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1、实验八：小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的观察l【课前预习】l实验前给小鼠腹腔注射台盼兰淀粉肉汤的目的是什么？1实实 验验 目目 的的1、通过对小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞活、通过对小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞活动的观察，加深理解细胞吞噬作用的过程及其动的观察，加深理解细胞吞噬作用的过程及其意义。意义。2、掌握小鼠腹腔注射给药和颈椎脱臼处死方法。、掌握小鼠腹腔注射给药和颈椎脱臼处死方法。观察机体的非特异性免疫现象。观察机体的非特异性免疫现象。3熟悉细胞吞噬作用的基本过程熟悉细胞吞噬作用的基本过程2实实 验验 原原 理理l细胞吞噬作用原来是单细胞动物摄取营养物细胞吞噬作用原来是单细胞动物摄取营养物质
2、的方式，也是原始防御作用。随着动物界质的方式，也是原始防御作用。随着动物界的进化，在高等动物中，则发展生成大小两的进化，在高等动物中，则发展生成大小两类吞噬细胞类吞噬细胞(即巨噬细胞和嗜中性粒细胞即巨噬细胞和嗜中性粒细胞)，专司吞噬作用，成为非特异免疫功能的重要专司吞噬作用，成为非特异免疫功能的重要组成部分。组成部分。3l 巨噬细胞由骨髓干细胞分化生成，然后巨噬细胞由骨髓干细胞分化生成，然后进入血液到达各组织内，并进一步分化为各进入血液到达各组织内，并进一步分化为各种巨噬细胞。当病原微生物或其它异物侵入种巨噬细胞。当病原微生物或其它异物侵入机体时，能招引巨噬细胞，而巨噬细胞又有机体时，能招引巨
3、噬细胞，而巨噬细胞又有趋化性，能响应招引因子的招引，产生活跃趋化性，能响应招引因子的招引，产生活跃的变形运动，主动向病原体和异物移行，在的变形运动，主动向病原体和异物移行，在接触到病原体或异物时，即接触到病原体或异物时，即伸出伪足，将伸出伪足，将之包围并内吞人胞质，形成吞噬体，继而细之包围并内吞人胞质，形成吞噬体，继而细胞质中的初级溶酶体与吞噬泡发生融合，形胞质中的初级溶酶体与吞噬泡发生融合，形成吞噬性溶酶体，通过其中水解酶等作用下，成吞噬性溶酶体，通过其中水解酶等作用下，将病原体杀死，消化分解，最后将不能消化将病原体杀死，消化分解，最后将不能消化的残渣排出细胞外。的残渣排出细胞外。4 在机体
4、的免疫过程中，巨噬细胞承在机体的免疫过程中，巨噬细胞承担着噬菌、杀菌、清除体内被损伤和衰担着噬菌、杀菌、清除体内被损伤和衰老的细胞，以及传递抗原信息，巨噬细老的细胞，以及传递抗原信息，巨噬细胞将捕获的抗原进行加工处理后，把降胞将捕获的抗原进行加工处理后，把降解的抗原信息传递给解的抗原信息传递给T、B淋巴细胞。巨淋巴细胞。巨噬细胞又是天然杀伤细胞（噬细胞又是天然杀伤细胞（NK Cell)的激的激活剂，而且对活剂，而且对B淋巴细胞的激活、增殖和淋巴细胞的激活、增殖和分化具有调节作用。分化具有调节作用。5l【实验用品】l1材料：小白鼠、1%鸡红细胞悬液l2试剂：6%的淀粉肉汤（含台盼蓝），0.9%生
5、理盐水l3仪器设备：显微镜、注射器、注射针头、吸管、试管架、解剖刀、解剖镊、载玻片、盖玻片、记号笔6 实实 验验 方方 法法 1、在实验前一天，给小白鼠腹腔注射、在实验前一天，给小白鼠腹腔注射5鸡红细胞鸡红细胞 lml/只。注射时，先用右手抓住鼠尾提起，放在实只。注射时，先用右手抓住鼠尾提起，放在实验台上，用左手的拇指和食指抓住小鼠两耳和头颈验台上，用左手的拇指和食指抓住小鼠两耳和头颈皮肤，将鼠体置于左手心中，把后肢拉直，用左手皮肤，将鼠体置于左手心中，把后肢拉直，用左手的无名指和小指按住尾巴与后肢，前肢可用中指固的无名指和小指按住尾巴与后肢，前肢可用中指固定，即可在腹部后定，即可在腹部后 l
6、2处的一侧注射。进针勿过深，处的一侧注射。进针勿过深，否则易损害肝及血管等，造成出血致死。腹腔注射否则易损害肝及血管等，造成出血致死。腹腔注射1鸡红细胞悬液鸡红细胞悬液lml，轻按小白鼠腹部，使悬液分，轻按小白鼠腹部，使悬液分散。散。 72、约、约20分钟后，用颈椎脱臼法处死小鼠分钟后，用颈椎脱臼法处死小鼠(右右手抓住鼠尾，用力向后拉，左手拇指与食手抓住鼠尾，用力向后拉，左手拇指与食指同时向下按住鼠头，使脊髓与脑髓间断指同时向下按住鼠头，使脊髓与脑髓间断开致鼠死亡开致鼠死亡)。 3、将小鼠置于解剖盘中，剪开腹部，把内、将小鼠置于解剖盘中，剪开腹部，把内脏推向一侧，用不装针头的注射器或吸管脏推向
7、一侧，用不装针头的注射器或吸管吸取腹腔液。吸取腹腔液。4、每人取一张干净载玻片，滴一滴腹腔液，、每人取一张干净载玻片，滴一滴腹腔液，盖上盖玻片，置显微镜下观察。盖上盖玻片，置显微镜下观察。 85、吸取的腹腔液与、吸取的腹腔液与 Hanks 液液1：1混混合，并且滴数滴于载玻片上，合，并且滴数滴于载玻片上，37OC 温育温育30分钟。分钟。6、玻片取出，用生理盐水冲洗，吹干，、玻片取出，用生理盐水冲洗，吹干，甲醇固定甲醇固定5分钟。分钟。7、Gimasa染液染色，干燥后油镜观察。染液染色，干燥后油镜观察。9l【实验结果】l在高倍镜下可见有许多较大的圆形和形状不规则的巨噬细胞，因未染色细胞核不易见
8、到，其胞质中含有数量不等的兰色圆形小颗粒（即吞入的含台盼兰的淀粉肉汤所形成）；还可见少量黄色椭圆形有明显细胞核的鸡红细胞，慢慢移动玻片标本，仔细观察视野中的巨噬细胞表面，有的红细胞已部分被吞入；有的巨噬细胞内已吞入了一个或多个红细胞形成吞噬泡。10巨噬细胞巨噬细胞巨噬细胞巨噬细胞吞噬实验吞噬实验吞噬实验吞噬实验示教照片示教照片示教照片示教照片鸡红细胞鸡红细胞巨噬细胞巨噬细胞吞噬鸡红细胞后的巨噬细胞吞噬鸡红细胞后的巨噬细胞吞噬鸡红细胞后的巨噬细胞吞噬鸡红细胞后的巨噬细胞111213l【实验报告】l1镜检时，你能在视野中看到几种类型的细胞？绘图说明巨噬细胞吞噬过程。l2巨噬细胞将如何进一步处理被吞噬的红细胞？14
