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1、增殖细胞核抗原和p53在肺癌组织中的表达及临床 意义作者：姜涛刘玉林李晨程庆书刘馄【关键词】肺肿瘤,关键词：增殖细胞核抗原;基因，P53;肺肿瘤摘要:目的研究增殖细胞核抗原(PCNA)和p53在肺癌组织中 的表达及其临床意义.方法应用免疫组织化学SABC法检测肺癌患 者肿瘤组织中PCNA和p53的表达，并探讨其与肿瘤发生及恶性行 为之间的关系.结果 肺癌组织中P53蛋白阳性表达率为70%,较正 常组有显著差异(P<0.01), p53蛋白阳性表达率在淋巴结转移 者显著高于无淋巴结转移者(P<0.01),在不同组织学分级和病理 分期的肺癌组织间p53的表达无差异性肺癌组织PCNA标记
2、指数随 组织学分级和病理分期的增高而增高(P<0.01),有淋巴结转移者 较无淋巴结转移者显著增高(P<0.01) .p53阳性表达者PCNA标记指数显著高于p53表达阴性者(P<0.01).结论p53蛋白 表达与肺癌的发生和淋巴结转移密切相关；PCNA与肺癌的生长及恶 性行为有关.Keywords:proliferating cell nuclear antigen;genes ,p53;lung neoplasmsAbstract:AIM To study the expressions and clinical signifi-cance of proliferatin
3、g cell nuclear antigen (PCNA) and p53in lung cancer tissue.METHODS Immunohistochemical strep-tavidin biotin peroxidase complex (SABC) method was used to detect PCNA and p53expressions in lung cancer tissue.RESULTS Positive rate (70%) of p53protein expression in lung cancer tissue was significantly h
4、igher than that in normal lung tissue (P<0.01) .Positive rate of p53expression in the patients with lymph node metastasis was significantly higher than that in patients without metastasis (P<0.01) .There was a positive correlation between PCNA labeling index (PC-NA-LI) and tumor histologic gra
5、de and pathological phase of lung cancer (P<0.01) .PCNA-LI of patients with lymph node metastasis was significantly higher than that of patients without metastasis (P<0.01) .PCNA-LI in p53positive lung cancer tissue was higher than that in p53negative tissue (P<0.01) .CONCLUSION Expression
6、of p53protein is significantly correlated with the carcinogenesis and lymph node metastasis of lung cancer.The expression of PCNA is related to the growth and malignant behavior of lung cancer.。引言近年来，肺癌的发病率和死亡率呈上升趋势，严重地威胁着人类的健康和生命.寻找肿瘤的早期诊断指标和正确估计其预后具有重 要的临床意义.p53是一种重要的肿瘤抑制基因，野生型p53蛋白具 有调节细胞增殖和凋亡的双重
7、作用.p53基因突变则产生突变型p53 蛋白，与肿瘤的发生和预后密切相关，目前研究中所检测的P53蛋 白均为突变型p53.增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen, PCNA）是真核细胞DNA聚合酶的辅助蛋白，在DNA复制中起重要作用，可作为细胞增殖状态的指标.有研究表明，P53蛋 白和PCNA阳性表达与乳腺癌1、肝胰管壶腹肿瘤2的生 长、转移和预后密切相关.我们采用免疫组织化学技术检测PCNA和 P53蛋白在肺癌组织中的表达，探讨其与肺癌发生、组织学分型、病 理分期和淋巴结转移的关系，可为肺癌的早期诊断、预后评价及基因 治疗提供理论依据.1材料和方
8、法1.1材料2001-6/2001-1。我院肺癌住院患者5。（男41, 女9）例，年龄42-72岁，均经手术切除后病理证实为非小细胞肺 癌，手术前均未做过化疗或放疗.按UICC （1997年）分期标准，I A 期3例，IB期5例，HA期11例，HB期15例，IHA期13例, HIB期3例，淋巴结转移43例，对照组为随肿瘤切除的正常肺组织 10例.PCNA、抗p53抗体和免疫组织化学SABC试剂盒购于武汉 博士德生物工程有限公司.1.2方法1.2.1免疫组织化学染色石蜡切片经二甲苯及梯度乙醇脱蜡 至水，30mLL-l H2 02溶液30min以阻断内源性过氧 化物酶活性.正常山羊血清封闭30mi
9、n.依次加1 : 100PCNA和抗 P53抗体、生物素化山羊抗兔IgG及链酶亲和素-生物素-过氧化物酶 复合物（SABC） 37C30min, DAB显色，苏木精轻度复染，脱水 透明后以中性树胶封片.1.2.2结果判定PCNA和p53阳性染色者为细胞核着色，核 呈棕色或棕褐色颗粒状着色均为阳性.选择PCNA标记良好的区域在 400倍显微镜下任选5个高倍视野，计数100200个肿瘤细 胞.PCNA标记指数（PCNA-LI）=阳性细胞数/计数肿瘤细胞总数 X100%.1.2.3统计学方法PCNA标记指数以x s表示，相互比较 用t检验;p53蛋白表达用阳性百分率，相互之间的比较用x2检验.2结果
10、2.1 p53阳性表达结果p53阳性染色者细胞核呈棕色或棕褐 色颗粒(Figi) .1。例正常肺组织中p53蛋白表达为阴性，5。例肺 癌组织中有35例p53蛋白呈阳性，其阳性表达率为70%,较正常 组有显著差异(P<0.01) .p53蛋白阳性表达率在淋巴结转移者显 著高于无淋巴结转移者(P<0.01),但在不同组织学分级和病理分 期的肺癌组织间表达无差异性(Tabl) . 2.2 PCNA阳性表达结果 PCNA阳性染色者细胞核呈棕色或棕褐色颗粒(Fig2).1。例正常肺 组织中只有3例呈PCNA弱阳性表达，而在50例肺癌组织中PCNA 全部为阳性表达.肺癌组织PCNA标记指数随组
11、织学分级和病理分期 的增高而增高(P<0.01),有淋巴结转移者较无淋巴结转移者显著 增高(P<0.01, Tabl) .p53阳性表达者其PCNA标记指数为 (5514)%,显著高于p53阴性者的PCNA标记指数(278) % (P<0.01)图1 一图2略表1 p53阳性表达和PCNA标记指数与肺癌病理特征间的关系 略3讨论肿瘤的生物学行为与癌细胞的增殖活性密切相关，近年来PCNA作为原位检测肿瘤细胞增殖状态的新探针开始用于肿瘤的动 力学研究-PCNA是一种Mr 36000的蛋白，为DNA聚合酶6的辅 助因子，直接参与细胞增殖过程中DNA的复制.它主要存在于细胞周 期的G
12、1晚期和S期细胞的核内，是在细胞周期S期广泛表达的一 种核蛋白，其量的变化与DNA合成相一致，其含量和表达反映了细 胞的增殖活性，因此PCNA表达阳性说明该细胞进入S期或G1晚 期，正处于增殖状态，可作为细胞增殖状态的指标.一般认为高表达 者肿瘤恶性度高、预后差.近年一些学者发现PCNA表达与某些恶性 肿瘤如卵巢上皮性恶性肿瘤3、脑胶质瘤4等有密切关系.p53 基因是一种抑癌基因，野生型P53基因具有负性调节细胞生长的作 用5 , p53基因的突变和/或丢失将导致肿瘤的发生.其产物p53 蛋白对肿瘤的发生起抑制作用，而P53基因突变后的产物突变型 P53则失去抑癌功能，反而具有促进恶性转化的活
13、性6 .野生型 P53蛋白半衰期短，含量低，用免疫组化技术常不能检出，而突变型 p53蛋白半衰期长，能稳定在较高水平上，故可用免疫组化方法检测 突变型P53蛋白.本研究结果显示PCNA表达与肺癌的病理分期、组 织学分型和淋巴结转移有关,PCNA表达越高,肿瘤组织学分级越高, 淋巴结转移发生可能性越大，提示癌细胞增殖能力与转移之间的关系 是一致的，进一步说明了细胞增殖是肿瘤组织的重要特性.p53蛋白 阳性率与病理分期和组织学分型无关，但与肺癌发生和淋巴结转移明 显相关.有淋巴结转移患者P53蛋白的阳性率显著高于无淋巴结转移 患者，表明突变型P53对肺癌转移起重要作用.本研究结果还提示， 肺癌组织
14、中突变型p53和PCNA之间可能有协同作用，p53阳性表 达者其PCNA标记指数显著高于p53阴性者，故两者同时表达的肿 瘤组织，肿瘤细胞生长速度较快，且易发生淋巴结转移，是预后良的 标记.临床上对肺癌患者同时检测P53蛋白和PCNA更能反映肺癌 的性质和预后，可为判断肿瘤的性质和预后提供较可靠的依据.目前关于肺癌组织中P53蛋白、PCNA或其他肿瘤标志物的研究 得出的结论存在较大差异，这与肿瘤组织本身的差异性和实验中取 材、操作等诸多因素有关，尚需进行更深入及更大样本的研究以达到 一致的结论，以早日应用于临床，指导临床诊断和治疗.参考文献：1 Takashima T, Onoda N, Is
15、hikawa T, Ogawa Y, Kato Y, Fuji-moto Y, Sowa M , Hirakawa YS , Chung K.Prolifetating cell nuclear antigen labeling index and p53expression predict out-come for breast cancer patients with four or more lymph node metastases J .Int J Mol Med, 2001;8 (2) :159-163.2 Ajiki T, Kamigaki T, Hasegawa Y, Fuji
16、no Y, Suzuki Y, Takeyyama Y, Ku Y, Kuroda Y.Proliferating cell nuclear anti-gen , p53 , and c-erbB-2expression in relation to clinicopatho-logical variables and prognosis in cancer of the ampulla of Vater J .Hepatogastroenterology , 2001;48 (41) :1266-1270.3 Wang J, Xin XY, Wang DT, Liu SJ, Yan RL, Zheng WG.Proliferating cell nuclear antigen (PCNA) in common epithelial ovarian tumors and its rel
