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1、食品科学学院本科实验项目实验项目名称 食品中着色剂的测定 所属课程 食品分析与检验所适专业 食品科学与工程、食品质量与安全 带课教师 丁晓雯实验要求 必修或选修 关键词 着色剂、纸层析法实验目的 (1) 学习各类色素测定的原理与方法；(2) 掌握纸层析定性法与提纯色素的定量法。所用教材 吴谋成. 食品分析与感官评定M.北京:中国农业出版社. 2002.实验类型 1 1.基础性实验; 2. 综合与设计性实验; 3.研究与创新型实验 基本描述聚酰胺是具有二极性的化合物，水溶性酸性染料在酸性条件下被聚酰胺吸附，而在碱性条件下解吸附，再用纸色谱法或薄层色谱法进行分离后与标准比较定性、定量。所用主要仪器
2、设备分光光度计、微量注射器或色素吸管、展开槽（2564cm） 、层析缸、薄层板（520cm） 、电吹风机、水泵。实验学时 3 是否特色 是实验 7 食品中着色剂的测定1 实验目的(1) 学习各类色素测定的原理与方法；(2) 掌握纸层析定性法与提纯色素的定量法。2 实验原理聚酰胺是具有二极性的化合物，水溶性酸性染料在酸性条件下被聚酰胺吸附，而在碱性条件下解吸附，再用纸色谱法或薄层色谱法进行分离后与标准比较定性、定量。3 试剂与仪器主要试剂：聚酰胺粉(尼龙 6)、硫酸（1：10） 、甲醇-甲酸溶液（6：4） 、甲醇、20柠檬酸溶液、10钨酸钠溶液、石油醚、海砂、乙醇-氨溶液、 50乙醇溶液、硅胶
3、G、盐酸（1：10） 、5氢氧钠溶液、碎瓷片、展开剂a、正丁醇-无水乙醇-1氨水(6：2：3) ；b、正丁醇- 吡啶-1氨水(6 ：3：4) ；c 、甲乙酮- 丙酮-水(7 ：3：3) ；d、甲醇-乙二胺-氨水(10：3： 2)；e、甲醇-氨水-乙醇 (5：1：10)；f 、2.5柠檬酸钠- 氨水-乙醇(8：1：2)。 ：供薄层色谱用、色素标准品（胭脂红；苋菜红；柠檬黄；靛蓝；日落黄；亮蓝：纯度均为60。 ） 。 主要仪器：分光光度计、微量注射器或色素吸管、展开槽（2564cm） 、层析缸、薄层板（520cm ） 、电吹风机、水泵。4 操作与结果(1) 样品处理 果味水、果子露、汽水：吸取 5
4、0.0 毫升样品于 100 毫升烧杯中，汽水需加热驱除二氧化碳。 配制酒：吸取 100.0 毫升样品于烧杯中，加碎瓷片数块，加热驱除乙醇。 硬糖：蜜饯类，淀粉软糖：称取 5.0 或 10.0 克粉碎的样品，加 30 毫升水，温热溶解，若样液 PH 值较高，用 20柠檬酸溶液调至 PH4 左右。 含蛋奶的样品a 奶糖：称取 10.0 克粉碎均匀的样品，加 30 毫升乙醇-氨溶液溶解，置水浴上浓缩至约 20 毫升，立即用 1：10 硫酸调溶液至微酸隆再加 1.0 毫升 1：l0 硫酸，加 1 毫升 l0钨酸钠溶液，使蛋白质沉淀，过滤，用少量水洗涤，收集滤液。b 蛋糕类：称取 10.0 克粉碎均匀的
5、样品，加海砂少许，混匀、用热风风干样品(用手摸已干燥即可以)，加入 30 毫升石油醚搅拌，放置片刻，倾出石油醚，如此重复处理三次，以除去脂肪吹干后研细，全部转人 G3 垂融漏斗或普通漏斗中，用乙醇氨溶液提取色素，直至色素全部提完以下按(1)自“置水浴下浓缩至约 20 毫升 ”起依法操作。(2) 吸附分离将处理后所得的溶液加热至 70，加入 0.5-1.0 克聚酰胺粉充分搅拌，用 20柠檬酸溶液调 PH 至 4，使色素完全被吸附，若溶液还有颜色，可以再加一些聚酰胺粉。将吸附色素的聚酰胺全部转入 G3 垂融漏斗或玻璃漏斗中过滤 (如用 G3 垂融漏斗过滤，可以用水泵慢慢地抽滤)。用 20柠檬酸酸化
6、 PH4 的 70水反复洗涤，每次 20 毫升，边洗边搅拌，若含有天然色素再用甲醇-甲酸溶液洗涤 1-3 次，每次 20 毫升，至洗液无色为止。再用70水多次洗涤至流出的溶液为中性。洗涤过程中必须充分搅拌。然后用乙醇-氨溶液分次解吸全部色素，收集全部解吸液，于水浴上驱氨。如果为单色，则用水准确稀释至 50 毫升，用分光光度法进行测定。如果为多种色素混合液，则进行纸色谱或薄层色谱法分离后测定，即将上述溶液置水浴上浓缩至约 2 毫升后移人 5 毫升容量瓶中，用 50乙醇洗涤容器，洗液并入容量瓶中并稀释至刻度。(3) 定性分析 纸色谱精密称取各色素各 0.100 克，用 PH6 的水溶解，移入 10
7、0 毫升容量瓶中并稀释至刻度，即为色素标准溶液（每毫升相当于 1 毫克商品色素） 。靛蓝溶液需在暗处保存。取色谱用纸，在距底边 2cm 的起始线上分别点 3-10 微升样品溶液，1-2 微升色素标准溶液，挂于分别盛有 a、b、c、d、e 、f 的展开剂的层析缸中，用上行法展开，待溶剂前沿展至 15cm 处，将滤纸取出于空气中晾干，与标准斑比较定性。也可取 0.5 毫升样液，在起始线上从左到右点成条状，纸的右边点色素标准溶液，依法展开，晾干后先定性后定量，靛蓝在碱性条件下易褪色可用 e 展开剂。 薄层色谱a 薄层板的制备称取 1.60 克聚胺粉，0.4 克可溶性淀粉及 2 克硅胶 G，置于合适的
8、研钵中，加 15 毫升水研匀后，立即置涂布器中铺成厚度为 0.3mm 的板。在室温晾干后，于 80干燥 1 小时置于燥器中备用。b 点样离板底边 2cm 处将 0.5 毫升样液从左到右点成与底边平行的条状的右边点 2 微升色素标准溶液。c 展开苋菜红与胭脂红用 d 展开剂，靛蓝与亮蓝用 e 展开剂，柠檬黄与其他色素用 f 展开剂。取适量展开剂倒入展开槽中，将薄层板放入展开，待色素明显分开后取出，晾干，与标准斑比较，如比移值相同即为同一色素。(4) 定量分析 样品测定 将纸色谱的条状色斑剪下，用少量热水洗涤数次，洗液移入 10 毫升比色管中，并加水稀释至刻度，作比色法定用。 将薄层色谱的条状色斑
9、包括有扩散的部分，分别用刮刀刮下，移入漏斗中，用乙醇-氨溶液解吸色素，少量反复多次至解吸液无色，收集解吸液于蒸发皿中，于水浴上挥发除去氨，移入 10 毫升比色管中，加水至刻度作比色用。 标准曲线的绘制分别吸取 0.0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0ml 胭脂红，柠檬黄，日落黄色素标准使用液或0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml 亮蓝，靛蓝色素标准溶液，分别置于 10ml 比色管中，各加水稀释至刻度。上述样品与标准管分别用 1cm 比色杯，以零管调节零点，于一定波长下（胭脂红510nm，苋菜红 520nm，柠檬黄 430nm，日落黄 482nm，亮蓝 627nm） ，测定吸
10、光度，分别绘制标准曲线比较或与标准色列目测比较。 计算X = 10m2AV式中：X样品中色素的含量 (g/kg 或 g/L)；A测定用样液中色素的含量 (mg） ；m样品质量或体积(g 或 mL)；V1样品解吸后总体积(mL)；V2样液点板（纸）体积(mL)。5 注意事项与补充(1) 本实验方法的最低检出量为 50g，点样量为 1L 时，最低检出浓度为 50 mg/kg。(2) 点样前应对薄层板进行修整，即用刮刀垂直由下往上刮去上行展开薄层板两侧约0.5cm 的硅胶层。目的是防止薄层板展开时产生边缘效应，影响 Rf 值。参考文献：1 张水华. 食品分析实验M. 北京: 化学工业出版社. 2006.
