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1、植物基因组DNA的提取,背景知识,植物细胞中有哪些细胞器中含有DNA？ 与动物细胞的差别？,背景知识,DNA的存在形式,背景知识,DNA的存在形式,背景知识,DNA的存在形式,核苷酸,双螺旋结构,一级结构-核小体,二级机构-螺线管,三级结构-超螺旋管,四级机构-染色体,+组蛋白,背景知识,DNA的存在形式,DNA为白色类似石棉样的纤维状物，大都呈酸味。 DNA一般都溶于水，不溶于醇类、氯仿等有机溶剂，在高盐溶液中的溶解度最大。 在酸性溶液中易水解，中性或弱碱性溶液中较稳定。,DNA的理化性质,实验目的,掌握CTAB法提取植物DNA的原理 掌握CTAB法提取植物DNA的实验方法注意：此方法会把少
2、量RNA提取出来，故后面通称核酸的提取。,实验原理,核酸-蛋白质复合体,CTAB-核酸复合体,+CTAB,蛋白质变性剂,蛋白质变性除去,+高盐溶液,溶解,+沉淀剂,沉淀核酸,新鲜菠菜叶片 十六烷基三甲基溴化铵(CTAB) 、三羟甲基氨基甲烷(Tris)、乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)、氯化钠、Tris饱和酚、异丙醇、-巯基乙醇、无水乙醇、氯仿、异戊醇、液氮、聚乙烯吡咯烷酮(PVP-40),实验材料,实 验 仪 器,离心机：3台/12管 水浴锅：65 研钵：10个 移液枪（包括枪头）,实验试剂,2%CTAB抽提液：250ml,CTAB 4g,无水乙醇 5ml,蒸馏水 100ml,200ml
3、烧杯,5 mol/l NaCl 56ml,1 mol/l Tris-HCl(PH8.0)20ml,0.5mol/l EDTA 8ml,定容至250ml,高压灭菌冷却后 121 20min,1% -巯基乙醇 2ml,PVP-40 5g,4 保存,实验试剂,氯仿:异戊醇=24:1 100ml,氯仿 96ml,异丙醇 4ml,4 保存,TE 缓冲液（保存 DNA） PH8.0 50ml,10mmol Tris-HCl(PH8.0) 0.5ml,0.5mol/l EDTA(PH8.0) 0.1ml,定容至50ml 调PH8.0,高压灭菌冷却后 121 20min,4 保存,酚:氯仿:异戊醇=25:24
4、:1 40ml 取20ml前面配制的氯仿-异戊醇+20mlTris饱和酚,2.破碎细胞，释放溶解核酸,快速研磨成粉末,轻摇匀,取出冷却2分钟,液氮,1ml 65 CTAB抽提液,1g 菠菜叶片,65 水浴锅 40分钟 每10分钟轻摇,10ml 离 心 管,预冷的 研钵,实验步骤,1.准备工作,蒸馏水洗净，晾干，剪小备用,CTAB抽提液,65 水浴锅 预热,3.抽提去除蛋白质,2.,1ml酚-氯仿-异戊醇,振荡 2分钟,12000 r/min 离心10分钟,10ml 离 心 管,分层,上清液 核酸-CTAB,变性蛋白,有机溶剂,10ml 离 心 管,2ml氯仿-异戊醇,颠倒混匀,12000 r/
5、min 离心10分钟,分层,变性蛋白,有机溶剂,上清液 核酸-CTAB,上清液 核酸-CTAB,实验步骤,4.沉淀核酸,上清液 核酸-CTAB,-20 异丙醇2.5ml,10ml 离 心 管,室温 沉淀,10000 r/min 离心10分钟,5. 核酸的洗涤、脱盐,400ul无水乙醇,去上清液,10000 r/min 离心10分钟,6. 核酸的保存,100ulTE缓冲液,5.,-20 保存,实验步骤,慢摇30秒 室温15分钟,在整个实验过程中应严格执行无菌操作； 部分药品有毒，操作中应注意安全防护； 磨样时最好是加液氮，磨样速度要快，使材料处于低温状态 。 刚投入水浴时可以稍快速的晃动，之后的晃动一定要轻柔！ 抽提时不要有太力振动，操作也要仔细，尽量避免DNA断裂。 将DNA加入异丙醇时用的枪头一定要剪过的。这点很重要。过尖的枪头会把DNA链弄断。,注意事项,思考题,本实验中用到的各种试剂的作用是什么？本实验中进行了几次离心操作，每次的目的？,实验安排,按照学号分组进行实验，每6人一组，一组做3管，用一个研钵。每3组共用1台离心机同时进行离心操作。,6人一组,2013级生物技术专业 分子生物学实验报告 姓名： 学号： 实验项目：实验二 植物基因组DNA的提取 1.实验目的 2.实验原理 3.实验试剂 4.实验步骤 5.实验注意事项 6.思考题,实验报告,
