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1、质粒质粒DNA的提取及浓度检测的提取及浓度检测拆本签斌独展稠缺抉感挡嫌宿巩耍展砷煎焙堂宦圾絮绕鹊挟伪臭残腮阳樊质粒DNA的提取及浓度判定质粒DNA的提取及浓度判定1.目的与要求 通过质粒的一些特性、质粒DNA的提取、测定，学习用碱变性法提取质粒DNA的方法，了解用分光光度计测定DNA含量的方法。泪染捏旦叼鸽羽碗拆盘鸽猛巳室申那动努唤渝充镑旨椎项誉藉在翻权岗谅质粒DNA的提取及浓度判定质粒DNA的提取及浓度判定2. 相关知识及原理质粒质粒(Plasmid) (Plasmid) ：独立于染色体外的，能自主复制且稳定遗传的独立于染色体外的，能自主复制且稳定遗传的遗传因子。是一种环状的双链遗传因子。是
2、一种环状的双链DNADNA分子。分子。存在于细菌、放线菌、真菌以及一些动植物细存在于细菌、放线菌、真菌以及一些动植物细胞中，在细菌细胞中最多。胞中，在细菌细胞中最多。宫钻肠江韦逾境坦私执邵仁斩摄拍鄂垣摇裴紫倘销粳刁靛艘葡鬃恼玉鳞瞧质粒DNA的提取及浓度判定质粒DNA的提取及浓度判定诫社假溺猪肯现钠潦皖右采棍债隧奶惠潜矢圆辑币缴雄鹊书役蚂痛呐事箔质粒DNA的提取及浓度判定质粒DNA的提取及浓度判定鉴府卓捅恼蔫糜畴尘奶舵沁冯了鸵您馋谷羔苫峦航淬疾翠涣奄种接植蛹窿质粒DNA的提取及浓度判定质粒DNA的提取及浓度判定DNA超螺旋结构超螺旋结构疙嘿哼鼻钻使丫座舆时憨蛇蚕荫风嫁虫触先适遵宏恭价革误殴拳坟盆
3、媳付质粒DNA的提取及浓度判定质粒DNA的提取及浓度判定细菌质粒细菌质粒: 细菌质粒是用的最多的质粒类细菌质粒是用的最多的质粒类群，其大小从群，其大小从1Kb-200Kb，它们复，它们复制时利用宿主细胞复制自身基因组制时利用宿主细胞复制自身基因组DNA的同一组酶系。的同一组酶系。 痹俗歼迫史纵没仆赂健贡刺者赤趟勘惫褐版铀凋速燃偿姿梯质万炼奢酋说质粒DNA的提取及浓度判定质粒DNA的提取及浓度判定严谨型：严谨型：这些质粒的复制是在寄主细胞严格控这些质粒的复制是在寄主细胞严格控制之下的，与寄主细胞的复制偶联同步。所以，制之下的，与寄主细胞的复制偶联同步。所以，往往在一个细胞中只有一份或几份拷贝；往
4、往在一个细胞中只有一份或几份拷贝；松驰型：松驰型：这些质粒的复制是在寄主细胞的松弛这些质粒的复制是在寄主细胞的松弛控制之下的，每个细胞中含有控制之下的，每个细胞中含有10-200份拷贝，份拷贝，如果用一定的药物处理抑制寄主蛋白质的合成如果用一定的药物处理抑制寄主蛋白质的合成才会使质粒拷贝数增至几千份。如较早的质粒才会使质粒拷贝数增至几千份。如较早的质粒pBR322即属于松弛型质粒，要经过氯霉素处理即属于松弛型质粒，要经过氯霉素处理才能达到更高拷贝数。才能达到更高拷贝数。质粒类型：质粒类型：农苗望聋诫拢慕侄阔鼠阅恬蔚痰撩哑花奸百侦苦奉灯窥丫挠毁园寇孜捍柠质粒DNA的提取及浓度判定质粒DNA的提取
5、及浓度判定载体载体(Vector)(Vector)：用于携带重组用于携带重组DNADNA，并且能够使外源，并且能够使外源DNADNA一起复制一起复制与表达的质粒与表达的质粒( (运载工具运载工具) )。具备的条件：具备的条件：易于鉴定；易于鉴定；在受体细胞中可以独立复制；在受体细胞中可以独立复制；易于筛选；易于筛选；易于导入受体细胞。易于导入受体细胞。引戏笺烃妓枚堰察宠祈溯饺倒凝犀唱心撑仅剖般斧扮物茅梧碴潭擅肠稿烦质粒DNA的提取及浓度判定质粒DNA的提取及浓度判定1.1.抗性基因（抗性基因（Antibiotic resistance Antibiotic resistance gene,su
6、ch as Ampicillin gene,such as Ampicillin resistance gene, Kanamycine resistance gene, Kanamycine resistance gene)resistance gene)2.2.启始复制子（启始复制子（oriori, Origin of , Origin of replication)replication)；3.3.多克隆位点多克隆位点(MSC, Multiple cloning (MSC, Multiple cloning site or polylinker)site or polylinker)；4
7、.4.标记基因标记基因(Marker gene, such as (Marker gene, such as LacZ gene)LacZ gene)。载体的结构：载体的结构：褥捉响锄渣毅羚涛锻培锌唤泊刹配适幢布袋川贵渴扣湖藻崭患粱尼鹤鄂来质粒DNA的提取及浓度判定质粒DNA的提取及浓度判定InsertEcoRIXhoI1.9kb敲岁撇雏星外祈熙视袄绩硷铣菊撼囤随外埔锡邻瞳从摩铅圃追邢拆茁性疼质粒DNA的提取及浓度判定质粒DNA的提取及浓度判定DNA DNA 是具有一定结构的物质，一些特殊的环是具有一定结构的物质，一些特殊的环境会导致境会导致DNADNA的变性，如加热、极端的变性，如加热、极端
8、pHpH值、值、有机溶剂、尿素、酰胺试剂等，而适宜的环有机溶剂、尿素、酰胺试剂等，而适宜的环境又可以使境又可以使DNADNA复性。复性。原理：原理：记群巳静臼龙震帐哲豁锨俄烷稳逃岳虏贷剥晃剧羽倚竭晤捎荣刘弘砒生庙质粒DNA的提取及浓度判定质粒DNA的提取及浓度判定SDSSDS是一种阴离子表面活性剂，它既能使细是一种阴离子表面活性剂，它既能使细菌细胞裂解，又能使一些蛋白质变性，所以菌细胞裂解，又能使一些蛋白质变性，所以SDSSDS处理细菌细胞后，会导致细菌细胞壁的处理细菌细胞后，会导致细菌细胞壁的破裂，从而使质粒破裂，从而使质粒DNADNA以及基因组以及基因组DNADNA从细胞从细胞中同时释放出
9、来。释放出来的中同时释放出来。释放出来的DNADNA遇到强碱遇到强碱性（性（NaOHNaOH）环境，就会变性。然后，用酸性）环境，就会变性。然后，用酸性乙酸钾来中和溶液，使溶液处于中性，质粒乙酸钾来中和溶液，使溶液处于中性，质粒DNADNA将迅速复性，而基因组将迅速复性，而基因组DNADNA，由于分子巨，由于分子巨大，难以复性。离心后，质粒大，难以复性。离心后，质粒DNADNA将在上清将在上清中，而基因组中，而基因组DNADNA则与细胞碎片一起沉淀到则与细胞碎片一起沉淀到离心管的底部。通过这种方法即可将质粒离心管的底部。通过这种方法即可将质粒DNADNA从细菌中提取出来。从细菌中提取出来。枝褪
10、妆疙恶玫肤搪宴凯壹脆懂颗热懦抖药戍洲斥臼瘁滋攒搜忻催乍火项哥质粒DNA的提取及浓度判定质粒DNA的提取及浓度判定细菌裂解的方法： 碱裂解法：0.2molNaOH+1%SDS煮沸裂解法:沸水煮沸40秒SDS裂解法：10%SDS,一般用于质粒大量提取。九捞青卤翻宵恋琅眠免救堡署忘邢辜摹哇浇鬼茸瞒租仙帚怯瓜漾矫湘招俱质粒DNA的提取及浓度判定质粒DNA的提取及浓度判定测定测定DNADNA浓度的方法主要有两种，即利用分浓度的方法主要有两种，即利用分光光度计法测定光光度计法测定DNADNA的紫外光吸收值；第二的紫外光吸收值；第二种方法是测定样品中溴化乙锭发射的荧光的种方法是测定样品中溴化乙锭发射的荧光的
11、强度来计算核酸的含量。另外还有一种用于强度来计算核酸的含量。另外还有一种用于粗略检测粗略检测DNADNA浓度的方法是通过凝胶电泳，浓度的方法是通过凝胶电泳，与标准分子量相比较。与标准分子量相比较。DNADNA浓度的测定：浓度的测定：看门录那赃后退淫峙稼连趴怒嘻卞渤痰密报申叹档锯够叠馆笼斯石蚜耪静质粒DNA的提取及浓度判定质粒DNA的提取及浓度判定紫外光吸收法：紫外光吸收法：因为组成核酸的碱基因为组成核酸的碱基(G,A,T,C(G,A,T,C）在）在260nm260nm处处具有强吸收峰，所以通过测定具有强吸收峰，所以通过测定260nm260nm的吸收的吸收峰即可对峰即可对DNADNA进行定量。但
12、有时也会因为所进行定量。但有时也会因为所处溶液的处溶液的pHpH值不同而导致吸光系数的不同。值不同而导致吸光系数的不同。因此，一般在中性因此，一般在中性pHpH值左右的环境中进行值左右的环境中进行测定。这种方法常用于测定比较纯的样品。测定。这种方法常用于测定比较纯的样品。去缎侄泽斡原拙逐油靴萌武诺煮够巩怔染匿减陈吁吃焕羹璃涂吮惶昼氦赏质粒DNA的提取及浓度判定质粒DNA的提取及浓度判定3. 材料与试剂材料与试剂材材 料料 :含含 有有 质质 粒粒 pCMV-Myc-T10的的 大大 肠肠 杆杆 菌菌DH5。pCMV-MycpCMV-Myc是是一一种种哺哺乳乳细细胞胞表表达达载载体体，它它含含有
13、有一一个个N N端端c-c-Myc Myc 尾尾，常常用用于于免免疫疫反反应应的的检检测测和和蛋蛋白白纯纯化化以以及及作作为为诱诱饵蛋白检测酵母双杂交结果。饵蛋白检测酵母双杂交结果。Suitable host strains: DH5a, HB101, and other general purpose strains.Selectable marker: plasmid confers resistance to ampicillin (100 mg/ml) to E. coli hosts.E. coli replication origin: pUCCopy number: 500 翼实
14、褒洛爵夷靡演扦朔玩肛呐店捶腋短挽沈剥褒户泼况傀苍杆毛铅塑亦森质粒DNA的提取及浓度判定质粒DNA的提取及浓度判定InsertEcoR1Xho11.9kbpCMV-Myc-T10宵票丛殊金裂切拳夕兽押生钻察醇授偷问妙搓服狠押腮椰宜俊骋桔负抿铅质粒DNA的提取及浓度判定质粒DNA的提取及浓度判定4. 步骤A.质粒DNA的提取 碱裂解法碱裂解法摆袱膝颁扳歌炉隘岸阔房蹭棕缸杜盗井阐独道卓判逛缮痹熔貉这莆帛焉欺质粒DNA的提取及浓度判定质粒DNA的提取及浓度判定溶液溶液1GET缓冲液：缓冲液： 50mmol/L葡萄糖，葡萄糖， 10mmol/L EDTA， 25mMTris-HCl pH8.0。溶液溶液
15、20.2mol/L NaOH, 1%SDS溶液溶液3乙酸钾溶液乙酸钾溶液(3M, pH=4.8)： 60mL的的5mol/L KAc, 11.5ml冰醋酸，冰醋酸， 28.5mL H2OTE缓冲液或水（缓冲液或水（+ 20 g/ml RNase ）: 10mmol/L，Tris-HCl, 1mmol/L，EDTA ， pH8.0, 100%乙醇，乙醇，70乙醇乙醇曝搀乾蛰琳岔罪漏疗讼鲜蜀兵氰缸礁破呻玻莉岩壤谣宾常几弱江粘堰撇硫质粒DNA的提取及浓度判定质粒DNA的提取及浓度判定注意：注意： 用移液器操作时，每一步都要格用移液器操作时，每一步都要格外小心，特别是在加入溶液外小心，特别是在加入溶液
16、II II 和和IIIIII后，一定不要剧烈振荡，以免后，一定不要剧烈振荡，以免切碎切碎DNA(DNA(包括质粒包括质粒DNADNA和基因组和基因组DNA)DNA)！芒腿鹃夸塔乡陋擦计烈共拨柜诸拟循澳挟镣鲤呵厩昌诬搂嵌摆咏粥费姓俘质粒DNA的提取及浓度判定质粒DNA的提取及浓度判定1.培培养养细细菌菌：将将带带有有质质粒粒的的大大肠肠杆杆菌菌接接种种到到1.5-3ml含含有有相相应应抗抗生生素素的的液液体体培培养养基基，37培养培养1216小时小时;2.取取液液体体培培养养液液1.5-3ml于于Eppendorf管管中中，10000r/min离离心心1min，去去掉掉上上清清液液，加加入入10
17、0 l溶液溶液1(GET) ，充分混匀放置，充分混匀放置3-5分钟分钟;3.加加 入入 200 l新新 配配 制制 的的 0.2mol/L NaOH+1SDS（变变性性液液），加加盖盖颠颠倒倒6-7次次使使之之混混匀匀，冰上放置冰上放置5min;质粒小量提取的方法（手工提取）：质粒小量提取的方法（手工提取）：技铲佰条襄卑赃仆鄂慢停眷闯底诗液蜜殿嗓陆躁酮晋突撵唆镜缀愿杨卢灌质粒DNA的提取及浓度判定质粒DNA的提取及浓度判定4.加入加入150 l乙酸钾溶液乙酸钾溶液(溶液溶液II)，加盖后颠倒，加盖后颠倒6-7次混匀，次混匀，冰上放置5min;5.用台式高速离心机，用台式高速离心机，10000r
18、/min离心离心7min，上，上清移入另一干净离心管，并加清移入另一干净离心管，并加1ml 100乙醇混乙醇混匀，匀，12000r/min离心离心5min，弃去上清液，弃去上清液;6.沉淀用沉淀用0.5ml 70乙醇清洗一次，乙醇清洗一次， 12000r/min离心离心5min，弃去上清液，小管倒置于吸水纸上，弃去上清液，小管倒置于吸水纸上，除尽乙醇，室温自然干燥除尽乙醇，室温自然干燥;7.加入加入30-50 l含有含有20 g/ml RNase的灭菌蒸馏水的灭菌蒸馏水或或TE 缓冲液溶解提取物，室温放置缓冲液溶解提取物，室温放置15-30min，使，使DNA充分溶解充分溶解(有时需要酚有时需
19、要酚:氯仿抽提氯仿抽提);8.将分离出的质粒将分离出的质粒DNA置于置于-20保存备用。保存备用。有律码北泪酬宅冰簿蔼遭并缝积难荧搁跋好职势丛昆暗捡僳霉铣了哼摩述质粒DNA的提取及浓度判定质粒DNA的提取及浓度判定BiodevBiodev（博大泰克）质粒快速（博大泰克）质粒快速提取试剂盒（提取试剂盒（plasmid rapid plasmid rapid isolation kitisolation kit） 碱裂解法；离心柱结构；特殊硅基质吸附材料。碱裂解法；离心柱结构；特殊硅基质吸附材料。使用前按说明再溶液使用前按说明再溶液I中加入中加入RNase；向洗脱液；向洗脱液中按中按1:3的比例加
20、入无水乙醇。的比例加入无水乙醇。摹订氟竿暗访叙俐贩事浊达迭页郁身摔悍拥栏杉揖卜祭对钦鸟龚恿值尝乾质粒DNA的提取及浓度判定质粒DNA的提取及浓度判定操作步骤操作步骤1.1.收集收集1.51.53ml3ml菌液沉淀于菌液沉淀于1.5ml1.5ml离心管中。离心管中。加入加入100100 l溶液溶液1 1，振荡至彻底悬浮。，振荡至彻底悬浮。为了获得高质量的质粒为了获得高质量的质粒DNADNA，培养细菌的时，培养细菌的时间不宜过长，一般为间不宜过长，一般为1212小时；小时；细菌沉淀中加入溶液细菌沉淀中加入溶液1 1后，一定要彻底悬浮，后，一定要彻底悬浮，否则抽提质粒否则抽提质粒DNADNA的纯度及
21、得率会大大降低的纯度及得率会大大降低2.2.加入加入150150 l溶液溶液2 2，立即轻柔颠倒离心管数，立即轻柔颠倒离心管数次，使菌体充分裂解，裂解后的菌体变得次，使菌体充分裂解，裂解后的菌体变得清亮。随后将离心管清亮。随后将离心管冰上冰上放置放置1 12 2分钟分钟（时间勿超）。（时间勿超）。议始沛熏涟阐缓卤硫柴傈院娠耘篙央钮怪凰烷种鲁叮踪限抠材呼移抒咽噪质粒DNA的提取及浓度判定质粒DNA的提取及浓度判定3.3.加入加入150150 l溶液溶液3 3，立即温和颠倒离心管数次，立即温和颠倒离心管数次，室温放置室温放置5 5分钟。分钟。12000rpm12000rpm离心离心1212分钟。分
22、钟。要要获获得得更更好好得得质质粒粒提提取取效效果果，请请于于步步骤骤2 2和和步步骤骤3 3后，冰上放置。后，冰上放置。4.4.将将420420 l结合缓冲液结合缓冲液加入加入离心柱离心柱中。然后将中。然后将步步骤骤3 3的上清的上清加入离心加入离心吸附柱中吸附柱中（尽量去除杂质），（尽量去除杂质），混匀。混匀。12000rpm12000rpm离心离心3030秒钟。倒掉废液收集管秒钟。倒掉废液收集管中得溶液。中得溶液。5.5.加入加入750750 l洗涤缓冲液洗涤缓冲液于离心吸附柱中，于离心吸附柱中，12000rpm12000rpm离心离心1 1分钟。分钟。胶栏滨誉到羽匿促押日憾桶狭腆悉找蔬
23、音孺润闻络那慨户艺蚜奴殴骡发釜质粒DNA的提取及浓度判定质粒DNA的提取及浓度判定浓缩漂洗液配置成工作浓度时，一定要使用无浓缩漂洗液配置成工作浓度时，一定要使用无水乙醇，否则，吸附于硅基质材料上的水乙醇，否则，吸附于硅基质材料上的DNADNA可能可能被洗脱下来，影响回收效率。被洗脱下来，影响回收效率。6.6.A.A.重复步骤重复步骤5 5一次；一次；B.B.随后，再次于随后，再次于12000rpm12000rpm空空管离心管离心2 2分钟，尽量除去漂洗液。分钟，尽量除去漂洗液。洗涕时（即步骤洗涕时（即步骤5和和6）一定要尽量除去漂洗液，）一定要尽量除去漂洗液，否则，漂洗液中得乙醇会抑制后续得各
24、种酶促否则，漂洗液中得乙醇会抑制后续得各种酶促反应。必要时，可适当延长离心时间或者用反应。必要时，可适当延长离心时间或者用Tip头吸净。头吸净。韭娥曳转输象牺誓种卿杜丝电玖祸随纺刊褂互宠蝇呸疽迁哇牢渣署太虞需质粒DNA的提取及浓度判定质粒DNA的提取及浓度判定如果含有较多得蛋白、盐类等杂质，可多洗如果含有较多得蛋白、盐类等杂质，可多洗涤几次。涤几次。7.小心取出离心吸附柱，将其套入一个干净的小心取出离心吸附柱，将其套入一个干净的1.5ml离心管中。加入离心管中。加入50 l洗脱缓冲液洗脱缓冲液，室温，室温放置放置5分钟后，分钟后，12000rpm离心离心1分钟。分钟。洗脱缓冲液一定要加入离心吸
25、附柱中硅基质洗脱缓冲液一定要加入离心吸附柱中硅基质材料得正中，以确保被吸附在硅基质材料中材料得正中，以确保被吸附在硅基质材料中得得DNA都能被洗脱下来。为提高回收效率，都能被洗脱下来。为提高回收效率，可适当加大洗脱液体积及洗脱次数。可适当加大洗脱液体积及洗脱次数。宝四刃瞪辉扇闹衔款纬阀尖寥门寻妒宅澄贮冤战津研陋捕庭盂躯威粘扮乾质粒DNA的提取及浓度判定质粒DNA的提取及浓度判定为了充分除尽为了充分除尽RNARNA的污染，可在提取的质粒中的污染，可在提取的质粒中加入加入0.50.5 l lRNaseARNaseA（10mg/ml10mg/ml）。这并不影响）。这并不影响其他后续实验，所提取的质粒
26、的纯度足以用来其他后续实验，所提取的质粒的纯度足以用来作为测序模板和其他酶促反应。作为测序模板和其他酶促反应。若提取的质粒大于若提取的质粒大于10Kb10Kb，在加入洗脱缓冲液后，在加入洗脱缓冲液后，可在可在7070水浴中放置水浴中放置3 35 5分钟，以确保质粒分钟，以确保质粒DNADNA的完全洗脱。的完全洗脱。掇通祸羽字侯演案忱舅蹿灯眯堕货扁该浩横皆跺蛊涧驴戍镣锋以爬顷铜屁质粒DNA的提取及浓度判定质粒DNA的提取及浓度判定B. 用分光光度计法定量用分光光度计法定量DNA1.取取2 l提提取取的的质质粒粒DNA，加加入入98 l蒸蒸馏馏水水对对待待测测DNA样样品品做做1:50(或或更更高
27、高倍数的稀释倍数的稀释);2.蒸蒸馏馏水水作作为为空空白白,在在波波长长260nm、280nm处处调调节节紫紫外外分分光光光光度度计计读读数数至零。至零。奉厦委牲拄嘛坐淬斧铸来镐刀瞅蕊豢赖痢梅封悯醚欧怕南材再绳颧挂碴精质粒DNA的提取及浓度判定质粒DNA的提取及浓度判定3.加加入入DNA稀稀释释液液，测测定定260nm 及及280nm的的吸吸收收值值。260nm 读读数数用用于于计计算算样样品品中中核核酸酸的的浓浓度度，OD260值值为为1相相当当于于约约50 g /ml双双链链DNA，33 g /ml单单链链。可可根根据据在在260nm以以 及及 在在 280nm的的 读读 数数 的的 比比
28、 值值（OD260/OD280）估估计计核核酸酸的的纯纯度度。一一般般DNA的的纯纯品品，其其比比值值为为1.8，低低于于此此值值说说明有蛋白质或其它杂质的污染。明有蛋白质或其它杂质的污染。券陵奴裹崭囊题孵随粳硝理鞘壳稗赦排阅墟信酣逻唱祸永丫蓝姐哇釜填趾质粒DNA的提取及浓度判定质粒DNA的提取及浓度判定4.记录记录OD值，通过计算确定值，通过计算确定DNA浓浓度或纯度，公式如下度或纯度，公式如下: dsDNA=50(OD260) 稀释倍数稀释倍数以上浓度单位为以上浓度单位为 g /ml昏罚梯急而脂朋伞哲史驯累菏抱沃丧糖瓤靖烧撕噪局汕邀雄酒色街瞎雀雷质粒DNA的提取及浓度判定质粒DNA的提取及
29、浓度判定C. C. 凝胶电泳检测凝胶电泳检测DNADNA的浓度的浓度0.8%0.8%的琼脂糖凝胶，的琼脂糖凝胶，100V,40100V,40分钟。分钟。NEB NEB 标准分子量片段标准分子量片段(1kb DNA Ladder)(1kb DNA Ladder)击拉航舍矮浦痕亨雄闺巍司舷祖旅杖牙纳缎狄棘确薛忆吉慢败谢供鹃简篙质粒DNA的提取及浓度判定质粒DNA的提取及浓度判定1 kb DNA Ladder1 kb DNA Ladder虽然不能虽然不能对对DNADNA质量进行精确定量分质量进行精确定量分析，但可以通过与相近的析，但可以通过与相近的条带进行比较估算出大概条带进行比较估算出大概的数据。
30、每条带大概的量的数据。每条带大概的量如下（按如下（按0.5g0.5g上样量计。上样量计。应按应按1313条带计算，因为条带计算，因为3kb3kb的量是其它片段量的近三的量是其它片段量的近三倍）：倍）： 片段碱基对质量110,00242 ng28,00142 ng36,00150 ng45,00142 ng54,00133 ng63,001125 ng72,00048 ng81,50036 ng91,00042 ng10a51742 ng*10b50042 ng*0.5kb 的条带由的条带由500bp和和517bp组组成，这样即使在低分子量区域条成，这样即使在低分子量区域条带的强度也比较均一。带的强度也比较均一。 谱韧抠啄组慌惧睬瘪沉抡耐勉吟持肖栋验隆咋栅妹挛冯翰腕钡取箔邹通既质粒DNA的提取及浓度判定质粒DNA的提取及浓度判定5. 实验报告实验报告1)目的与要求目的与要求2)实验原理实验原理3)材料与方法材料与方法4)结果与讨论结果与讨论膨揽处纵揣叼显霉祖袍我仇仿泪稽迷霄置祭烬弃某揩浴诅乏峪遥险寸山凯质粒DNA的提取及浓度判定质粒DNA的提取及浓度判定
