微生物检验第十二章真菌

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1、真真 菌菌真真 菌菌 有细胞壁、典型细胞核，不含叶绿素，不分根、茎、叶有细胞壁、典型细胞核，不含叶绿素，不分根、茎、叶的真核细胞型微生物。细胞质内有完整的细胞器。的真核细胞型微生物。细胞质内有完整的细胞器。.原核细胞型微生物与真核细胞型微生物比较原核细胞型微生物与真核细胞型微生物比较 原核细胞型微生物原核细胞型微生物原核细胞型微生物原核细胞型微生物 真核细胞型微生物真核细胞型微生物真核细胞型微生物真核细胞型微生物 细胞核结构细胞核结构细胞核结构细胞核结构 核膜无核膜无核膜无核膜无 有有有有核仁无核仁无核仁无核仁无 有有有有分裂方式分裂方式分裂方式分裂方式 主要以二分裂有丝分裂，减数分裂主要以二

2、分裂有丝分裂，减数分裂主要以二分裂有丝分裂，减数分裂主要以二分裂有丝分裂，减数分裂细胞质结构细胞质结构细胞质结构细胞质结构质膜质膜质膜质膜 常缺乏固醇常有固醇常缺乏固醇常有固醇常缺乏固醇常有固醇常缺乏固醇常有固醇 内膜内膜内膜内膜 较简单，有中介体复杂，有内质网和高尔基体较简单，有中介体复杂，有内质网和高尔基体较简单，有中介体复杂，有内质网和高尔基体较简单，有中介体复杂，有内质网和高尔基体核糖体核糖体核糖体核糖体 70S 80S 70S 80S 呼吸系统呼吸系统呼吸系统呼吸系统 质膜或中介体线粒体质膜或中介体线粒体质膜或中介体线粒体质膜或中介体线粒体 .Dimorphism （二相性真菌）机体

3、内寄生机体内寄生37UnicellularUnicellularMulticellularMulticellular含动物蛋白含动物蛋白培养基培养基yeast沙保氏培养基沙保氏培养基2525普通培养基普通培养基2525mold.真菌真菌繁殖结构繁殖结构，一条菌丝可生成，一条菌丝可生成多个孢子多个孢子Morphology of Spore孢孢子子芽芽胞胞作用作用真菌繁殖结构真菌繁殖结构细细菌菌休休眠眠结结构构，抵御不良环境抵御不良环境低抗力低抗力 不强，加热不强，加热6070短时间即可死亡短时间即可死亡强强 ， 有有 的的 可可 耐耐100数小时数小时.Categories of sporese

4、xualspore:sexualspore:asexualasexual sporespore分生孢子分生孢子叶状孢子叶状孢子孢子囊孢子孢子囊孢子芽生孢子芽生孢子厚膜孢子厚膜孢子关节孢子关节孢子大分生孢子大分生孢子小分生孢子小分生孢子.芽生孢子芽生孢子.厚膜孢子厚膜孢子.关节孢子关节孢子.孢子囊孢子.标本标本（1）皮肤的角质性物质（2）各种分泌物和排泄物（3）血液和体液（4）脓汁及渗出物（1）采集的标本要适宜 （2）在用药前采集标本（3）采集的标本量要足 （4）严格无菌操作（5）采集的标本立即送检注意注意.1.镜检真菌形态2.真菌抗原检测3.真菌分离培养与鉴定4.真菌核酸检测5.真菌毒素检测

5、实验室检验实验室检验.癣病标本多用KOH湿片检查法 .意义意义判断某些真菌种的致病性等判断某些真菌种的致病性等判断某些真菌种的致病性等判断某些真菌种的致病性等, ,如皮肤癣菌、曲霉等。如皮肤癣菌、曲霉等。如皮肤癣菌、曲霉等。如皮肤癣菌、曲霉等。直接镜检直接镜检阳性阳性表示：表示：有诊断意义。有诊断意义。有诊断意义。有诊断意义。看到的就是真菌的形态，可确定某些致病性真菌看到的就是真菌的形态，可确定某些致病性真菌看到的就是真菌的形态，可确定某些致病性真菌看到的就是真菌的形态，可确定某些致病性真菌的属或种。的属或种。的属或种。的属或种。有假阳性结果。有假阳性结果。有假阳性结果。有假阳性结果。局限性：

6、局限性：阴性结果不能排除真菌感染；阴性结果不能排除真菌感染；阴性结果不能排除真菌感染；阴性结果不能排除真菌感染；.常用的染色方法常用的染色方法常用的染色方法有革兰染色、瑞氏染色、荧光染色，常用的染色方法有革兰染色、瑞氏染色、荧光染色，乳酸酚棉蓝染色、还有墨汁负染色等。乳酸酚棉蓝染色、还有墨汁负染色等。对检测骨髓和外周血中的荚膜组织胞浆菌，需作瑞对检测骨髓和外周血中的荚膜组织胞浆菌，需作瑞氏染色或姬氏染色后镜检。氏染色或姬氏染色后镜检。检测病人脑脊液标本中新生隐球菌，需作墨汁负染检测病人脑脊液标本中新生隐球菌，需作墨汁负染色后检查，背景为黑色，新生隐球菌和荚膜不着色色后检查，背景为黑色，新生隐球

7、菌和荚膜不着色 .（二）、真菌抗原检测白假丝酵母菌甘露聚糖抗原、隐球菌多糖白假丝酵母菌甘露聚糖抗原、隐球菌多糖荚膜抗原、组织胞浆菌循环多糖抗原荚膜抗原、组织胞浆菌循环多糖抗原常用的方法有胶乳凝集试验、常用的方法有胶乳凝集试验、ELISA、半定、半定量放射免疫法量放射免疫法 .（三）、真菌的分离培养（三）、真菌的分离培养真菌的培养特点：三低两高真菌培养是目前准确鉴定真菌的可靠方法平皿培养 大试管培养 玻片培养.菌落性质菌落性质：酵母菌还是霉菌酵母菌还是霉菌菌落大小菌落大小：病原性真菌菌落小，而条件病原性真菌菌落小，而条件致病性真菌菌落大致病性真菌菌落大致病性真菌菌落下沉，有时使致病性真菌菌落下沉

8、，有时使培养基开培养基开裂裂；污染性真菌菌落不下沉；污染性真菌菌落不下沉,很少引起开裂。很少引起开裂。菌落颜色菌落颜色 病原性真菌颜色淡，病原性真菌颜色淡， 污染真菌污染真菌颜色深；颜色深；菌落的性状是鉴别真菌的重要特征菌落的性状是鉴别真菌的重要特征.真 菌 鉴 定1.1.1.1.糖糖糖糖( ( ( (醇醇醇醇) ) ) )类发酵试验类发酵试验类发酵试验类发酵试验2.2.同化碳源试验同化碳源试验同化碳源试验同化碳源试验3.3.同化氮源试验同化氮源试验同化氮源试验同化氮源试验菌种鉴定是一个复杂过程，仅观察菌落形态是远远菌种鉴定是一个复杂过程，仅观察菌落形态是远远不够的，还需作生化反应，分子生物学

9、鉴定，必要不够的，还需作生化反应，分子生物学鉴定，必要时将菌种送有关单位鉴定。时将菌种送有关单位鉴定。.核酸检测核酸检测毒素的检测毒素的检测动物试验动物试验.1.多烯类抗生素，如两性霉素B、制霉菌素、曲古霉素等。2.吡咯类，包括酮康唑、伊曲康唑、氟康唑、伏立康唑、克霉唑、益康唑等。3.其他类如氟胞嘧啶。抗真菌药物分类-化学结构分类.临床标本临床标本直接检查直接检查检测抗原检测抗原直接镜检直接镜检固定标固定标本染色本染色墨汁负墨汁负染色法染色法KOH法法毛发毛发指甲指甲皮屑皮屑脑脑脊脊液液分离培养分离培养沙氏培养基沙氏培养基2537观察菌落观察菌落分分子子生生物物学学检检测测动动物物实实验验检检

10、测测抗抗体体病病理理检检查查镜检、生化反应镜检、生化反应.小结真菌的致病性真菌的基本特性：菌丝、孢子、培养特性标本采集注意事项常用的检查方法：显微镜检查、分离培养、生化实验.思考题：思考题：1.简述真菌的致病性特点。简述真菌的致病性特点。2.真菌标本采集是有哪些注意事项？真菌标本采集是有哪些注意事项？3.形态学检查和培养在真菌检查中的意义。形态学检查和培养在真菌检查中的意义。.（一）掌握毛癣菌属、表皮癣菌属和小孢子丝 菌生物学特性、微生物学检验方法及鉴定。（二）熟悉浅部真菌感染的种类目的要求.皮下组织感染真菌皮下组织感染真菌毛癣菌属毛癣菌属表皮癣菌属表皮癣菌属小孢子菌属小孢子菌属表面感染真菌表

11、面感染真菌皮肤癣真菌皮肤癣真菌糠秕马拉色菌 着色真菌孢子丝菌.位置：寄居于人体皮肤和毛干的最表层。因不接触组织细胞，很少引起宿主细胞反应。嗜脂性酵母样菌 代表：秕糠马拉色菌(Malasseziafurfur)症状：皮肤表面出现花斑癣（汗斑）.微生物检验微生物检验1直接显微镜检查直接显微镜检查可采用透明胶带粘贴可采用透明胶带粘贴取材法，将透明胶带直接贴于皮肤表面，取材法，将透明胶带直接贴于皮肤表面，数分钟后揭下，直接贴于载玻片上镜检数分钟后揭下，直接贴于载玻片上镜检或经棉蓝染色或革兰染色后镜检。可见或经棉蓝染色或革兰染色后镜检。可见孢子和菌丝。孢子为圆形或卵形，厚壁，孢子和菌丝。孢子为圆形或卵形

12、，厚壁，芽颈较宽，常成簇分布；菌丝粗短，呈芽颈较宽，常成簇分布；菌丝粗短，呈腊肠样。腊肠样。2 2分离培养与鉴定分离培养与鉴定.毛毛 癣癣 菌菌 属属毛癣菌属（Trichophyton）属半知菌亚门丝孢菌目丛梗孢菌科，有20余种，其中14种能引起人和动物的感染。临床上常见的有 红色毛癣菌(trichophyton rubrum) 须癣毛癣菌(T.mentagrophytes,又称石膏样毛癣菌) 许兰毛癣菌(T.schoenleinii,又称黄癣菌) 紫色毛癣菌（T.violaceum） 断发毛癣菌（T.tonsurans）.毛癣菌：菌落灰白、红、橙或棕色毛癣菌：菌落灰白、红、橙或棕色,表面呈绒

13、毛状、粉粒状或蜡样。表面呈绒毛状、粉粒状或蜡样。大分生孢子细长棒状薄壁。菌丝有大分生孢子细长棒状薄壁。菌丝有螺旋状、球拍状、鹿角状和结节状螺旋状、球拍状、鹿角状和结节状.微生物检验微生物检验1标标本本采采集集采采集集新新发发生生的的皮皮肤肤损损害害边边缘缘皮皮屑屑；指指甲甲近尖端下面甲屑；拔取无光泽病发。近尖端下面甲屑；拔取无光泽病发。2直接显微镜检查直接显微镜检查皮屑皮屑10%KOH液；指甲液；指甲25%KOH/25%NaOH处理处理镜检可见透明、有隔，常有分支的菌丝及成链的关节孢子。镜检可见透明、有隔，常有分支的菌丝及成链的关节孢子。.皮肤癣菌感染的毛发皮肤癣菌感染的毛发 .三.分离培养

14、标本 70%乙醇或在青、链霉素混合液内处理5min 生理盐水洗3次 接种沙氏琼脂斜面25培养观察菌落特征。四.其他鉴定试验 毛发穿孔试验 脲酶试验 特殊营养需要试验 .毛发穿孔试验毛发穿孔试验将头发发剪成lcm长，置于已加入25ml蒸馏水和23滴10酵母浸膏液的平皿内，高压灭菌。将待检皮肤真菌接种于平皿内，置25孵育四周，每周检查一次，每次取数根毛发置载玻片上，经乳酚棉蓝染色后，置低倍镜下观察。若毛发有裂口或陷凹者为阳性，否则为阴性。.药物敏感试验药物敏感试验对对灰黄霉素、伊曲康唑灰黄霉素、伊曲康唑等药物敏感。等药物敏感。.表表 皮皮 癣癣 菌菌 属属 表皮癣菌属（Epidermophyton

15、）目前只有一个种，即絮状表皮癣菌（E.floccosum）, 能引起人类感染。絮状表皮癣菌是一种常见的皮肤癣菌，可引起皮肤感染如股癣、足癣、体癣、手癣和甲癣。 .絮状表皮癣菌生物学性状絮状表皮癣菌生物学性状皮屑和甲屑经+10%KOH液消化 镜检可见分枝断裂的有隔菌丝，少见孢子培养后，菌落初为白色鹅毛状，以后转变为黄色粉末状。镜下可见球拍状菌丝、卵圆形或巨大棒状薄壁大分生孢子，无小分生孢子，在陈旧培养物中可见厚膜孢子。.表皮癣菌：菌落初为表皮癣菌：菌落初为白色鹅毛状白色鹅毛状, ,以后变以后变为黄绿色粉末状。粗为黄绿色粉末状。粗棒状薄壁大分生孢子。棒状薄壁大分生孢子。菌丝球拍状菌丝球拍状.小小

16、孢孢 子子 菌菌 属属 我国常见的有铁锈色小孢子菌、石膏 样小孢子菌和狗小孢子菌等。 小孢子菌属感染皮肤和毛发，很少感 染甲。 .小孢子菌生物学特性皮屑和毛发+10%KOH处理 镜检，皮屑中有分枝断裂菌丝，在毛发中呈现小孢子镶嵌 的鞘包裹着发干。在沙氏培养基中可见白色、棕黄色或黄褐 色、粉末或绒毛状菌落。镜下可见梳状、球 拍状或结节状菌丝，卵圆形小分生孢子、厚 壁梭形（纺锤形）大分生孢子。.小孢子癣菌：菌落为灰色、橘红色或棕黄色，厚壁大分生孢子，菌丝有结节状、梳状和球拍状.毛癣菌属.表皮癣菌属.小孢子癣菌属.皮下组织真菌感染主要有着色真菌和孢子丝菌着色真菌感染发生在暴露部位，称着色真菌病。卡氏

17、枝孢霉和裴氏着色芽生菌。申克孢子丝菌，属腐生性真菌，常因外伤接触带菌的花草等引起感染。此菌可引起孢子丝菌下疳。此菌也可引起深部感染。是一种二相性真菌。.着色真菌分生孢子：分生孢子：树枝型、树枝型、剑顶型、剑顶型、花瓶型：花瓶型：.多发生四肢暴露部位，开始为小丘疹，表面干燥多发生四肢暴露部位，开始为小丘疹，表面干燥或湿润，有鳞屑或鳞痂，逐渐形成斑块结节，呈或湿润，有鳞屑或鳞痂，逐渐形成斑块结节，呈疣状增殖。疣状增殖。.直接显微镜检查直接显微镜检查：单个或成群厚壁孢子，有横隔单个或成群厚壁孢子，有横隔或中间十字分隔。或中间十字分隔。培养：培养：沙氏培养基，生长缓慢，菌落从灰黑色至沙氏培养基，生长缓

18、慢，菌落从灰黑色至黑色，有气生菌丝。菌落涂片镜检可见三种类型黑色，有气生菌丝。菌落涂片镜检可见三种类型的分生孢子，有鉴定价值。的分生孢子，有鉴定价值。生化反应生化反应：不能水解淀粉，不凝固牛奶，能同化：不能水解淀粉，不凝固牛奶，能同化硝酸盐，需维生素硝酸盐，需维生素B1。对对5-FC、伊曲康唑、氟康唑、伊曲康唑、氟康唑敏感，易产生耐药性敏感，易产生耐药性.孢孢子子丝菌丝菌申克孢子丝菌传染源：人和动物传染源：人和动物传播途径：经破损传播途径：经破损皮肤接触感染。皮肤接触感染。二相性真菌。二相性真菌。.微生物检验：(1)直接显微镜检查：卵圆形的孢子。直接显微镜检查：卵圆形的孢子。.(2)、分离培养

19、与鉴定：将标本接种于沙、分离培养与鉴定：将标本接种于沙氏培养基上氏培养基上25培养，培养，2-3d开始生长，开始生长，初为白色湿润的酵母型菌落，以后变为初为白色湿润的酵母型菌落，以后变为淡咖啡色至深褐色。淡咖啡色至深褐色。37培养培养2-3d，可，可形成乳白色或淡褐色酵母型菌落。形成乳白色或淡褐色酵母型菌落。（3）、对）、对碘化钾、伊曲康唑、特比萘芬碘化钾、伊曲康唑、特比萘芬等药物敏感。等药物敏感。.脚气脚气 脚气是一种常见的真菌感染性皮肤病。多见于趾间,足底及足缘,有深在性水疱,糜烂及鳞屑,伴有瘙痒等症状.多见于成人,夏秋重,冬春轻,足多汗及常穿胶鞋者易患本病主要致病菌为红色毛癣菌、石膏样毛

20、癣菌和絮状表皮癣菌。.医学上通常将脚气分三型：糜烂型、水疱型、角化型本病是由皮肤癣菌所引起的。足部多汗潮湿或鞋袜不通气等都可诱发本病。皮肤癣菌常通过污染的澡堂、游泳池边的地板、浴巾、公用拖鞋、洗脚盆而传染。.预防1要保持脚的清洁干燥，勤换鞋袜，鞋子要通气良好。2不要用别人的拖鞋、浴巾、擦布等，不要在澡堂、游泳池旁的污水中行走。3公用澡堂、游泳池要做到污水经常处理，以防相互传染。.治疗灰黄霉素、伊曲康唑灰黄霉素、伊曲康唑派瑞松:曲安奈德益康唑乳膏 达克宁:硝酸咪康唑软膏.（一）掌握深部感染真菌概念、分类、检验程序；掌握假丝酵母、隐球菌、卡氏肺孢菌微生物学特性、检验方法及鉴定要点。（二）熟悉荚膜组

21、织胞浆菌孢子鉴别要点。（三）了解抗真菌药物分类及临床应用。目的要求目的要求.（一）假丝酵母菌属：分类、临床意义、生物学特性、微生物学检验。（二）隐球菌属；分类、临床意义、生物学特性、微生物学检验。（三）曲霉菌属：分类、临床意义、生物学特性、微生物学检验。（四）组织胞浆菌属：分类、临床意义、生物学特性、微生物学检验。（五）卡氏肺孢菌：分类、临床意义、生物学特性、微生物学检验。 教学内容教学内容.DEFINITION 是指能侵袭深部组织和内脏及全身的真菌，主要有假丝酵母菌、隐球菌、曲霉、毛霉、组织胞浆菌和卡氏肺孢菌等。组织胞浆菌为二相性真菌，假丝酵母菌、曲霉菌、毛霉菌和卡氏肺孢菌等为条件致病性真菌

22、，只有在一定条件下才引起机体致病。.第一节第一节 假丝酵母菌属假丝酵母菌属假丝酵母菌（Candida），俗称念珠菌，生物学分类为半知菌亚门、半知菌纲、隐球菌目、假丝酵母菌属。本属菌有81个种，其中有11种对人有致病性，其中白假丝酵母菌最为常见。.(一)白假丝酵母菌条件致病：皮肤粘膜感染鹅口疮，阴道炎内脏感染：肺炎、关节炎、膀胱炎，肾盂肾炎中枢神经感染：脑膜（脑）炎、脑脓肿. 圆形或卵圆形，直径圆形或卵圆形，直径3-6m3-6m。革兰阳性，着。革兰阳性，着色不均匀。出芽方式繁殖，在组织内可见芽色不均匀。出芽方式繁殖，在组织内可见芽生孢子、假菌丝，在玉米粉培养基中可产生生孢子、假菌丝，在玉米粉培养

23、基中可产生假菌丝和厚膜孢子。假菌丝和厚膜孢子。Microbiology Characteristics .将标本接种在沙氏培养基上，将标本接种在沙氏培养基上，2525或或3737培养培养1 1d d后，可出现奶油色类酵母型菌后，可出现奶油色类酵母型菌落。镜检可见假菌丝和芽生孢子。落。镜检可见假菌丝和芽生孢子。.1)1)直直直直接接接接显显显显微微微微镜镜镜镜检检检检查查查查：取取取取脓脓脓脓汁汁汁汁、痰痰痰痰和和和和局局局局部部部部炎炎炎炎症症症症性性性性分分分分泌泌泌泌物物物物直直直直接接接接涂涂涂涂片片片片，革革革革兰兰兰兰染染染染色色色色后后后后镜镜镜镜检检检检，显显显显微微微微镜镜镜镜

24、见见见见到到到到革革革革兰兰兰兰阳阳阳阳性性性性( (着着着着色色色色不不不不均均均均匀匀匀匀) )、圆圆圆圆形形形形或或或或卵卵卵卵圆圆圆圆形形形形菌菌菌菌体体体体或或或或孢孢孢孢子子子子及及及及假菌丝，可确认为假丝酵母菌感染。假菌丝，可确认为假丝酵母菌感染。假菌丝，可确认为假丝酵母菌感染。假菌丝，可确认为假丝酵母菌感染。2)2)抗抗抗抗原原原原检检检检测测测测：取取取取病病病病人人人人血血血血清清清清作作作作ELISAELISA、免免免免疫疫疫疫印印印印迹迹迹迹法法法法等等等等检测白假丝酵母菌抗原。检测白假丝酵母菌抗原。检测白假丝酵母菌抗原。检测白假丝酵母菌抗原。3)3)核酸检测：核酸检测

25、：核酸检测：核酸检测：用用用用PCRPCR法将白假丝酵母菌法将白假丝酵母菌法将白假丝酵母菌法将白假丝酵母菌DNADNA分子扩分子扩分子扩分子扩增后以分子探针检测，具有较好的敏性和特异性。增后以分子探针检测，具有较好的敏性和特异性。增后以分子探针检测，具有较好的敏性和特异性。增后以分子探针检测，具有较好的敏性和特异性。MicrobiologyExamination .将标本接种在沙氏培养基上，将标本接种在沙氏培养基上，2525或或3737培养培养1 1d d后，可出现奶油色类酵母型菌后，可出现奶油色类酵母型菌落。镜检可见假菌丝和芽生孢子。落。镜检可见假菌丝和芽生孢子。.鉴定鉴定1)芽芽管管形形成

26、成试试验验：将将假假丝丝酵酵母母菌菌接接种种于于0.20.5m|血血清清中中，37孵孵育育1.5h观观察察有有无无芽芽管管形形成成。白白假假丝丝酵酵母母菌菌可可形形成成芽芽管管，其其他他假假丝酵母菌不形成芽管。丝酵母菌不形成芽管。.将假丝酵母菌接种于玉米粉培养基将假丝酵母菌接种于玉米粉培养基25孵育孵育1-2d后，白假丝酵母菌在菌丝顶端、后，白假丝酵母菌在菌丝顶端、侧缘或中间形成厚膜孢子。侧缘或中间形成厚膜孢子。2)厚膜孢子形成试验：厚膜孢子形成试验：.3)3)糖同化或发酵试验糖同化或发酵试验商品化的产色培养基可快速鉴定白假丝酵母菌和商品化的产色培养基可快速鉴定白假丝酵母菌和商品化的产色培养基

27、可快速鉴定白假丝酵母菌和商品化的产色培养基可快速鉴定白假丝酵母菌和其他假丝酵母菌。其他假丝酵母菌。其他假丝酵母菌。其他假丝酵母菌。.(4)(4)(4)(4)药药药药物物物物敏敏敏敏感感感感试试试试验验验验：对对对对二二二二性性性性霉霉霉霉素素素素B B B B、5-FC5-FC5-FC5-FC等等等等药药药药物物物物敏敏敏敏感感感感，但对但对但对但对5-FC5-FC5-FC5-FC极易产生耐药性。极易产生耐药性。极易产生耐药性。极易产生耐药性。(5)(5)(5)(5)抗抗抗抗体体体体检检检检测测测测：可可可可用用用用ELlSAELlSAELlSAELlSA夹夹夹夹心心心心法法法法、免免免免疫疫

28、疫疫酶酶酶酶斑斑斑斑点点点点试试试试验验验验，方方方方法法法法简简简简便便便便。也也也也可可可可用用用用乳乳乳乳胶胶胶胶凝凝凝凝集集集集试试试试验验验验和和和和对对对对流流流流免免免免疫疫疫疫电电电电泳泳泳泳试验等检测血清中抗白假丝酵母菌抗体。试验等检测血清中抗白假丝酵母菌抗体。试验等检测血清中抗白假丝酵母菌抗体。试验等检测血清中抗白假丝酵母菌抗体。(6)(6)(6)(6)动动动动物物物物试试试试验验验验：将将将将假假假假丝丝丝丝酵酵酵酵母母母母菌菌菌菌悬悬悬悬液液液液注注注注射射射射1ml1ml1ml1ml于于于于家家家家兔兔兔兔耳耳耳耳静静静静脉脉脉脉或或或或注注注注射射射射0.2ml0.

29、2ml0.2ml0.2ml于于于于小小小小白白白白鼠鼠鼠鼠尾尾尾尾静静静静脉脉脉脉，观观观观察察察察5-75-75-75-7天天天天，有无脏器小脓肿。有无脏器小脓肿。有无脏器小脓肿。有无脏器小脓肿。.(二)热带假丝酵母菌 广泛分布于自然界，在人体表和外界相通的腔道中也存在。热带假丝酵母菌可引起皮肤、粘膜和内脏假丝酵母菌病。它除可在粘膜细胞上增殖引起感染外，其产生的毒素可引起过敏反应及产生的水解酶类引起组织损伤。.微生物检验(1)(1)直直接接显显微微镜镜检检查查：将将标标本本作作涂涂片片革革兰兰染染色后镜检，观察色后镜检，观察+ +假丝酵母菌。假丝酵母菌。(2)(2)分离培养与鉴定：将标本接种

30、在沙氏培分离培养与鉴定：将标本接种在沙氏培养基上形成色暗而干燥的菌落养基上形成色暗而干燥的菌落, ,取菌落作取菌落作TZCTZC反应。反应。.TZC反应即在葡萄糖蛋白胨琼脂内加入005gL氯化三苯基四氮唑(TZC)，热带假丝酵母菌在此培养基上生长后使培养基变为深红色或紫色，而白假丝酵母菌不使培养基变色(淡红)。.案例分析 主诉：患白血病女童，主诉：患白血病女童，1010岁，发热岁，发热2 2天。天。病史：病儿既往健康，病史：病儿既往健康，1 1年前被诊断为白血病，经化疗后有缓解。入院年前被诊断为白血病，经化疗后有缓解。入院前前1 1个月开始出现进行性疲乏，体重减轻，骨髓象呈现个月开始出现进行性

31、疲乏，体重减轻，骨髓象呈现50%50%未成熟细胞。未成熟细胞。曾给予化疗，并使用甾醇类药物，曾给予化疗，并使用甾醇类药物，2 2天前体温升至天前体温升至3939，无特异性定位，无特异性定位体征。体征。查体：查体：T39T39，BP100/60mmHgBP100/60mmHg，P100P100次次/ /分，分，R20R20次次/ /分，病人消瘦，分，病人消瘦，呈慢性病面容。皮肤：苍白，有几处瘀斑，未见瘀点及黄疸；肺部：无呈慢性病面容。皮肤：苍白，有几处瘀斑，未见瘀点及黄疸；肺部：无异常。异常。实验室检查：血：红细胞压积实验室检查：血：红细胞压积20%20%，WBCWBC：600600；分类：杆状

32、核；分类：杆状核30%30%，淋巴细胞淋巴细胞55%55%，单核细胞，单核细胞5%5%。尿无异常。尿无异常。病程记录：病人静脉注射替卡西林病程记录：病人静脉注射替卡西林(ticarcillin)(ticarcillin)、奈夫西林、奈夫西林(nafcillin)(nafcillin)和妥和妥布霉素布霉素(tobramycin)(tobramycin)。入院后。入院后2 2天仍持续发热，第天仍持续发热，第3 3天病人自诉左眼痛，天病人自诉左眼痛，视力模糊，眼底检查，在黄斑周边区域有白色、絮状病变。自诉喉痛，视力模糊，眼底检查，在黄斑周边区域有白色、絮状病变。自诉喉痛，检查发现咽后壁有几处白色、粘

33、附的斑块。检查发现咽后壁有几处白色、粘附的斑块。. 问题：问题：1.1.你将采集何种标本做培养你将采集何种标本做培养? ?2.2.根据上述结果，最有可能是哪一类的病原体根据上述结果，最有可能是哪一类的病原体? ? 3.3.第四天血培养有卵圆形、无荚膜、革兰阳性病原体生长，第四天血培养有卵圆形、无荚膜、革兰阳性病原体生长，体积是葡萄球菌的体积是葡萄球菌的2323倍，某些细胞有出芽。倍，某些细胞有出芽。 4.4.你如何鉴别该病原体的不同种类你如何鉴别该病原体的不同种类? ? 5.5.该病原菌的自然定居部位是什么该病原菌的自然定居部位是什么? ?.第二节 隐 球 菌 属广泛分布于自然界，也存在于人体

34、表、口腔和肠道中，鸽粪中大量存在。人因吸入鸽粪污染的空气而感染，特别是免疫功能低下者主要引起肺脑的急性或亚急性或慢性感染 .形态：圆形，有肥厚荚膜，出芽繁殖，不形成假菌丝形态：圆形，有肥厚荚膜，出芽繁殖，不形成假菌丝形态：圆形，有肥厚荚膜，出芽繁殖，不形成假菌丝形态：圆形，有肥厚荚膜，出芽繁殖，不形成假菌丝染色：墨汁负染染色：墨汁负染染色：墨汁负染染色：墨汁负染培养特性：沙保或血琼脂培养基，培养特性：沙保或血琼脂培养基，培养特性：沙保或血琼脂培养基，培养特性：沙保或血琼脂培养基，2525和和和和3737酵母型，酵母型，酵母型，酵母型，表面黏稠、浑浊，乳白色菌落表面黏稠、浑浊，乳白色菌落表面黏稠

35、、浑浊，乳白色菌落表面黏稠、浑浊，乳白色菌落生化特性：分解尿素生化特性：分解尿素生化特性：分解尿素生化特性：分解尿素荚膜多糖抗原：荚膜多糖抗原：荚膜多糖抗原：荚膜多糖抗原：A AD4D4个血清型，我国约个血清型，我国约个血清型，我国约个血清型，我国约70%70%属属属属A A型型型型Microbiology Characteristics .新生隐球菌（墨汁负染色）新生隐球菌（墨汁负染色） .新生隐球菌菌落新生隐球菌菌落.微生物检验1 1 1 1、标本直接镜检、标本直接镜检、标本直接镜检、标本直接镜检（1 1 1 1）脑脊液作脑脊液作脑脊液作脑脊液作墨汁负染色墨汁负染色墨汁负染色墨汁负染色(2

36、)(2)抗原检测抗原检测抗原检测抗原检测(3)(3)(3)(3)核酸检测核酸检测核酸检测核酸检测2 2、分离培养分离培养w病原性隐球菌在病原性隐球菌在2525和和3737生长，而非病生长，而非病原性隐球菌在原性隐球菌在3737时不生长。培养时不生长。培养25d25d后后观察观察菌落形态特点菌落形态特点，并取菌落作印度墨汁负，并取菌落作印度墨汁负染色镜检。染色镜检。.3、鉴定1 1）酚氧化酶试验：接种）酚氧化酶试验：接种）酚氧化酶试验：接种）酚氧化酶试验：接种L-L-多巴枸橼酸铁和咖多巴枸橼酸铁和咖多巴枸橼酸铁和咖多巴枸橼酸铁和咖啡酸培养基中，经培养，呈啡酸培养基中，经培养，呈啡酸培养基中，经培

37、养，呈啡酸培养基中，经培养，呈棕黑色菌落棕黑色菌落棕黑色菌落棕黑色菌落。2 2）脲酶试验：）脲酶试验：）脲酶试验：）脲酶试验：培养基可由黄色变粉红色培养基可由黄色变粉红色培养基可由黄色变粉红色培养基可由黄色变粉红色，而白假丝酵，而白假丝酵，而白假丝酵，而白假丝酵母菌为阴性。母菌为阴性。母菌为阴性。母菌为阴性。3 3）糖同化及发酵试验：非致病性隐球菌不能同化肌醇。）糖同化及发酵试验：非致病性隐球菌不能同化肌醇。）糖同化及发酵试验：非致病性隐球菌不能同化肌醇。）糖同化及发酵试验：非致病性隐球菌不能同化肌醇。4、药敏、药敏对两性霉素对两性霉素对两性霉素对两性霉素B B、5-FC5-FC、氟康唑等敏感

38、，临床应用时常、氟康唑等敏感，临床应用时常、氟康唑等敏感，临床应用时常、氟康唑等敏感，临床应用时常联合应用。联合应用。联合应用。联合应用。.第三节 曲 霉 菌 曲霉菌是条件致病菌，人体对其有极强免疫 力，只有在人体免疫功能降低时才能致病。曲霉可引起呼吸系统曲霉病；全身性曲霉 病；曲霉可产生毒素引起机体食物中毒；致 癌作用 。 .直接显微镜检查直接显微镜检查 取痰液等被检材料涂于载玻片上，取痰液等被检材料涂于载玻片上，在镜下可见分枝的菌丝、较粗的分生孢子头，顶在镜下可见分枝的菌丝、较粗的分生孢子头，顶端膨大形成顶囊，顶囊上有小梗，小梗上有许多端膨大形成顶囊，顶囊上有小梗，小梗上有许多小分生孢子。

39、小分生孢子。抗原检测、抗体检测、药敏试验、皮肤试验。抗原检测、抗体检测、药敏试验、皮肤试验。分离培养与鉴定：标本接种沙氏琼脂，室温培养分离培养与鉴定：标本接种沙氏琼脂，室温培养后菌落形成快，呈毛状，一般为黄绿色。将菌落后菌落形成快，呈毛状，一般为黄绿色。将菌落涂片镜检可见特征性的分子孢子头和足细胞。根涂片镜检可见特征性的分子孢子头和足细胞。根据不同的据不同的曲霉的形态和菌落特征曲霉的形态和菌落特征确定菌种。确定菌种。 .曲曲霉霉菌菌返回返回.第四节 组织胞浆菌属有两个种：荚膜组织胞浆菌、组织孢浆菌的杜波变种。 本菌传染性极大，主要侵犯网状内皮系统，有时也可由血行播散而侵犯全身各脏器。.Micr

40、obiology Characteristics n n组织胞浆菌是一种双相型真菌，在组织胞浆菌是一种双相型真菌，在2525培养时呈培养时呈典型菌丝体，在典型菌丝体，在3737培养时为酵母型，位于细胞培养时为酵母型，位于细胞内或外。内或外。 n n荚膜组织胞浆菌：孢子卵圆形，荚膜组织胞浆菌：孢子卵圆形，2-4m2-4m，芽生孢，芽生孢子，一端较尖，芽颈较细，有荚膜。子，一端较尖，芽颈较细，有荚膜。n n组织孢浆菌的杜波变种：孢子卵圆形，组织孢浆菌的杜波变种：孢子卵圆形，12-15m12-15m，薄壁的芽生孢子，薄壁的芽生孢子.微生物检验微生物检验1.1.直接显微镜检查应涂片染色后检查。直接显微

41、镜检查应涂片染色后检查。 痰液等标本：涂片后先用甲醇固定痰液等标本：涂片后先用甲醇固定10min10min，再用姬，再用姬 姆萨染色镜检姆萨染色镜检 。 皮损、脓液等标本：用皮损、脓液等标本：用20%KOH20%KOH涂片后镜检涂片后镜检 2.2.抗原检测、药物敏感试验、抗体检测抗原检测、药物敏感试验、抗体检测 3.3.分离培养与鉴定分离培养与鉴定 标本标本 含抗生素的沙氏培养基含抗生素的沙氏培养基 25 25培培 养，生长缓慢，有时需养，生长缓慢，有时需4646周才开始生长，逐渐周才开始生长，逐渐 形成白色至棕色绒毛状菌落形成白色至棕色绒毛状菌落 。 . 转种于血琼脂培养基上，37培养，很快

42、形成酵母型菌落。 培养物显微镜特征 ：25沙氏培养，可以发现特征性的大分生孢子，但初代培养不典型，继代培养可有典型大分生孢子。 鉴定：取可疑菌落涂片染色镜检，并作脲酶试验和明胶液化试验。 .荚膜组织胞浆菌菌落为棉絮状，镜检可见细长有荚膜组织胞浆菌菌落为棉絮状，镜检可见细长有隔菌丝，菌丝侧面或孢子柄上长有特殊的圆形大隔菌丝，菌丝侧面或孢子柄上长有特殊的圆形大分生孢子，厚壁，四周有棘突，排列如齿轮。血分生孢子，厚壁，四周有棘突，排列如齿轮。血液标本油镜下镜检可见在中性粒细胞或单核细胞液标本油镜下镜检可见在中性粒细胞或单核细胞中有卵圆形或圆形的酵母细胞中有卵圆形或圆形的酵母细胞.第五节 卡氏肺孢菌卡

43、氏肺孢菌可寄生于多种动物，也可寄生于健康卡氏肺孢菌可寄生于多种动物，也可寄生于健康人体。广泛分布于自然界，如土壤和水等。卡氏人体。广泛分布于自然界，如土壤和水等。卡氏肺孢菌病的传播途径主要是空气传播，在健康人肺孢菌病的传播途径主要是空气传播，在健康人体内，多为无症状的隐性感染。当宿主免疫力下体内，多为无症状的隐性感染。当宿主免疫力下降，如长期使用免疫抑制剂、器官移植、肿瘤、降，如长期使用免疫抑制剂、器官移植、肿瘤、艾滋病等，潜伏的卡氏肺孢菌在病人肺内大量繁艾滋病等，潜伏的卡氏肺孢菌在病人肺内大量繁殖扩散，使肺泡上皮细胞受损，导致间质性浆细殖扩散，使肺泡上皮细胞受损，导致间质性浆细胞肺炎，又称卡

44、氏肺孢菌性肺炎（胞肺炎，又称卡氏肺孢菌性肺炎（PCPPCP）。）。 .直接显微镜检查从病人痰液、支气管肺泡灌洗液或肺活检组织中检查PC是确诊本病的重要依据。常用的染色方法有姬姆萨染色、果氏环六亚甲基四胺银染色（GMS）和亚甲胺蓝染色。可以检出包囊和滋养体两种形态。抗原检测，核酸检测，抗体检测等。.毛霉目真菌毛霉目真菌 毛霉目真菌属于接合菌门、接合菌纲，有7个科，主要是毛霉科 。本病是一种发病急，进展快、病死率极高的系统性条件致病性真菌感染。.毛毛霉霉目目真真菌菌毛毛霉霉科科根霉属根霉属犁头霉属犁头霉属毛霉属毛霉属根毛霉属根毛霉属少根根霉少根根霉米根霉米根霉n n毛霉目真菌有无隔菌丝，在一些陈旧

45、培养基中偶见有隔菌丝毛霉目真菌有无隔菌丝，在一些陈旧培养基中偶见有隔菌丝毛霉目真菌有无隔菌丝，在一些陈旧培养基中偶见有隔菌丝毛霉目真菌有无隔菌丝，在一些陈旧培养基中偶见有隔菌丝 。形态可见匍匐丝和假根。形态可见匍匐丝和假根。形态可见匍匐丝和假根。形态可见匍匐丝和假根。.毛霉目真菌微生物检验毛霉目真菌微生物检验 直接镜检临床标本 20%KOH 湿片，直接镜检可见折光性强的粗大菌丝，偶见孢子囊及孢子囊梗。分离培养 临床标本接种于不含放线菌酮的麦芽糖培养基、马铃薯培养基及沙氏琼脂培养基，25或37培养。药物敏感试验，抗体检测。鉴定 根据毛霉、根霉与梨头霉的形态特点。.毛霉毛霉 根霉根霉 梨头霉梨头霉

46、 .马内菲青霉 二相性，在自然界中以菌丝形式存在，在组织中则可形成小圆形到椭圆形细胞。 马内菲青霉可引起马内菲青霉病，引起广泛性播散性感染，主要侵犯人的网状内皮系统。 .马内菲青霉微生物检验马内菲青霉微生物检验 标本直接检验标本直接检验 ：取骨髓涂片、皮肤印片或淋巴结活取骨髓涂片、皮肤印片或淋巴结活体组织瑞氏染色后镜检，可见到典型圆形或卵圆形体组织瑞氏染色后镜检，可见到典型圆形或卵圆形有明显横隔的细胞，常在巨噬细胞内。有明显横隔的细胞，常在巨噬细胞内。分离培养与鉴定：标本接种沙氏培养基上，在分离培养与鉴定：标本接种沙氏培养基上，在2525培养为培养为青霉相青霉相；3737酵母相酵母相 。抗原检

47、测抗原检测鉴别要点：马内菲青霉的孢子易与荚膜组织胞浆菌鉴别要点：马内菲青霉的孢子易与荚膜组织胞浆菌孢子相混淆，但前者孢子常有横隔，从不出芽。孢子相混淆，但前者孢子常有横隔，从不出芽。 .镰镰 刀刀 菌菌 镰刀菌生态适应性强，广泛分布于自然界土壤、植物的地上及地下部分或植物碎片，甚至可存在于沙漠及北极地区。 镰刀菌引起人类感染尤其是在免疫缺陷病人正逐年增多，其发病率和病死率仅次于白色假丝酵母菌和曲霉感染。 .镰刀菌微生物检验镰刀菌微生物检验标本直接检验：可见分支、分隔的菌丝，与曲霉的镜下特征相似。培养鉴定：常有培养基有燕麦培养基、马铃薯葡萄糖琼脂、石竹叶琼脂、合成琼脂、KCl培养基和土壤琼脂。P

48、DA 和OA可用以观察菌落形态和色泽，产孢有时较少。KCl培养基可用以观察分生孢子链的形成。土壤培养基有利于快速形成厚壁孢子。 .假丝酵母菌隐球菌曲霉菌组织胞浆菌卡氏肺孢菌毛霉目真菌马内菲青霉菌镰刀菌深深部部感感染染真真菌菌荚膜：24um，芽生孢子杜波：1215um，芽生孢子形态及菌落特点.棕红色蜡样、褶皱，棕红色蜡样、褶皱，白色绒毛样菌丝，菌白色绒毛样菌丝，菌落周围培养基背面变落周围培养基背面变为红葡萄酒色为红葡萄酒色脑回样皱褶，浅灰褐色、脑回样皱褶，浅灰褐色、湿润的菌落湿润的菌落.复习作业题复习作业题复习作业题复习作业题1.如何鉴别白假丝酵母菌和热带假丝酵母菌如何鉴别白假丝酵母菌和热带假丝酵母菌2.对人致病的二相型真菌有哪些？对人致病的二相型真菌有哪些？3.简述墨汁负染色的原理及应用。简述墨汁负染色的原理及应用。.