
9、体的正 常形态，且呈现剂量效应关系。(2)镉诱导神经细胞凋亡是镉引起细胞损伤的机 制之一，表现为神经细胞凋亡数增多，线粒体膜电位下降、细胞内Ca2+i 上 升，呈现剂量效应关系；(3)镉的神经毒性与细胞的脂质过氧化有关，表现为神 经细胞的脂质过氧化相关酶的活性变化，且该变化与染镉剂量存在剂量效应关 系；(4)NAC 具有拮抗镉毒性的作用，表现为 NAC 对镉引起的神经细胞凋亡率上 升，细胞内Ca2+i 上升具有一定的抑制作用，同时在一定程度上可缓解镉引 起的氧化损伤；(5)镉暴露导致神经细胞内 MT-III 表达量增加。 为探讨镉对体外培养大鼠大脑皮质神经细胞的毒性机理，本研究建立了体外培 养
10、新生 24h 内 SD 大鼠大脑皮质神经细胞的镉损伤模型。采用尼氏染色法、荧光 染色法、MTT 法及脂质过氧化相关酶试剂盒测定等方法，利用倒置相差显微镜、 透射电子显微镜、荧光显微镜、流式细胞仪等观察并检测添加不同浓度的醋酸 镉(5mol/L、10mol/L、20mol/L)12h 后，对神经细胞的形态学变化、凋 亡率、线粒体膜电位、细胞内Ca2+i、ROS 含量以及脂质过氧化相关酶的影响， 并采用乙酰半胱氨酸(NAC)对醋酸镉进行干预，评价其对神经细胞的保护效果， 以及用免疫组化法测定镉对神经细胞内金属硫蛋白(MT)表达的影响。结果显示： (1)体外原代培养的神经细胞在第 6d 形态最佳、活
11、力最强，可用于进一步试验 研究。(2)不同浓度镉对培养的神经细胞分别作用 12h、24h，结果显示，染镉组细胞胞体短直径和突起长度较对照组有极显著差异(Plt;0.01)，随镉浓 度的递增，抑制作用增强；染镉 12h 后，线粒体肿胀变形，嵴模糊，基质外流， 且呈现剂量效应关系。(3)Hoechst33258 染色 5min，染镉组细胞核皱缩、呈新 月形，染色质致密浓染，甚至核碎裂；细胞凋亡率较对照组逐渐上升。(4)各染 镉组细胞线粒体膜电位逐渐降低，其中 20mol/L 组较对照组有极显著差异 (Plt;0.01)。(5)各染镉组细胞内Ca2+i 下降，与对照组比较，差异极 显著(Plt;0.
12、01)。(6)镉作用培养的神经细胞 12h 后，细胞内 ROS 含量随 镉浓度的增加，逐渐上升，其中 10mol/L 组和 20mol/L 组与对照组相比， 差异极显著(Plt;0.01)。GSH-Px 活性较对照组降低，20mol/L 组差异显 著(Plt;0.05)，而 CAT 活性和 MDA 含量则极显著升高(Plt;0.01)， SOD 活性与对照组相比，逐渐升高，但差异不显著(Pgt;0.05)。(7)NAC 保 护组与染镉组比较，各保护组细胞凋亡率、ROS 含量、细胞内Ca2+i、CAT 活 性均有所下降，GSH-Px 活性升高，SOD 活性及 MDA 含量下降。(8)染镉组 MT
13、- III 表达量明显增加。 结论：(1)镉可抑制细胞分化，影响神经细胞形态， 减少细胞间连接，破坏线粒体的正常形态，且呈现剂量效应关系。(2)镉诱导神 经细胞凋亡是镉引起细胞损伤的机制之一，表现为神经细胞凋亡数增多，线粒 体膜电位下降、细胞内Ca2+i 上升，呈现剂量效应关系；(3)镉的神经毒性与 细胞的脂质过氧化有关，表现为神经细胞的脂质过氧化相关酶的活性变化，且 该变化与染镉剂量存在剂量效应关系；(4)NAC 具有拮抗镉毒性的作用，表现为 NAC 对镉引起的神经细胞凋亡率上升，细胞内Ca2+i 上升具有一定的抑制作用， 同时在一定程度上可缓解镉引起的氧化损伤；(5)镉暴露导致神经细胞内
14、MT- III 表达量增加。 为探讨镉对体外培养大鼠大脑皮质神经细胞的毒性机理，本研究建立了体外培 养新生 24h 内 SD 大鼠大脑皮质神经细胞的镉损伤模型。采用尼氏染色法、荧光 染色法、MTT 法及脂质过氧化相关酶试剂盒测定等方法，利用倒置相差显微镜、 透射电子显微镜、荧光显微镜、流式细胞仪等观察并检测添加不同浓度的醋酸 镉(5mol/L、10mol/L、20mol/L)12h 后，对神经细胞的形态学变化、凋 亡率、线粒体膜电位、细胞内Ca2+i、ROS 含量以及脂质过氧化相关酶的影响， 并采用乙酰半胱氨酸(NAC)对醋酸镉进行干预，评价其对神经细胞的保护效果， 以及用免疫组化法测定镉对神
15、经细胞内金属硫蛋白(MT)表达的影响。结果显示： (1)体外原代培养的神经细胞在第 6d 形态最佳、活力最强，可用于进一步试验 研究。(2)不同浓度镉对培养的神经细胞分别作用 12h、24h，结果显示，染镉 组细胞胞体短直径和突起长度较对照组有极显著差异(Plt;0.01)，随镉浓 度的递增，抑制作用增强；染镉 12h 后，线粒体肿胀变形，嵴模糊，基质外流， 且呈现剂量效应关系。(3)Hoechst33258 染色 5min，染镉组细胞核皱缩、呈新 月形，染色质致密浓染，甚至核碎裂；细胞凋亡率较对照组逐渐上升。(4)各染 镉组细胞线粒体膜电位逐渐降低，其中 20mol/L 组较对照组有极显著差
16、异 (Plt;0.01)。(5)各染镉组细胞内Ca2+i 下降，与对照组比较，差异极 显著(Plt;0.01)。(6)镉作用培养的神经细胞 12h 后，细胞内 ROS 含量随 镉浓度的增加，逐渐上升，其中 10mol/L 组和 20mol/L 组与对照组相比， 差异极显著(Plt;0.01)。GSH-Px 活性较对照组降低，20mol/L 组差异显 著(Plt;0.05)，而 CAT 活性和 MDA 含量则极显著升高(Plt;0.01)， SOD 活性与对照组相比，逐渐升高，但差异不显著(Pgt;0.05)。(7)NAC 保 护组与染镉组比较，各保护组细胞凋亡率、ROS 含量、细胞内Ca2+i、CAT 活性均有所下降，GSH-Px 活性升高，SOD 活性及 MDA 含量下降。(8)染镉组 MT- III 表达量明显增加。 结论：(1)镉可抑制细胞分化，影响神经细胞形态， 减少细胞间连接，破坏线粒体的正常形态，且呈
