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1、第十章、吸光光度法第十章、吸光光度法Al3+Cu2+KMnO4Ni2+Fe3+n n经过比较溶液颜色深浅而求得其浓度的分经过比较溶液颜色深浅而求得其浓度的分析方法称为比色分析法析方法称为比色分析法n n比色分析的根本根据是有色物质对光的选比色分析的根本根据是有色物质对光的选择性吸收作用。择性吸收作用。n n光吸收的本质：光吸收的本质：n n吸收光谱有原子吸收光谱和分子吸收光谱。吸收光谱有原子吸收光谱和分子吸收光谱。吸收光谱有原子吸收光谱和分子吸收光谱。吸收光谱有原子吸收光谱和分子吸收光谱。n n原子吸收光谱是由原子而不是分子外层电子选择性地吸收某原子吸收光谱是由原子而不是分子外层电子选择性地吸
2、收某原子吸收光谱是由原子而不是分子外层电子选择性地吸收某原子吸收光谱是由原子而不是分子外层电子选择性地吸收某些波长的电磁波而引起的，原子吸收分光光度法就是根据原子的些波长的电磁波而引起的，原子吸收分光光度法就是根据原子的些波长的电磁波而引起的，原子吸收分光光度法就是根据原子的些波长的电磁波而引起的，原子吸收分光光度法就是根据原子的这种性质建立起来的。这种性质建立起来的。这种性质建立起来的。这种性质建立起来的。n n分子吸收光谱是分子轨道中外层电子吸收某一波长范围的能量而分子吸收光谱是分子轨道中外层电子吸收某一波长范围的能量而分子吸收光谱是分子轨道中外层电子吸收某一波长范围的能量而分子吸收光谱是
3、分子轨道中外层电子吸收某一波长范围的能量而引起的，通常吸收的是紫外及可见光部分。这种价电子跃迁而产引起的，通常吸收的是紫外及可见光部分。这种价电子跃迁而产引起的，通常吸收的是紫外及可见光部分。这种价电子跃迁而产引起的，通常吸收的是紫外及可见光部分。这种价电子跃迁而产生的分子光谱又称为电子光谱。生的分子光谱又称为电子光谱。生的分子光谱又称为电子光谱。生的分子光谱又称为电子光谱。n n电子跃迁时必需伴有分子的振动和转动能级的变化，所以分子光电子跃迁时必需伴有分子的振动和转动能级的变化，所以分子光电子跃迁时必需伴有分子的振动和转动能级的变化，所以分子光电子跃迁时必需伴有分子的振动和转动能级的变化，所
4、以分子光谱不是线光谱而是带状光谱。假设用红外光照射，不能引起电子谱不是线光谱而是带状光谱。假设用红外光照射，不能引起电子谱不是线光谱而是带状光谱。假设用红外光照射，不能引起电子谱不是线光谱而是带状光谱。假设用红外光照射，不能引起电子的跃迁，只能引起振动和转动能级的变化，这样引起的吸收光谱的跃迁，只能引起振动和转动能级的变化，这样引起的吸收光谱的跃迁，只能引起振动和转动能级的变化，这样引起的吸收光谱的跃迁，只能引起振动和转动能级的变化，这样引起的吸收光谱称为振动转动光谱或红外光谱。它的吸收与分子构造亲密相关，称为振动转动光谱或红外光谱。它的吸收与分子构造亲密相关，称为振动转动光谱或红外光谱。它的
5、吸收与分子构造亲密相关，称为振动转动光谱或红外光谱。它的吸收与分子构造亲密相关，用于研讨分子构造。用于研讨分子构造。用于研讨分子构造。用于研讨分子构造。电磁波电磁波电磁波电磁波波长范围波长范围波长范围波长范围跃迁类型跃迁类型跃迁类型跃迁类型分析方法分析方法分析方法分析方法X-X-射线射线射线射线1010-1-1-10nm-10nmKK、L L层电子层电子层电子层电子X X射线光谱法射线光谱法射线光谱法射线光谱法远紫外光远紫外光远紫外光远紫外光10-200nm10-200nm中层电子中层电子中层电子中层电子真空紫外光度法真空紫外光度法真空紫外光度法真空紫外光度法近紫外光近紫外光近紫外光近紫外光2
6、00-400nm200-400nm价电子价电子价电子价电子紫外光度法紫外光度法紫外光度法紫外光度法可见光可见光可见光可见光400-750nm400-750nm比色及可见光度法比色及可见光度法比色及可见光度法比色及可见光度法近红外光近红外光近红外光近红外光0.75-2.50.75-2.5 mm分子振动分子振动分子振动分子振动红外光谱法红外光谱法红外光谱法红外光谱法中红外光中红外光中红外光中红外光 2.5-502.5-50 mm第一节、吸光光度法概述第一节、吸光光度法概述n n吸光光度法是基于物质对光的选择性吸收而建立吸光光度法是基于物质对光的选择性吸收而建立吸光光度法是基于物质对光的选择性吸收而
7、建立吸光光度法是基于物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法，起来的分析方法，起来的分析方法，起来的分析方法，n n包括：包括：包括：包括：n n比色分析法，比色分析法，比色分析法，比色分析法，n n可见光度法，可见光度法，可见光度法，可见光度法，n n紫外分光光度法，紫外分光光度法，紫外分光光度法，紫外分光光度法，n n红外分光光度法。红外分光光度法。红外分光光度法。红外分光光度法。比色分析法和分光光度法特点比色分析法和分光光度法特点:n n(1)(1)、灵敏度高、灵敏度高、灵敏度高、灵敏度高n n测定的最低浓度可达测定的最低浓度可达测定的最低浓度可达测定的最低浓度可达10-510-6mol
8、/L10-510-6mol/L，相当于，相当于，相当于，相当于含量含量含量含量0.0010.0001%0.0010.0001%的微量组分的微量组分的微量组分的微量组分. .n n(2)(2)、准确度较高、准确度较高、准确度较高、准确度较高n n分光光度法的相对误差为分光光度法的相对误差为分光光度法的相对误差为分光光度法的相对误差为25%.25%.n n(3)(3)、操作简便，测定速度快、操作简便，测定速度快、操作简便，测定速度快、操作简便，测定速度快 n n(4)(4)、运用广泛、运用广泛、运用广泛、运用广泛第二节、吸光光度法的根本原理第二节、吸光光度法的根本原理n n一、互补色光一、互补色光
9、n n白光：复合光白光：复合光n n复合光复合光单色光单色光n n单色器单色器n n单色光单色光1单色光单色光2白光白光n n互补色光互补色光白白光光二、物质的颜色和对光的选择吸收二、物质的颜色和对光的选择吸收n n(1)(1)、光吸收程度最大、光吸收程度最大、光吸收程度最大、光吸收程度最大处处的波的波的波的波长长，称称称称为为最大吸收波最大吸收波最大吸收波最大吸收波长长，常用，常用，常用，常用maxmax表示表示表示表示. .n n(2)(2)、光吸收曲、光吸收曲、光吸收曲、光吸收曲线线与物与物与物与物质质特性有关，特性有关，特性有关，特性有关，这这些特性客作些特性客作些特性客作些特性客作为
10、为物物物物质质定性定性定性定性鉴鉴定的定的定的定的根据根据根据根据. .n n(3)(3)、组组成量度不同的同种物成量度不同的同种物成量度不同的同种物成量度不同的同种物质质的的的的溶液，在一定波溶液，在一定波溶液，在一定波溶液，在一定波优优点吸光度随溶点吸光度随溶点吸光度随溶点吸光度随溶液的液的液的液的组组成量度添加而增大，成量度添加而增大，成量度添加而增大，成量度添加而增大，这这个个个个特性可作特性可作特性可作特性可作为为物物物物质质定量分析的根据定量分析的根据定量分析的根据定量分析的根据. .IoItIaIo = Ia + It + IrIrn n设入射光，吸收光，透射光和反射光的强度依次
11、为设入射光，吸收光，透射光和反射光的强度依次为设入射光，吸收光，透射光和反射光的强度依次为设入射光，吸收光，透射光和反射光的强度依次为IoIo，IaIa，ItIt，IrIr，那么他们之间的关系为，那么他们之间的关系为，那么他们之间的关系为，那么他们之间的关系为:第三节第三节光吸收的根本定律光吸收的根本定律一、朗伯定律一、朗伯定律n n溶液对光的吸收程度与液层厚度的成正比。溶液对光的吸收程度与液层厚度的成正比。二、比耳定律二、比耳定律溶液溶液对光的吸收程度与光的吸收程度与浓度成正比。度成正比。n nKK为比例常数，它与入射光的波长，有色物质的性质和溶液为比例常数，它与入射光的波长，有色物质的性质
12、和溶液为比例常数，它与入射光的波长，有色物质的性质和溶液为比例常数，它与入射光的波长，有色物质的性质和溶液的温度等因数有关的温度等因数有关的温度等因数有关的温度等因数有关. .n n上式表示当一束平行单色光经过均匀的溶液时，溶液对光上式表示当一束平行单色光经过均匀的溶液时，溶液对光上式表示当一束平行单色光经过均匀的溶液时，溶液对光上式表示当一束平行单色光经过均匀的溶液时，溶液对光的吸收程度与溶液的组成量度和液层厚度的乘积成正比的吸收程度与溶液的组成量度和液层厚度的乘积成正比的吸收程度与溶液的组成量度和液层厚度的乘积成正比的吸收程度与溶液的组成量度和液层厚度的乘积成正比. .这这这这一定律称为朗
13、伯一定律称为朗伯一定律称为朗伯一定律称为朗伯- -比耳定律，也称为光吸收定律比耳定律，也称为光吸收定律比耳定律，也称为光吸收定律比耳定律，也称为光吸收定律. .三、朗伯三、朗伯-比耳定律比耳定律四、透光率，吸光度，吸光系数，四、透光率，吸光度，吸光系数，摩尔吸光系数摩尔吸光系数n n当液当液当液当液层层厚度厚度厚度厚度b b的的的的单单位位位位为为cmcm，组组成量度成量度成量度成量度c c的的的的单单位位位位为为g/Lg/L时时，那么常数，那么常数，那么常数，那么常数KK用用用用a a表示，表示，表示，表示，它的它的它的它的单单位位位位为为Lg-1cm-1Lg-1cm-1，a a称称称称为为
14、吸光系数吸光系数吸光系数吸光系数. .n n当当当当b b的的的的单单位位位位为为cmcm，组组成量成量成量成量度度度度c c的的的的单单位位位位为为mol/Lmol/L时时，那，那，那，那么常数么常数么常数么常数KK用用用用 表示，它的表示，它的表示，它的表示，它的单单位位位位为为Lmol-1cm-1Lmol-1cm-1， 称称称称为为摩摩摩摩尔尔吸光系数吸光系数吸光系数吸光系数. .n n摩摩摩摩尔尔吸光系数吸光系数吸光系数吸光系数 时时有色物有色物有色物有色物质质在一定波在一定波在一定波在一定波长长下的特征常数，下的特征常数，下的特征常数，下的特征常数，它可以衡量它可以衡量它可以衡量它可
15、以衡量显显色反响的灵敏度色反响的灵敏度色反响的灵敏度色反响的灵敏度. .n n 值值越大，表示越大，表示越大，表示越大，表示该该有色物有色物有色物有色物质对该质对该波波波波长长光的吸收才干越光的吸收才干越光的吸收才干越光的吸收才干越强强，显显色反响越灵敏色反响越灵敏色反响越灵敏色反响越灵敏. .第四节、吸光光度法的仪器部件第四节、吸光光度法的仪器部件n n一、目视比色法一、目视比色法n n用肉眼比较被测溶液同规范溶用肉眼比较被测溶液同规范溶液颜色深浅，以确定被测物质液颜色深浅，以确定被测物质含量的方法，称为玛纳斯比色含量的方法，称为玛纳斯比色法法.n n最常用的目视比色法是规范系最常用的目视比
16、色法是规范系列法列法.n n规范系列法的优点是仪器简单，操作简便，而且可在复合规范系列法的优点是仪器简单，操作简便，而且可在复合规范系列法的优点是仪器简单，操作简便，而且可在复合规范系列法的优点是仪器简单，操作简便，而且可在复合光下进展测定光下进展测定光下进展测定光下进展测定. .其缺陷是配制规范色阶比较费时，由于某其缺陷是配制规范色阶比较费时，由于某其缺陷是配制规范色阶比较费时，由于某其缺陷是配制规范色阶比较费时，由于某些有色溶液不够稳定，经常现用现配些有色溶液不够稳定，经常现用现配些有色溶液不够稳定，经常现用现配些有色溶液不够稳定，经常现用现配. .C1 C2 C3 C4 C5 CxC1
17、C2 C3 C4 C5 Cx二、光电比色法与分光光度法二、光电比色法与分光光度法n n( (一一一一) )、根本原理和特、根本原理和特、根本原理和特、根本原理和特点点点点n n1 1、规范曲线法、规范曲线法、规范曲线法、规范曲线法n n光度法与目视法比较，光度法与目视法比较，光度法与目视法比较，光度法与目视法比较，其优点是其优点是其优点是其优点是: :用光电池替用光电池替用光电池替用光电池替代肉眼进展丈量，消代肉眼进展丈量，消代肉眼进展丈量，消代肉眼进展丈量，消除了肉眼的客观误差，除了肉眼的客观误差，除了肉眼的客观误差，除了肉眼的客观误差，提高了分析结果的准提高了分析结果的准提高了分析结果的准
18、提高了分析结果的准确度确度确度确度. .2、比较法、比较法.(二二)光度计的根本部件光度计的根本部件n n普通光度计是由光源，滤光片，比色皿，光电池和检普通光度计是由光源，滤光片，比色皿，光电池和检普通光度计是由光源，滤光片，比色皿，光电池和检普通光度计是由光源，滤光片，比色皿，光电池和检流计等五大部件组成流计等五大部件组成流计等五大部件组成流计等五大部件组成. .1、光源、光源2、单色器、单色器n n1 1、滤滤色片色片色片色片n n目前普遍运用的是国目前普遍运用的是国目前普遍运用的是国目前普遍运用的是国产产型光型光型光型光电电比色比色比色比色计计，有，有，有，有三种配套的三种配套的三种配套
19、的三种配套的滤滤光片光片光片光片红红色色色色650650，绿绿色色色色530530，蓝蓝色色色色440440n n2 2、棱、棱、棱、棱镜镜 n n3 3、光栅、光栅、光栅、光栅n n10001000条条条条/mm/mm3、比色皿、比色皿(吸收池吸收池)4、光电池或光电管、光电池或光电管5、检流计、检流计n n(二二)、分光光度计、分光光度计n n1、72型风光光度计型风光光度计n n2、75型分光光度计型分光光度计721型可见分光光度计型可见分光光度计n n特点：特点：特点：特点：n n棱棱棱棱镜单镜单色器。色器。色器。色器。n nT.AT.A直直直直读读。n n运用消光片，可供高含量运用消
20、光片，可供高含量运用消光片，可供高含量运用消光片，可供高含量比色比色比色比色测测定。定。定。定。n n技技技技术术目的：目的：目的：目的：n n波波波波长长范范范范围围：360800nm360800nmn n波波波波长长精度：精度：精度：精度：3nm(360600nm)3nm(360600nm)n n外表刻度：外表刻度：外表刻度：外表刻度：T T01000100A A0202722型可见分光光度计型可见分光光度计n n特点：特点：特点：特点：n n能在可能在可能在可能在可见见光光光光谱谱区域内区域内区域内区域内对对物物物物质质作定性定量分作定性定量分作定性定量分作定性定量分析。析。析。析。n
21、n采用光采用光采用光采用光栅单栅单色器、具色器、具色器、具色器、具有波有波有波有波长长精度高，精度高，精度高，精度高，单单色色色色性好等性好等性好等性好等优优点。点。点。点。n n采用采用采用采用3 3位位位位LEDLED数字数字数字数字显显示，示，示，示，T.A.CT.A.C直直直直读读。n n波波波波长长范范范范围围：330330800nm800nmn n波波波波长长准确度：准确度：准确度：准确度：2nm2nm752型紫外可见分光光度计型紫外可见分光光度计n n特点：特点：特点：特点：n n采用全息采用全息采用全息采用全息闪闪耀光耀光耀光耀光栅单栅单色器，具色器，具色器，具色器，具有波有波
22、有波有波长长精度高，精度高，精度高，精度高，单单色性好，色性好，色性好，色性好，杂杂散光低等散光低等散光低等散光低等优优点。点。点。点。n n能自能自能自能自动动切切切切换钨卤换钨卤灯和灯和灯和灯和氘氘灯。灯。灯。灯。n n采用采用采用采用3 3位位位位LEDLED数字数字数字数字显显示，具有示，具有示，具有示，具有T.A.CT.A.C直直直直读读能。能。能。能。n n技技技技术术目的目的目的目的: :n n波波波波长长范范范范围围：200200800nm800nmn n稳稳定性：暗定性：暗定性：暗定性：暗电电流漂移流漂移流漂移流漂移0.50.5()3min()3min754型紫外可见分光光度
23、计型紫外可见分光光度计n n 特点特点: :n n自动调整自动调整0 0和调整和调整100100具有超群的丈具有超群的丈量读数重现性和稳定量读数重现性和稳定性性. .n n由微处置机控制的打由微处置机控制的打印机可作实时记录印机可作实时记录. .n n可运用直线回归丈量可运用直线回归丈量线线, ,具有高准确度的浓具有高准确度的浓度运算程序度运算程序. .732型可见分光光度计型可见分光光度计n n自自自自动调动调整整整整“0“0“100“100，可，可，可，可直接消除比色皿配直接消除比色皿配直接消除比色皿配直接消除比色皿配对误对误差。差。差。差。n n丈量丈量丈量丈量读读数准确性高，重数准确性
24、高，重数准确性高，重数准确性高，重现现性和性和性和性和稳稳定性佳。定性佳。定性佳。定性佳。n n有有有有浓浓度直度直度直度直读读，线线性回性回性回性回归归，定定定定时时打印，打印，打印，打印，GOTOGOTO以及光以及光以及光以及光谱扫谱扫描等高描等高描等高描等高级级功能。功能。功能。功能。7230g型可见分光光度计型可见分光光度计n n自自自自动调动调零、自零、自零、自零、自动调满动调满度、度、度、度、自自自自动动建立建立建立建立线线性方程、性方程、性方程、性方程、A A、C C自自自自动动切切切切换换，浓浓度直度直度直度直读读。n n比色室能放置比色室能放置比色室能放置比色室能放置100n
25、m100nm比色比色比色比色皿，并配有托架。皿，并配有托架。皿，并配有托架。皿，并配有托架。n n具有自具有自具有自具有自动调动调理的波理的波理的波理的波长调长调整整整整机构，机构，机构，机构，调调整整整整时时无无无无须须打打打打 开机开机开机开机壳。壳。壳。壳。n n灯源采用固定灯源采用固定灯源采用固定灯源采用固定电压电压、灵敏、灵敏、灵敏、灵敏度在全波度在全波度在全波度在全波长长范范范范围围内由微机内由微机内由微机内由微机自自自自动动控制。控制。控制。控制。第五节第五节显色反响和显色条件的选择显色反响和显色条件的选择n n一、显色反响一、显色反响一、显色反响一、显色反响n nFe3+3NC
26、S-=Fe(NCS)3(Fe3+3NCS-=Fe(NCS)3(血红色血红色血红色血红色) )n n运用于比色分析的显色反响必需符合以下要求运用于比色分析的显色反响必需符合以下要求运用于比色分析的显色反响必需符合以下要求运用于比色分析的显色反响必需符合以下要求: :n n(1)(1)、显色反响的灵敏度要高、显色反响的灵敏度要高、显色反响的灵敏度要高、显色反响的灵敏度要高. .n n(2)(2)、有色化合物组成要固定、有色化合物组成要固定、有色化合物组成要固定、有色化合物组成要固定. .n n(3)(3)、有色化合物稳定性要高、有色化合物稳定性要高、有色化合物稳定性要高、有色化合物稳定性要高. .
27、n n(4)(4)、反响选择性要高、反响选择性要高、反响选择性要高、反响选择性要高. .二、显色条件的选择二、显色条件的选择二、显色条件的选择二、显色条件的选择n n1 1、显色剂用量、显色剂用量、显色剂用量、显色剂用量二、显色条件的选择二、显色条件的选择二、显色条件的选择二、显色条件的选择n n2 2、溶液的酸度、溶液的酸度、溶液的酸度、溶液的酸度n npHpHA二、显色条件的选择二、显色条件的选择二、显色条件的选择二、显色条件的选择n n3 3、显色时间、显色时间、显色时间、显色时间n ntmintminA二、显色条件的选择二、显色条件的选择二、显色条件的选择二、显色条件的选择n n4 4
28、、显色温度、显色温度、显色温度、显色温度n nTTA第六节、吸光光度法的误差及丈第六节、吸光光度法的误差及丈量条件的选择量条件的选择n n一、偏离朗伯一、偏离朗伯一、偏离朗伯一、偏离朗伯- -比耳定比耳定比耳定比耳定律所引起的误差律所引起的误差律所引起的误差律所引起的误差n n1 1、不同波长的入射光，、不同波长的入射光，、不同波长的入射光，、不同波长的入射光，有的物质的吸光系数有的物质的吸光系数有的物质的吸光系数有的物质的吸光系数a a是不同的是不同的是不同的是不同的. .n n2 2、由于介质不均匀而、由于介质不均匀而、由于介质不均匀而、由于介质不均匀而呵斥的呵斥的呵斥的呵斥的. .n n
29、3 3、由于化学变化所致、由于化学变化所致、由于化学变化所致、由于化学变化所致. .二、仪器丈量误差二、仪器丈量误差n n当当当当A=0.434A=0.434时，丈量值时，丈量值时，丈量值时，丈量值相对误差最小相对误差最小相对误差最小相对误差最小. .三三.丈量条件的选择丈量条件的选择n n1 1、入射光波长的选择、入射光波长的选择、入射光波长的选择、入射光波长的选择2、吸光度读数范围的选择、吸光度读数范围的选择T T最小最小最小最小=0.368,A=-logT=0.434=0.368,A=-logT=0.434， 3、参比溶液的选择、参比溶液的选择n n(1)(1)、当试液，显色剂及所用的其
30、他试剂在测定波优点无、当试液，显色剂及所用的其他试剂在测定波优点无、当试液，显色剂及所用的其他试剂在测定波优点无、当试液，显色剂及所用的其他试剂在测定波优点无吸收时，可用纯溶剂吸收时，可用纯溶剂吸收时，可用纯溶剂吸收时，可用纯溶剂( (或蒸馏水或蒸馏水或蒸馏水或蒸馏水) )作参比作参比作参比作参比; ;n n(2)(2)、假设显色剂无吸收，而待测试液在此波优点有吸收，、假设显色剂无吸收，而待测试液在此波优点有吸收，、假设显色剂无吸收，而待测试液在此波优点有吸收，、假设显色剂无吸收，而待测试液在此波优点有吸收，那么采用不加显色剂的待测试液作参比溶液那么采用不加显色剂的待测试液作参比溶液那么采用不
31、加显色剂的待测试液作参比溶液那么采用不加显色剂的待测试液作参比溶液. .n n(3)(3)、假设显色剂和待测试液均有吸收，可将一份试液，、假设显色剂和待测试液均有吸收，可将一份试液，、假设显色剂和待测试液均有吸收，可将一份试液，、假设显色剂和待测试液均有吸收，可将一份试液，参与适当的掩蔽剂将待测组分掩蔽起来，使之不再与显色参与适当的掩蔽剂将待测组分掩蔽起来，使之不再与显色参与适当的掩蔽剂将待测组分掩蔽起来，使之不再与显色参与适当的掩蔽剂将待测组分掩蔽起来，使之不再与显色剂反响，然后按操作步骤参与显色剂及其它试剂，以此作剂反响，然后按操作步骤参与显色剂及其它试剂，以此作剂反响，然后按操作步骤参与
32、显色剂及其它试剂，以此作剂反响，然后按操作步骤参与显色剂及其它试剂，以此作参比溶液参比溶液参比溶液参比溶液. .试液试液试液试液显色剂显色剂显色剂显色剂参比液参比液参比液参比液无色无色无色无色无色无色无色无色蒸馏水蒸馏水蒸馏水蒸馏水有色有色有色有色无色无色无色无色不加显色剂的试液不加显色剂的试液不加显色剂的试液不加显色剂的试液有色有色有色有色无色无色无色无色( (将将将将 被被被被 测测测测 组组组组 分分分分 掩掩掩掩 蔽蔽蔽蔽)显色剂试液显色剂试液显色剂试液显色剂试液第七节、吸光光度法的运用第七节、吸光光度法的运用n n一、示差分光光度法一、示差分光光度法一、示差分光光度法一、示差分光光度
33、法n n在分光光度法中，当被测组分含量高时，经常偏离朗在分光光度法中，当被测组分含量高时，经常偏离朗在分光光度法中，当被测组分含量高时，经常偏离朗在分光光度法中，当被测组分含量高时，经常偏离朗伯伯伯伯- -比耳定律比耳定律比耳定律比耳定律. .为了抑制这一缺陷，改用规范溶液替代为了抑制这一缺陷，改用规范溶液替代为了抑制这一缺陷，改用规范溶液替代为了抑制这一缺陷，改用规范溶液替代空白溶液来调理仪器的空白溶液来调理仪器的空白溶液来调理仪器的空白溶液来调理仪器的100%100%透光度，以提高方法准确透光度，以提高方法准确透光度，以提高方法准确透光度，以提高方法准确度度度度. .这种方法称为示差分光光
34、度法，简称为示差法这种方法称为示差分光光度法，简称为示差法这种方法称为示差分光光度法，简称为示差法这种方法称为示差分光光度法，简称为示差法. .n n示差分光光度法与普通分光光度法在详细操作步骤上示差分光光度法与普通分光光度法在详细操作步骤上示差分光光度法与普通分光光度法在详细操作步骤上示差分光光度法与普通分光光度法在详细操作步骤上主要不同之处是主要不同之处是主要不同之处是主要不同之处是: :普通分光光度法采用试剂的空白溶液普通分光光度法采用试剂的空白溶液普通分光光度法采用试剂的空白溶液普通分光光度法采用试剂的空白溶液作参比溶液，而示差分光光度法那么采用一个组成量作参比溶液，而示差分光光度法那
35、么采用一个组成量作参比溶液，而示差分光光度法那么采用一个组成量作参比溶液，而示差分光光度法那么采用一个组成量度与试样接近的规范溶液度与试样接近的规范溶液度与试样接近的规范溶液度与试样接近的规范溶液( (组成量度知组成量度知组成量度知组成量度知) )替代空白溶液替代空白溶液替代空白溶液替代空白溶液作参比溶液，根据测得的吸光度进展含量计算作参比溶液，根据测得的吸光度进展含量计算作参比溶液，根据测得的吸光度进展含量计算作参比溶液，根据测得的吸光度进展含量计算. .n n二、多组分的分析二、多组分的分析二、多组分的分析二、多组分的分析n n1. 1.吸收曲线不重叠吸收曲线不重叠吸收曲线不重叠吸收曲线不
36、重叠n n2. 2.吸收曲线单向重叠吸收曲线单向重叠吸收曲线单向重叠吸收曲线单向重叠n n3. 3.吸收曲线双向重叠吸收曲线双向重叠吸收曲线双向重叠吸收曲线双向重叠本章小结本章小结n n1 1吸光光度法的原理吸光光度法的原理吸光光度法的原理吸光光度法的原理n n知道朗伯知道朗伯知道朗伯知道朗伯 比耳定律是吸光光度法的定量根据，掌握朗伯比耳定律是吸光光度法的定量根据，掌握朗伯比耳定律是吸光光度法的定量根据，掌握朗伯比耳定律是吸光光度法的定量根据，掌握朗伯 比耳比耳比耳比耳定律的数学表达式及其意定律的数学表达式及其意定律的数学表达式及其意定律的数学表达式及其意义义，正确了解摩，正确了解摩，正确了解
37、摩，正确了解摩尔尔吸光系数的意吸光系数的意吸光系数的意吸光系数的意义义及及及及单单位，并会有关位，并会有关位，并会有关位，并会有关计计算，掌握互算，掌握互算，掌握互算，掌握互补补色光的原理和影响朗伯色光的原理和影响朗伯色光的原理和影响朗伯色光的原理和影响朗伯 比耳定律比耳定律比耳定律比耳定律偏离的要素。掌握吸收曲偏离的要素。掌握吸收曲偏离的要素。掌握吸收曲偏离的要素。掌握吸收曲线线在吸光光度分析中的作用。在吸光光度分析中的作用。在吸光光度分析中的作用。在吸光光度分析中的作用。n n2 2吸光光度法和丈量条件的吸光光度法和丈量条件的吸光光度法和丈量条件的吸光光度法和丈量条件的选择选择n n了解各
38、种吸光光度法的原理、特点、区了解各种吸光光度法的原理、特点、区了解各种吸光光度法的原理、特点、区了解各种吸光光度法的原理、特点、区别别及运用，掌握及运用，掌握及运用，掌握及运用，掌握规规范曲范曲范曲范曲线线的制造方法，并能根据的制造方法，并能根据的制造方法，并能根据的制造方法，并能根据规规范曲范曲范曲范曲线线( (任任任任务务曲曲曲曲线线) )计计算分析算分析算分析算分析结结果。知果。知果。知果。知道吸光光度法道吸光光度法道吸光光度法道吸光光度法仪仪器的主要部件，掌握吸光光度法丈量条件的器的主要部件，掌握吸光光度法丈量条件的器的主要部件，掌握吸光光度法丈量条件的器的主要部件，掌握吸光光度法丈量
39、条件的选择选择和和和和仪仪器的丈量器的丈量器的丈量器的丈量误误差。差。差。差。n n3 3显显色反响色反响色反响色反响n n了解了解了解了解显显色反响，掌握色反响，掌握色反响，掌握色反响，掌握显显色反响的要求和色反响的要求和色反响的要求和色反响的要求和显显色反响条件。色反响条件。色反响条件。色反响条件。n n4 4吸光光度法的运用吸光光度法的运用吸光光度法的运用吸光光度法的运用n n了解吸光光度法的运用，掌握了解吸光光度法的运用，掌握了解吸光光度法的运用，掌握了解吸光光度法的运用，掌握单单一一一一组组分的丈量方法。分的丈量方法。分的丈量方法。分的丈量方法。综合练习题：综合练习题：n n一、填空
40、一、填空一、填空一、填空题题：n n1 1可可可可见见分光光度法主要用于分光光度法主要用于分光光度法主要用于分光光度法主要用于对试样对试样溶液溶液溶液溶液进进展展展展_；以不同波以不同波以不同波以不同波长单长单色光作色光作色光作色光作为为入射光入射光入射光入射光测测得的某一溶液的吸光度得的某一溶液的吸光度得的某一溶液的吸光度得的某一溶液的吸光度为纵为纵坐坐坐坐标标，入射光波入射光波入射光波入射光波长为长为横坐横坐横坐横坐标标作作作作图图，所得曲，所得曲，所得曲，所得曲线线称称称称为为_。n n2 2为为提高提高提高提高测测定的准确度，溶液的吸光度定的准确度，溶液的吸光度定的准确度，溶液的吸光度
41、定的准确度，溶液的吸光度应调应调理在理在理在理在_范范范范围围，这这可可可可经过经过控制溶液的控制溶液的控制溶液的控制溶液的_和和和和选选用用用用_来来来来实现实现。n n3 3常用的参比溶液常用的参比溶液常用的参比溶液常用的参比溶液( (空白溶液空白溶液空白溶液空白溶液) )有有有有_、_和和和和_。n n4 4当温度和溶当温度和溶当温度和溶当温度和溶剂剂种种种种类类一定一定一定一定时时，溶液的吸光度与，溶液的吸光度与，溶液的吸光度与，溶液的吸光度与_和和和和_成正比，成正比，成正比，成正比，这这称称称称为为_定律。定律。定律。定律。n n5 5摩摩摩摩尔尔吸光系数吸光系数吸光系数吸光系数
42、是物是物是物是物质质的的的的_，其，其，其，其值值越大，越大，越大，越大，阐阐明溶液明溶液明溶液明溶液对对入射入射入射入射单单色光色光色光色光_，测测定的定的定的定的_愈愈愈愈高。普通高。普通高。普通高。普通 大于大于大于大于_就可就可就可就可进进展分光光度法展分光光度法展分光光度法展分光光度法测测定。定。定。定。n n二、是非二、是非二、是非二、是非题题：n n1 1分光光度法是根据溶液分光光度法是根据溶液分光光度法是根据溶液分光光度法是根据溶液对对光有光有光有光有选择选择性吸收及朗伯比性吸收及朗伯比性吸收及朗伯比性吸收及朗伯比耳定律耳定律耳定律耳定律对对物物物物质进质进展定性和定量分析的一
43、种方法。展定性和定量分析的一种方法。展定性和定量分析的一种方法。展定性和定量分析的一种方法。n n2 2分光光度法灵敏度高，特分光光度法灵敏度高，特分光光度法灵敏度高，特分光光度法灵敏度高，特别别适用常量适用常量适用常量适用常量组组分的分的分的分的测测定。定。定。定。n n3 3在分光光度分析中，吸光度愈大，丈量的在分光光度分析中，吸光度愈大，丈量的在分光光度分析中，吸光度愈大，丈量的在分光光度分析中，吸光度愈大，丈量的误误差愈小。差愈小。差愈小。差愈小。n n4 4当溶液中无干当溶液中无干当溶液中无干当溶液中无干扰扰物物物物质质存在存在存在存在时时，应选择应选择波波波波长为长为maxmax的
44、光的光的光的光作作作作为为入射光入射光入射光入射光进进展分光光度法展分光光度法展分光光度法展分光光度法测测定。定。定。定。n n5 5可可可可见见分光光度分光光度分光光度分光光度计计运用的吸收池是用石英制造的。运用的吸收池是用石英制造的。运用的吸收池是用石英制造的。运用的吸收池是用石英制造的。n n三、选择题：三、选择题：三、选择题：三、选择题：n n1 1符合比耳定律的有色溶液浓度改动时，其最大的吸收符合比耳定律的有色溶液浓度改动时，其最大的吸收符合比耳定律的有色溶液浓度改动时，其最大的吸收符合比耳定律的有色溶液浓度改动时，其最大的吸收峰位置有何变化峰位置有何变化峰位置有何变化峰位置有何变化
45、()()n na a、向长波挪动、向长波挪动、向长波挪动、向长波挪动n nb b、向短波挪动、向短波挪动、向短波挪动、向短波挪动n nc c、不改动，峰高也不改动、不改动，峰高也不改动、不改动，峰高也不改动、不改动，峰高也不改动n nd d、不改动，峰高改动、不改动，峰高改动、不改动，峰高改动、不改动，峰高改动n n2 2对显色反响产生影响的要素是下面哪一种对显色反响产生影响的要素是下面哪一种对显色反响产生影响的要素是下面哪一种对显色反响产生影响的要素是下面哪一种()()n na a、显色酸度、显色酸度、显色酸度、显色酸度n nb b、比色皿、比色皿、比色皿、比色皿n nc c、丈量波长、丈量
46、波长、丈量波长、丈量波长n nd d、仪器精细度、仪器精细度、仪器精细度、仪器精细度n n5 5在光度法测定中，当试剂和显色剂均有颜色时，参比溶液可在光度法测定中，当试剂和显色剂均有颜色时，参比溶液可在光度法测定中，当试剂和显色剂均有颜色时，参比溶液可在光度法测定中，当试剂和显色剂均有颜色时，参比溶液可选用哪种溶液选用哪种溶液选用哪种溶液选用哪种溶液()()n na a、水、水、水、水n nb b、加了试剂和显色剂的溶液、加了试剂和显色剂的溶液、加了试剂和显色剂的溶液、加了试剂和显色剂的溶液n nc c、将、将、将、将1 1份试液参与掩蔽剂掩蔽被测组分，再加试剂与显色剂份试液参与掩蔽剂掩蔽被测
47、组分，再加试剂与显色剂份试液参与掩蔽剂掩蔽被测组分，再加试剂与显色剂份试液参与掩蔽剂掩蔽被测组分，再加试剂与显色剂n nd d、未加显色剂只参与试剂的溶液、未加显色剂只参与试剂的溶液、未加显色剂只参与试剂的溶液、未加显色剂只参与试剂的溶液n n6 6朗伯朗伯朗伯朗伯- -比耳定律阐明，当一束单色光经过均匀的有色溶液时，比耳定律阐明，当一束单色光经过均匀的有色溶液时，比耳定律阐明，当一束单色光经过均匀的有色溶液时，比耳定律阐明，当一束单色光经过均匀的有色溶液时，有色溶液的吸光度与什么成正比有色溶液的吸光度与什么成正比有色溶液的吸光度与什么成正比有色溶液的吸光度与什么成正比()()n na a、溶
48、液的温度、溶液的温度、溶液的温度、溶液的温度n nb b、溶液的酸度、溶液的酸度、溶液的酸度、溶液的酸度n nc c、溶液的浓度和液层厚度的乘积、溶液的浓度和液层厚度的乘积、溶液的浓度和液层厚度的乘积、溶液的浓度和液层厚度的乘积n nd d、有色络合物的稳定性、有色络合物的稳定性、有色络合物的稳定性、有色络合物的稳定性7 7属于紫外可见分光光度计波长范围是多少属于紫外可见分光光度计波长范围是多少属于紫外可见分光光度计波长范围是多少属于紫外可见分光光度计波长范围是多少nm()nm()a a、20020010001000b b、420420700700c c、360360800800d d、400
49、4008008008 8在分光光度法中浓度丈量的相对误差较小在分光光度法中浓度丈量的相对误差较小在分光光度法中浓度丈量的相对误差较小在分光光度法中浓度丈量的相对误差较小(4%)(4%)的吸光度的吸光度的吸光度的吸光度范围是多少范围是多少范围是多少范围是多少()()a a、0.010.010.09%0.09%b b、0.10.10.20.2c c、0.20.20.70.7d d、0.80.81.01.09 9在分光光度法中，测定结果的相对误差与被测物浓度的在分光光度法中，测定结果的相对误差与被测物浓度的在分光光度法中，测定结果的相对误差与被测物浓度的在分光光度法中，测定结果的相对误差与被测物浓度的关系如何关系如何关系如何关系如何()()a a、随浓度增大而增大、随浓度增大而增大、随浓度增大而增大、随浓度增大而增大b b、随浓度增大而减小、随浓度增大而减小、随浓度增大而减小、随浓度增大而减小c c、在浓度增大过程中出现一个最低值、在浓度增大过程中出现一个最低值、在浓度增大过程中出现一个最低值、在浓度增大过程中出现一个最低值d d、在浓度增大过程中出现一个最高值、在浓度增大过程中出现一个最高值、在浓度增大过程中出现一个最高值、在浓度增大过程中出现一个最高值
