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1、(10)申请公布号 CN 103554199 A(43)申请公布日 2014.02.05CN103554199A(21)申请号 201310565734.X(22)申请日 2013.11.14C07H 15/203(2006.01)C12P 19/44(2006.01)C12R 1/72(2006.01)C12R 1/38(2006.01)C12R 1/845(2006.01)C12R 1/645(2006.01)(71)申请人广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所地址 510610 广东省广州市天河区东莞庄一横路133号(72)发明人杨荣玲 刘学铭 陈智毅 林耀盛杨春英 王思远 唐秋实(54
2、) 发明名称一种豆腐果苷酯衍生物制备方法(57) 摘要本发明公开了豆腐果苷酯衍生物及其合成方法。该方法是在非水介质中加入豆腐果苷和酰基供体，豆腐果苷的浓度为1.0-40mgmL，酰基供体与豆腐果苷的摩尔比为1-20：1，按豆腐果苷与酶制剂的质量比为0.1-10：1加入脂肪酶，在温度为30-60、振荡速度为100-300rpm和常压条件下，转酯化反应0.572小时，制得豆腐果苷的酯类化合物。本发明合成了多种结构新颖、具有潜在药用价值的豆腐果苷酯衍生物。其酶法酰化具有反应条件温和、环境友好、区域选择性高、反应过程简单可控和产物易分离的优点。(51)Int.Cl.权利要求书1页 说明书5页(19)中
3、华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页 说明书5页(10)申请公布号 CN 103554199 ACN 103554199 A1/1页21.豆腐果苷酯衍生物，其特征在于：其结构如通式(I)所示：其中：R代表2-18个碳原子的直链或支链的饱和烷酰基或不饱和烷酰基，9-11个碳原子的反式或顺式不饱和芳香酰基。2.一种如权利要求1所述的豆腐果苷酯类衍生物的制备方法，其特征在于：在有机溶剂或含离子液介质中，加入豆腐果苷和酰基供体，豆腐果苷的浓度为1.0-40mgmL，酰基供体与豆腐果苷的摩尔比为1-20：1，按糖苷与酶制剂的质量比为0.1-10：1加入酶，在温度为30-60、振荡
4、速度为100-300rpm和常压条件下，转酯化反应0.572小时，分离纯化制得豆腐果苷的酯类衍生物。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于酰基供体为羧酸乙烯酯、酸酐、羧酸甲酯或羧酸乙酯。4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所用的酶制剂为来源于南极假丝酵母(Candida antarctica B)、嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)、根霉(Rhizomucor miehei)、洋葱假单胞菌(Pseudomonas cepacia)、皱落假丝酵母(Candida rugosa)、米赫毛霉(Mucor miehei)中的一种或由其中两种组成的组合生物催化剂。5.根据
5、权利要求4所述的方法，其特征在于所用的组合生物催化剂中两种固定化酶的重量比为1：1-1：10。6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述的有机溶剂为四氢呋喃、丙酮、乙腈、二噁烷、叔丁醇、二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺、吡啶；含离子液介质为离子液与上述其中一种有机溶剂的混合溶剂，离子液含量为5-95(vv)。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于所用离子液的阴离子为四氟硼酸根离子、六氟磷酸根离子、二(三氟甲基磺酰)亚胺离子或氨基酸离子；阳离子为1-烷基-3-甲基咪唑离子、1-烷基-2,3-二甲基咪唑离子、季铵离子、季磷离子、氨基酸离子或N-烷基吡啶离子。8.根据权利要求2所述的豆腐果苷酯
6、衍生物的合成方法，其特征在于：所述分离纯化方法为反应结束后，过滤除酶、真空浓缩，再用甲醇、乙醇或者乙酸乙酯结晶，或者经过硅胶柱层析得到目标产物。权 利 要 求 书CN 103554199 A1/5页3一种豆腐果苷酯衍生物制备方法 技术领域0001 本发明属于酶化工领域，涉及豆腐果苷酯衍生物及其酶催化制备方法。 背景技术0002 药物的化学结构修饰是基于保持药物原有的基本骨架结构，仅对其中某些官能团进行化学修饰。通过修饰改变或改善原有的理化性质，是新药研究上极其重要的手段。在药物研究和应用的过程中，常会出现一些影响药效和药物应用的因素。如药代动力学性质不理想而影响药物的吸收，导致生物利用度较低，
7、或由于化学结构的特点所致代谢速度过快或过慢等情况；也会由于药物作用的特异性不强，选择性不高，产生毒副作用；还有一些其他原因，如化学稳定性差、溶解性能差、有不良的气味或味道、对机体产生刺激性或疼痛等。这就需要对药物的化学结构进行修饰，以克服上述缺点，增强疗效。 0003 从自然界中寻找活性先导化合物，再进行结构修饰，以提高其生物利用度是创新药物的一条重要思路。如作为新一代新型恶性痢疾新药蒿甲醚则是将天然产物中提取得到的青蒿素醚化后的衍生物。豆腐果苷(Helicid)，即4-甲酰苯基-D-吡喃阿洛糖苷，最初是由山龙眼科三龙眼属(Helicia Lour.)植物的果实中分离得到的一种糖苷类化合物，具
8、有镇静安眠、镇痛、抗炎等药理活性，但在应用中存在脂溶性较差、起效慢、生物利用度低等问题，限制了该药的应用范围。药理活性研究表明，豆腐果苷的酯衍生物具有比亲代化合物更高的抗酪氨酸酶和乙酰胆碱酯酶活性。 0004 由于豆腐果苷糖环上羟基众多，且反应活性相似。采用一般化学方法直接酯化时，区域选择性低，易产生大量的副产物，产物分离困难；为合成确定位置酰化的产物，需要对糖环特定羟基进行保护和去保护等操作，反应步骤多、工艺复杂；同时该方法采用碱性催化剂，易产生含碱废液，对环境造成严重污染。而酶法合成避免了繁琐的保护和去保护等复杂的反应步骤，反应条件温和、对环境友好，所得产物纯度高。因此，酶催化糖苷区域选择
9、性酰化是一条具有广阔前景的替代途径。 发明内容0005 本发明的目的在于克服母药豆腐果苷在临床上应用的不足，提供一类豆腐 果苷酯衍生物。 0006 本发明的另一目的在于针对现有技术存在的问题，提出酶催化合成上述化合物的方法。 0007 本发明以羧酸乙烯酯、酸酐、羧酸甲酯或羧酸乙酯为酰基供体，利用酶催化豆腐果苷进行酰化反应，合成豆腐果苷的单酯化合物。该方法区域选择性高，产率高、产物纯度高，工艺简单可控。 0008 本发明的目的通过如下技术方案实现： 0009 一种酶催化合成豆腐果苷酯类化合物的方法：在非水介质中，加入豆腐果苷和酰基供体，豆腐果苷的浓度为1.0-40mgmL，酰基供体与糖苷的摩尔比
10、为1：1-20：1，按豆腐说 明 书CN 103554199 A2/5页4果苷与酶制剂的质量比为0.1-10：1加入酶，在温度为30-60、振荡速度为100-300rpm和常压条件下，转酯化反应0.572小时，制得豆腐果苷的酯类化合物。 0010 所述酰基供体为羧酸乙烯酯、酸酐、羧酸甲酯或羧酸乙酯； 0011 所用的酶制剂为来源于南极假丝酵母(Candida antarctica B)、嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)、根霉(Rhizomucor miehei)、洋葱假单胞菌(Pseudomonas cepacia)、皱落假丝酵母(Candida rugosa)、米
11、赫毛霉(Mucor miehei)中的一种或由其中两种组成的组合生物催化剂； 0012 所述的非质子有机溶剂优选为四氢呋喃、丙酮、乙腈、二噁烷、叔丁醇、二甲基亚砜、N，N-二甲基甲酰胺、吡啶、异丙醚、异辛烷、正己烷、正庚烷、正辛烷、正壬烷或环己烷。 0013 所述的含低亲核性阴离子的离子液中的阴离子优选为四氟硼酸根离子、六氟磷酸根离子、二(三氟甲基磺酰)亚胺离子或氨基酸离子；阳离子优选为1-烷基-3-甲基咪唑离子、1-烷基-2,3-二甲基咪唑离子、季铵离子、季磷离子、氨基酸离子或N-烷基吡啶离子。 0014 所述的非水介质为非质子有机溶剂中的两种，两种非质子有机溶剂体积比为1-19：1。 00
12、15 所述的非水介质为非质子有机溶剂中的一种和含低亲核性阴离子的离子液中的一种；其中离子液在混合体系中体积含量为5-95。 0016 所述分离纯化方法为反应结束后，过滤除酶、真空浓缩，再用甲醇、乙醇或者乙酸乙酯结晶，或者经过硅胶柱层析得到目标产物。 0017 本发明与现有的技术相比具有如下的优点： 0018 1)采用高效的生物催化剂酶催化豆腐果苷酯衍生物合成。酶促反应具有高度选择性，并且可以通过选择不同的酶或组合生物催化剂合成豆腐果苷酯衍生物，因此克服了传统化学方法选择性低、易生成副产物、需要保护和脱保护操作及产率低等缺点； 0019 2)本发明无需基团保护和脱保护操作，反应过程简单易控，产物
13、易分离； 0020 3)本发明在温度为30-60、振荡速度为100-300rpm、常压条件下，利用酶催化制备豆腐果苷酯衍生物，反应条件温和、环境友好。 具体实施方式0021 为更好理解本发明，下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，但是本发明要求保护的范围并不局限于实施例的范围。 0022 实施例1：豆腐果苷6-乙酸酯的合成 0023 将豆腐果苷(57mg，0.2mmol)、乙酸乙烯酯(1.5mmol)、20mL无水四氢呋喃加入50mL具塞三角瓶中混匀后，于其中加入200mg南极假丝酵母(Candida antarctica B)常压下于35、300rpm的恒温振荡器内振荡，利用薄层层析法(
14、TLC)监控反应。反应4h后，过滤、真空浓缩滤液、柱层析(石油醚(PE)7酸乙酯(EA)=14，Rf=0.25)纯化，得白色粉末产物50mg，收率为76，纯度大于99。结构通过13C NMR(100.5MHz)和1H NMR(400MHz)确认。 0024 核磁数据如下：1H NMR：ppm2.01(s，3，H2)，3.46-3.55(m，2，H2+H3)，4.01(apparent dd，2，J=16.3，5.6Hz，H4+H5)，4.10(dd，1，J=11.7，6.6Hz，H6)，4.27-4.31(m，1，H6)，4.98(d，1，J=7.4Hz，H1)，5.15(d，1，J=3.7H
15、z，OH4)，5.28(dd，说 明 书CN 103554199 A3/5页52，J7.9Hz，OH2+OH3)，7.19(d，2，J8.7Hz，H2+H6)，7.89(d，2，J=8.7Hz，H3+H5)，9.90(s，1，OH7).13C NMR：ppm20.62(C2)，63.59(C6)，67.13(C4)，69.97(C2)，71.28(C3)，71.44(C5)，97.85(C1)，116.29(C2+C6)，130.52(C4)，131.59(C3+C5)，162.06(C1)，170.24(C1)，191.42(C7). 0025 实施例2：豆腐果苷6-丁酸酯的合成 0026
16、将豆腐果苷(57mg，0.2mmol)、乙酸乙烯酯(2mmol)、20mL正己烷四氢呋喃(14，vv)加入50mL具塞三角瓶中混匀后，于其中加入400mg来源于嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)的固定化脂肪酶，常压下于40、200rpm 的恒温振荡器内振荡，利用薄层层析法(TLC)监控反应。反应2h后，过滤、真空浓缩滤液、柱层析(石油醚(PE)乙酸乙酯(EA)=14，Rf=0.25)纯化，得白色粉末产物55mg，收率为78，纯度大于99。结构通过13C NMR(100.5MHz)和1HNMR(400MHz)确认。核磁数据如下：1HNMR：ppm0.85(t，3，J=7.5，H4)，1.51(q，2，J=7.3Hz，H3)，2.27(td，2，J=7.2，1.4Hz，H2)，
