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1、制药股份有限公司标准操作规程标 题：中药材及其制剂显微鉴定法生效日期 年 月 日 页次：1/10编号：SOPQC05801颁发部门：质量管理部 新订 修订原文件号：编制：部门审核：QA审核：批准：分发部门： QC。目的：建立中药材及制剂显微鉴定方法操作规程。范围：所有购进的中药材及正式生产的含原药粉的制剂品种。责任者：QC主任、检验员对本SOP的实施负责。规程：1. 药材及成方制剂显微鉴定法是应用动植物细胞、组织和矿物晶体光学等知识鉴别中药材或中成药的一种方法。通常是借助显微镜进行观察，故称“显微鉴别法”主要适用于：1.1. 药材性状鉴别特征不明显或外形相似而组织构造不同；1.2. 药材破碎不
2、易辨别或区分；1.3. 药材呈粉末状态或为成方制剂；1.4. 用显微方法确定药材中有效成份在组织中的分布状况及其特征。2. 显微标本片的分类2.1. 临时性制片 操作简单，制作方便，主要用于药材检验。2.1.1. 切制片 采用滑走切片或徒手切片法制片。适用于植物根、茎类药材的鉴别。2.1.2. 表面片 采用剪、撕等方法制片。适用于叶类、花类及全草类药材的叶片、花冠、萼片、苞片等的鉴别。2.1.3. 解离组织片 用适当的组织解离液使组织细胞相互适度解离后装片，适用于观察比较坚硬的细胞组织，如导管、纤维、石细胞等的形态。2.1.4. 磨制片 适用于矿物药或有些坚硬的动物类药材如珍珠、石决明及动物骨
3、骼的鉴别。2.1.5. 粉末片 适用于花粉粒、孢子等的形态特征或构造观察。2.2. 石蜡片 亦称永久片 制成的石蜡切片外形较完整，厚薄均匀，且可制得连续切片，观察方便，能长期保存。适用于药材鉴定研究工作。以上各临时装片均可按规定和制备方法制成永久性的石蜡切片。标准操作规程标 题 中药材及其制剂显微鉴定法颁发部门质量管理部编号SOPQC05801页次：2/103. 仪器和用具3.1. 仪器 生物光学显微镜、镜台测微尺、离心机。3.2. 用具 3.2.1. 放大镜、刀片、解剖刀、镊子、剪、解剖针。3.2.2. 载玻片、盖玻片。3.2.3. 吸湿器、培养皿或小烧杯、酒精灯、铁三角架、石棉网、滴瓶、试
4、管、试管架、滴管、玻璃棒、乳钵、量筒等。3.2.4. 毛笔、铅笔、带盖搪瓷盘、纱布、吸水纸、火柴等。4. 试液及配制4.1. 水合氯醛试液 取水合氯醛50g，加水15ml与甘油10ml使溶解，即得。此液为透化剂，可使干缩的细胞壁膨胀而透明，并能溶解淀粉粒、树脂、蛋白质及挥发油。4.2. 甘油醋酸试液（斯氏液） 取甘油、50%醋酸与水各等份，混合即得。此液专用于观察淀粉粒形态，可使淀粉粒不膨胀变形，便于测量其大小。4.3. 甘油乙醇液 取甘油1份，50乙醇1份，混合即得。此液为封藏液，用于保存植物配料及临时切片，有软化组织的作用。4.4. 苏丹试液 取苏丹 0.01g，加90乙醇5ml溶解后，加
5、甘油5ml摇匀即得。本液应置棕色玻璃瓶内保存，在2个月内应用。4.5. 钌红试液 取10醋酸钠溶液12ml，加钌红适量使呈酒红色即得，本液应临用时新配。4.6. 间苯三酚试液 取间苯三酚1g，加90乙醇100ml，使溶解，滤过即得。应置棕色玻璃瓶内，在暗处保存。此液与浓盐酸合用，可使木化细胞染成红色或紫红色。4.7. 碘试液 取碘化钾0.5g，溶于少量水中，加碘1g，使溶解加水至100ml即得。4.8. 硝酸铬试液 取硝酸铬10ml，加入100ml水中，混匀。另取铬酸10g，加水100ml使溶解。用时二液等份混合，即得。此液为常用的“植物组织解离液”。检品的解离浸泡时间，依材料的质地不同而异。
6、4.9. 萘酚试液 取15的萘酚乙醇溶液10.5ml，缓缓加入硫酸6.5ml，混匀后再加乙醇40.5ml及水4ml，混匀即得。标准操作规程标 题 中药材及其制剂显微鉴定法颁发部门质量管理部编号SOPQC05801页次：3/104.10. 硝酸汞试液（米隆氏试液）取汞4.5g，加发烟硝酸3ml，待作用完毕，加等量水稀释即得。本液应置棕色玻璃塞瓶内，在暗处保存 。用于检查糊粉粒，染成砖红色。4.11. 氯化锌碘试液 取碘化钾8g，加入8.5ml水使溶解，再加无水氯化锌2.5g使溶解，加碘适量至饱和，即得。本液应置棕色玻璃瓶塞内。用于检查木质化与纤维素细胞壁，前者显黄棕色，后者显蓝色或紫色。5. 显
7、微标本片的制做5.1. 切片（横片或纵片）5.1.1. 药材的预处理 先将药材表面泥沙刷洗干净，将应观察的部位，切成大小适当的块或段，一般以宽1cm，长3cm为宜， 厚1020m，切面削平整。质地软硬适中的药材可直接进行切片。质地坚硬的则须先使其软化后再切片。软化方法可放在吸湿器（即干燥器底部盛蒸馏水并滴数滴苯酚防霉，上部瓷板上置药材样品吸湿）中闷润，或在水中浸软。有些根、根茎、茎及木类药材，质地虽坚实，可将削平的切面浸水中片刻 ，表面润湿时取出，直接切片也能切成较完整的薄片。过于柔软的材料，可将其浸入7095乙醇中，约20min后可变硬些，即可进行切片。对于细小、柔软而薄的药材，如种子或叶片
8、，不能直接手持切片，种子类可置软木中塞或橡胶片中（一侧切一窄缝，将种子嵌入其中），叶类药材可用质地松软的通草或向日葵的茎髓作夹持物进行切片。药材在预处理时应注意不能影响要观察的显微鉴别特征。5.1.2. 徒手切片 具有操作简便、迅速，方便，制成片能保持其内含物的固有特征，便于进行各种显微化学反应观察的特点，是显微鉴别中最为常用的方法。5.1.2.1. 切片 右手持刀片，左手拇指和食指关节夹持药材，中指托着药材的底部，使药材略高出食拇二指，肘关节应固定，使材料的切面保持水平，刀口向内并使刀刃自左前方向右后方切削，即可切得薄片。操作时，材料的切面须经常加水或50乙醇保持湿润，防止切片粘在刀片上。切
9、好的切片用毛笔蘸水轻轻从刀片上推入盛有水或50乙醇的培养皿中。5.1.2.2. 徒手圆筒生物切片器切片 将药材用通草或软木夹持，固定于切片器持物筒中；具有一定硬度的药材可直接固定于持物筒中；左手持切片器，拇指与小拇指持底盘的边缘，食指端顶动中柱上的固定螺帽，使切片整体方向不变，以保持材料的切片方向固定；右手持刀片，刀柄靠于拇指与食指部，标准操作规程标 题 中药材及其制剂显微鉴定法颁发部门质量管理部编号SOPQC05801页次：4/10食指与中指轻压于刀片的上面，刀片平贴于刀片器圆台上，由左上方至右下方迅速滑动，切下的切片用毛笔沾水取下置盛水的培养皿中。5.1.2.3. 装片 选取薄而平整的切片
10、置载玻片上，根据所要观察的内容要求，滴加适宜的试液12滴，盖好盖玻片，即可在显微镜下观察。如加水合氯醛试液透化，将切片移载玻片上滴加12滴水合氯醛试液，在酒精灯上微微加热，至边缘起小泡即停止加热，继续补充试液再加热，以不烧干为度，直至透化完全为止；加热温度不能过高，以防水合氯醛试液沸腾，使组织内带入气泡，加热时应将载玻片不断移动，不宜对准一处烧，以免受热不匀而炸裂，透化后放冷，加甘油乙醇试液12滴后加封盖片，贴上标签，冬日室温较低时，透化后不待放冷即加甘油乙醇试液，以防水合氯醛试液结晶析出而防碍观察。水合氯醛试液有洁净作用，并能使已收缩的细胞膨胀，能清楚观察组织构造，可溶解淀粉粒、蛋白质、叶绿
11、素、挥发油、树脂等，对草酸钙结晶无作用，为观察草酸钙结晶的良好试剂。如需观察菊糖等一些多糖物质则加水合氯醛试液不加热。5.1.3. 滑走切片机切片 此法不需要较高的技巧，只要了解掌握操作方法，短期内即可学会并切出较薄的切片，适用于质地坚实、形状较大的药材切片。柔软的材料经冷冻处理后便可切得较薄的的切片。5.1.3.1. 材料制备 经软化处理的材料，检查软化是否合适，可用刀片切割材料，若较容易切下薄片，则软化适宜。柔软的药材可直接用胡萝卜或土豆作夹持物。新鲜材料则直接浸入石蜡中，使材料外面包上一层石蜡。5.1.3.2. 切片机调试及材料安装 切片前，先安装好要片机使稳固，进行调试检查。将切片刀夹
12、持在夹刀器上夹紧，调整刀的角度（约00150）；调整厚度调节器至所需厚度。把制备好的材料用两块软木塞夹住或直接放在切片机的材料固定器上夹正，使材料露出软木塞或固定器上端约0.5cm，调整好材料高度，使刀机刀刃靠近材料的切面，使材料切面与刀刃平等并略高于刀刃约0.51mm。5.1.3.3. 切片 用右手所握夹刀器柄。往操作者方向迅速拉动，便切下切片，且附着于刀的表面上，用毛笔蘸水把切片取下放入盛水的培养皿中。将刀推回原处，转动厚度推进器，用毛笔蘸水润湿材料切面及刀刃，再拉切片刀，往返推动，可得到许多厚度均匀完整的切片。若切片不成功，应检查切片刀是否太钝，则应磨刀或换锋锐的切片刀，若切得太薄而破碎
13、，则逐渐增标准操作规程标 题 中药材及其制剂显微鉴定法颁发部门质量管理部编号SOPQC05801页次：5/10加厚度至切得完整的薄片为度。注意：夹持在材料固定器上的材料切面接近于固定上端时，必须注意防止切片刀刃碰撞固定器而损毁切片刀。5.1.3.4. 装片 为防止切片弯曲，可选取理想的切片，用两张载玻片夹住 ，浸于水中4小时使材料压平，放入95乙醇中固定，甘油装片观察。5.2. 粉末标本片的制做 主要用于粉末状的药材及药材粉末制成的成方制剂观察。5.2.1. 粉末制备 药材要先干燥，磨或挫成细粉，装瓶，贴上标签。粉末制备时，注意取样的代表性和全面性，如根要切取根头、根中及根尾等部位，必须全部磨
14、成粉，不得丢弃渣头。并需过4号筛，混合均匀。干燥时，一般不能超过60，避免经受高温，使淀粉粒糊化，难以观察其完整者。5.2.2. 制片法 用解剖针挑取粉末少许，置载玻片的中央位置，加适宜的试液1滴，用针搅匀（如为酸或碱时应用细玻璃棒代替针），待液体渗入粉末时，用左手食指与拇夹持盖片的边缘，使其与左侧药液层接触，再用右手持小镊子或解剖刀托住盖玻片的右侧，轻轻下放，则液体逐渐扩延充满盖玻片下方，如液体未充满盖玻片，应从空隙相对边缘滴加液体，以防产生气泡；若液体过多，用滤纸吸去溢出的液体，最后在载玻片的左端贴上标签或做上标记。5.2.3. 中药成方制剂的鉴别5.2.3.1. 散剂、胶囊剂，可直接取粉
15、末装片或透化装片；5.2.3.2. 片剂 ，可取23片研细后，取粉末适量装片或透化装片；5. 2.3.3. 水丸剂，可取数粒丸置乳钵中（若系包衣水丸，可刮去包衣）研细，取粉末适量装片，或取粉末适量置小容器内，加水合氯醛试液透化（加适量甘油以防水合氯醛结晶析出），搅匀，用吸管吸取混悬液装片。5.2.3.4. 蜜丸剂 样品可用二种方法处理（1） 用解剖刀沿蜜丸正中切开，从切面由外至内刮取少许样品，置载玻璃片中央偏右，滴加适宜的试液，用玻璃棒搅匀。按上述粉末制片法制片，或透化装片。（2） 将样品切碎放入容器，加水搅拌洗涤，然后置离心管中离心沉淀，如此反复以除尽蜂蜜后，取沉淀或透化后装片。5.2.3.5. 含挥发油性成分的制剂，取其粉末进行微量升华装片。标准操作规程标 题 中药材及其制剂显微鉴定法颁发部门质量管理部编号SOPQC05801页次：6/105. 2.4. 粉末制片的注意事项5.2.4.1. 粉末加液体搅拌及加盖处理时容易产生气泡。如用水或甘油装片时
