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1、梅毒酶联免疫方法在临床诊断中的应用上海市皮肤病性病医院言暮喜蓑需盖伟霉1 6 5【摘要】目的了解梅毒酶联免疫吸附方法在临床诊断中的应用价值。方法应用4 种不商品牌的梅毒酶联免疫吸附试剂( 1 P E 璐 ) 检测5 3 份梅毒、”份非梅毒血清样本。以临床诊断为标准。对相关试剂进行评价。螭果4 种试剂的敏感性分别为：1 0 0 、9 4 3 、蛇5 、9 2 5 。特异性均为：1 ，与临床的符合率为：1 0 0 、9 6 7 、蟠6 、野6 咛6 ；豫I 勰梅毒补的备期梅毒敏感性和特异性均为1 0 0 ：4 份结果与樯床不符合的标本，其o D 值均接近临界值( 锄啦值) 。结论国产1 P 一瞰试
2、剂检测结果总体与临床较符台建议1 P 一融对读数在“灰区”的标本进行双孔复涮或使用另一种方法进行检测。 关t 谓】酶联免疫吸附试验；梅毒确诊试验；I 期梅毒；麻风；s L E ；试剂评价目前，国内实验室梅毒确诊试验以梅毒螺旋体明胶凝集试验( 1 P P A ) 方法为主。1 9 7 5 年开始出现的梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验( I I P E u S A ) ，随着基因工程表达的梅毒螺旋体特异性抗原的出现，已被血站、体检单位等机构陆续使用。1 P E u s A试验主要特点是：检测特异性和敏感性有所提高，适合于大批量标本的梅毒特异性抗体的检测。然而，实验室人员对I P E u s A 试验的临
3、床应用依然 有争议【l t 2 t 8 J 。为确切了解国产讦一姒试验的特性，探索其在性病临床上的应用可能性，进行本次研究。报告如下。1 材料与方法2 0 Q 5 年9 月至2 0 Q 5 年1 1 月上海市皮肤病性病医院门诊及病房病人血清共9 0 份。所有血清标本均置一2 0 保存、备用。I 、期、潜伏梅毒的诊断均按照中华人民共和国国家标准梅毒诊断标准及处理原则 ；疗后梅毒均为本院门诊确诊后随访的梅毒患者；麻风、系统性红斑狼疮( s L E ) 均为临床确诊患者，并且其梅毒非特异性抗体( R 豫) 检测结果阴性；非特异性抗体检测生物学假阳性者否认有非婚性接触史，且1月后随访排除梅毒可能，其中
4、包括孕妇、S 比、麻风等；H + S YI 为确诊患有I 期梅毒的 y 感染者。具体构成见表1 。1 1 试剂的选择四一E L I S A 试剂：选择经国家有关部门合法注册的、占有一定市场份额的国产 即一E u s A 试剂。参与评估的厂家有上海、珠海、北京、厦门等。本次实验的所用试荆均由厂家无偿提供。t 2 方法从一2 0 冰箱中取出事先留取的 9 0 份血清标本，恢复至室温。将4 种卵一I s A 试 剂随机编号( A D ) ，唧A 试剂编为E 。1 P E L I S A 试验由经验丰富的实验人员操作：由2 位高年资的技术人员监督本次试验的全过程，并比对试验结果。使用同一台洗板机( 美
5、国宝特B i o T 极出产的E L x 5 D ) 洗板、同一台酶标仪( 美国宝特B i o 一1 I 雠出产的E L x 8 0 0 ，采用单孔光源对反应孔逐一读数) 读取O D 值。实验的具体操作步骤和结果判断严格按照各试剂盒说明书。对结果与临床不符合的标本，取双孔复测，作为该试剂最终结果。以梅里埃的梅毒血清学质控品作为本次实验的质控。本次试验结果全部录入E x c E L ，对实验结果使用配对校正z 2 统计。 2 结果 2 1 口一E 璐A 试剂检测9 0 份血清结果：由 表1 可见，什一融试剂敏感性和特异性分别为：A 试剂1 0 0 、1 0 0 ；B 试剂9 4 3 、1 0 0
6、 ；C 试荆9 2 5 、1 0 0 ；D 试剂9 2 5 、1 0 0 ；相对临床的符合串分剐为：1 0 0 、9 6 7 、9 5 6 、9 5 6 。2 21 P F _ J J S A 试剂检测对期、潜伏梅毒、息有I 期梅毒的v 感染者以及疗后梅毒的敏感性均为1 0 0 。4 种试剂对I 期梅毒检测的敏感性分别为：1 0 0 、8 5 7 、8 1 O 和8 1 O 。与临床I期梅毒不符合的标本中，包括2 例硬下疳暗视野显 微镜镜检找到梅毒螺旋体，血清础R 为阴性唧A 为I 临界弱阳性，其1 P E 啦I 的O D 值接近c I l 协癌值。1 6 6采14 种T P E L I S
7、A 试剂与T P P A 试剂检测9 0 份血清结果临床诊断例数至一生一旦一旦一旦一+一+一+一+一+一I 期梅毒2 12 102 101 831 741 74期梅毒1 01 001 001 001 001 00潜伏梅毒9909090909 0疗后梅毒l l1 10I l0i 10i 101 10H + S Y l22020202020麻风1 501 501 501 501 501 5s L E90909090909 R P R 假阳性1 001 001 001 001 001 0 刖3030303030 3总计9 05 3 ”5 33 75 0 柏4 94 l4 94 12 3T P E L
8、 I S A 试荆与T P P A 试荆检测结果之间的比较。我们用日本富士公司产品T P P A 试剂 对全部样品进行了检测( 结果见表1 ) ，与1 P E L I S A 试剂之问的结果比较，发现这几种试剂之间的结果差异无统计学意义( P O 0 5 ) 。详见表2 。衰2T P P A 与4 种1 P E L I S A 试剂培果的比较( z 2 毪验结果)璺璺望兰 聋P蟹PX 2P掣P3 讨论4 种T P E L I S A 试剂的原理都是一步双抗原夹心法。除A 试剂外，其它几种试荆的敏感性还应有待提高。这样，对于I 期梅毒的标本就能有较好的检出率。已有研究表明。r T P 4 7 、
9、r T P l 7 和r T P l 5 是梅毒苍白螺旋体特异性抗原，使用这3 种重组表达相关抗原的E L I S A 试剂，有非常好的敏感性和特异性 3 - 7 】。但B 、c 、D 试剂依然对I 期梅毒标本产生漏检现象，推测可能与抗原纯度、几种包被抗原含量的构成比和工艺等有关。陈坤等 9 J 报导不同抗原多肽片段嵌合表达，在检测中存在敏感性的差异。已有报道，T P E L I S A 对肿瘤、R F 等标本的检浏具有良好的特异性。我们的研究中，对于麻风士垦挂焦塑壅瘟墅堕皇蕉型堂基：蒸墼堡堑：和S L E 标本的检测，各T P E L I S A 试剂具有很高的特异性。周洪伟 1 和王传发【
10、8 认为T P E L I S A 法有较好的敏感性和特异性，可以作为梅毒的确诊实验。T P E L I S A 试剂总体来说对于I I 期、潜伏和疗后梅毒的敏感性和特异性都比较好，对于I 期梅毒 的敏感性尚需提高。这4 种口一E L I S A 试剂的结果判断中仅提供了阴性、阳性两种结果计算公式，没有设定“灰区”。我们发现，O D 读数接近c u t o f f 值的标本( o 5 S C O 1 ) ，其结果判断有一定的不可靠性。故建议有关试剂厂商能够设定“灰区”，检测人员对于读数位于“灰区”的标本能够采取双孔复测或者采用第二种方法进行检测。国产1 P E L I S A 试剂总体质量尚可
11、，且该法有利于对实验进行室内质量控制和室间质评。在其他同行进一步深入研究的基础上，应该结合患者的病史和临床表现，让国产T P E L I S A 试剂在临床上逐步开展运用。 参考文献 1 周洪伟。# 松，三种方法检铡梅毒螺旋体抗体的比较 J 】擞生精学杂志，2 0 0 5 ，2 5 ( 3 ) ：9 9 一I G o ( 2 程艳杰王广杰壬旭等梅毒螺旋体血清学检测方法的实验室评价 J 】中国皮肤性病学杂志2 0 0 5 1 9 ( 8 ) ：5 0 3 5 0 4 3 】z r 曲lM ，M 蛐I ，B 缸篁1 9 , e ta 1 R 呻由h I 呲蚰岍一b 辩d 哪 巧t 如帅哪棚。唧f
12、k 帖呻血喀0 f n 单伽部咀呻岫删曲o d ；髑i n 洲址I o u 6 m JC a i n M i e 曲i d 。1 9 9 5 3 3 ( 3 ) ：5 2 5 【4 Y 岫曝H M 町 ，s q F L ，吐d N a 诮r e o m l b i m l T l 一咖-驴b i m y 妇9 耐蟛曲l 击弘幽。f 唧K kJ ( 1 i n 删娌妒 M 1 螂，3 6 “) ：9 1 3 【5 s c I - 砌t 虬，蹦l 岫M ，1 1 1 F A c “ I d “ m l 幽o f I l i n e d 矗删d 珥r 噼一玷I k 。dh 妇ng 叩hd m 日m
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