微生物常用培养基配方

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1、1 常用培养基配方2 目录01 糖发酵管02 ONPG 培养基03 西蒙氏柠檬酸盐培养基04 缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR 和 VP 试验用 ) 05 克氏柠檬酸盐培养基06 丙二酸钠培养基07 葡葡糖铵培养基08Hugh Leifson 培养基 (O/F 试验用 ) 09 马尿酸钠培养基10 营养明胶11 苯丙氨酸培养基12 氨基酸脱羧酶试验培养基13 蛋白胨水 (靛基质试验用 ) 14 硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用 ) 15 尿素琼脂16 氰化钾 (KCN) 培养基17 氧化酶试验18 硝酸盐培养基19 细胞色素氧化酶试验20 过氧化氢酶试验21 过氧化物酶试验22 磷酸盐缓冲液23 明胶磷酸盐

2、缓冲液24 乳酸苯酚溶液25 肉浸液肉汤26 肉浸液琼脂27 牛肉 (或牛心 )消化汤28 血消化汤29 豆粉琼脂30 血琼脂31 营养琼脂32 营养肉汤33 乳糖胆盐发酵管34 乳糖发酵管35 EC 肉汤36 缓冲蛋白胨水(BP) 37 氯化镁孔雀绿增菌液(MM) 38 四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB) 39 四硫磺酸钠煌绿增菌液(换用方法 ) 40 亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC) 41 GN 增菌液3 42 肠道菌增菌肉汤43 亚硫酸铋琼脂(BS) 44 DHL 琼脂45 HE 琼脂46 SS 琼脂47 WS 琼脂48 麦康凯琼脂49 伊红美蓝琼脂(EMB) 50 三糖铁琼脂 (TSI)51

3、三糖铁琼脂 (换用方法 ) 52 克氏双糖铁琼脂(KI) 53 克氏双糖铁琼脂(换用方法 ) 54 葡萄糖半固体发酵管55 5%乳糖发酵管56 CAYE 培养基57 Honda 氏产毒肉汤58 Elek 氏培养基 (毒素测定用 ) 59 氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基60 胰蛋白胨水61 Rustigian 氏尿素培养液62 氯化钠结晶紫增菌液63 氯化钠蔗糖琼脂64 嗜盐菌选择性琼脂65 3.5%氯化钠三糖铁琼脂66 氯化钠血琼脂67 3.5%氯化钠生化试验培养基68 改良磷酸盐缓冲液(小肠结肠炎耶尔森氏菌专用) 69 CIN 1 培养基70 嗜盐性试验培养基71 改良 Y 培养基72 改良克

4、氏双糖73 快速硫化氢 (H2S)试验琼脂74 DNA 酶甲基绿琼脂(DTA) 75 CaryBlair 氏运送培养基76 Skirrow 氏培养基77 TTC 琼脂78 甘氨酸培养基79 改良磷酸盐缓冲液80 氯化镁孔雀绿肉汤81 胰酪胨大豆肉汤82 BairdParker 氏培养基83 7.5%氯化钠肉汤84 匹克氏肉汤85 甘露醇卵黄多粘菌素琼脂4 86 3.8%柠檬酸钠溶液87 酪蛋白琼脂88 木糖明胶培养基89 庖肉培养基90 卵黄琼脂培养基91 亚硫酸盐多粘菌素磺胺嘧啶琼脂(SPS) 92 液体硫乙醇酸盐培养基(FT) 93 含铁牛奶培养基94 动力 -硝酸盐培养基（A 法）95

5、动力硝酸盐培养基(B 法) 96 血清肉汤97 马丁氏肉汤98 明胶培养基99 察氏培养基100 高盐察氏培养基101 马铃薯葡萄糖琼脂(PDA) 102 马铃薯琼脂103 孟加拉红培养基104 玉米粉琼脂105 大米粉培养基106 亚硒酸盐煌绿增菌液107 煌绿肉汤增菌液108 肠毒素产毒培养基109 0.1% 蛋白胨水稀释剂110 半固体琼脂5 01 糖发酵管成分：牛肉膏5g 蛋白胨10g 氯化钠3g 磷酸氢二钠 (Na2HPO4 12H2O)2g 0.2%滇麝香草酚蓝溶液12mL 蒸馏水1000mL pH7.4 制法：1 葡萄糖发酵管按上述成分配好后，按 0.5%加入葡萄糖， 分装于有一

6、个倒置小管的小试管内，121高压灭菌15min。2 其他各种糖发酵管可按上述成分配好后，分装每瓶100mL，121高压灭菌15min。另将各种糖类分别配好10%溶液，同时高压灭菌。将5mL 糖溶液加入于100mL 培养基内，以无菌操作分装小试管。注： 蔗糖不纯，加热后会自行水解者，应采用过滤法除菌。试验方法： 从琼脂斜面上挑取小量培养物接种，于36 1培养，一般观察2 3d。迟缓反应需观察 1430d。02 ONPG 培养基成分：邻硝基酚 D-半乳糖昔 (ONPG)60mg (ONitrophenyl Dgalactopyranoside) 0.01mol/L 磷酸钠缓冲液(pH7.5)10m

7、L 1%蛋白胨水 (PH7.5)30mL 制法： 将 ONPG 溶于缓冲液内，加入蛋白胨水，以过滤法除菌，分装于10mm 75mm 试管，每管0.5mL，用橡皮塞塞紧。试验方法： 自琼脂斜面上挑取培养物1 满环接种，于36 1培养 13h 和 24h 观察结果。如果半乳糖苷酶产生，则于13h 变黄色，如无此酶则24h 不变色。03 西蒙氏柠檬酸盐培养基成分：氯化钠5g硫酸镁 (MgSO4 7H2O)0.2g 磷酸二氢铵1g 磷酸氢二钾1g 柠檬酸钠5g 琼脂20g 蒸馏水1000mL 0.2%溴麝香草酚蓝溶液40mL pH6.8 6 制法： 先将盐类溶解于水内，校正pH，再加琼脂，加热溶化。然

8、后加入指示剂，混合均匀后分装试管， 121高压灭菌15min。放成斜面。试验方法： 挑取少量琼脂培养物接种，于36 1培养4d，每天观察结果。阳性者斜面上有菌落生长，培养基从绿色转为蓝色。04 缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR 和 VP 试验用 ) 成分：磷酸氢二钾5g 多胨7g 葡萄糖5g 蒸馏水1000mL pH7.0 制法： 溶化后校正pH，分装试管，每管1mL，121高压灭菌15min。甲基红 (MR) 试验： 自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中，于 36 1培养 25d，哈夫尼亚菌则应在22 25培养。滴加甲基红试剂一滴，立即观察结果。鲜红色为阳性，黄色为阴性。甲基红试剂配法：10mg

9、甲基红溶于30mL95% 乙醇中，然后加入20mL 蒸馏水。V P 试验： 用琼脂培养物接种本培养基中，于36 1培养 24d。哈夫尼亚菌则应在2225培养。 加入 6% 萘酚乙醇溶液0.5mL 和 40%氢氧化钾溶液0.2mL，充分振摇试管， 观察结果。阳性反应立刻或于数分钟内出现红色，如为阴性，应放在36 1下培养4h 再进行观察。05 克氏柠檬酸盐培养基成分：柠檬酸钠3g 葡萄糖0.2g 酵母浸膏0.5g 单盐酸半胱氨酸0.1g 磷酸二氢钾1g 氯化钠5g 0.2%酚红溶液6mL 琼脂15g 蒸馏水1000mL 制法： 加热溶解，分装试管，121高压灭菌15min。放成斜面。试验方法：

10、用琼脂培养物接种整个斜面，在36 1培养7d，每天观察结果。阳性者培养基变为红色。06 丙二酸钠培养基成分：酵母浸膏1g 硫酸铵2g 磷酸氢二钾0.6g 磷酸二氢钾0.4g 氯化钠2g 丙二酸钠3g 0.2%溴麝香草酚蓝溶液12mL 7 蒸馏水1000mL pH6.8 制法：先将酵母浸膏和盐类溶解于水，校正 pH 后再加入指示剂， 分装试管， 121高压灭菌15min。试验方法： 用新鲜的琼脂培养物接种，于36 1培养 48h，观察结果。阳性者由绿色变为蓝色。07 葡葡糖铵培养基成分：氯化钠5g 硫酸镁 (MgSO4 7H2O)0.2g 磷酸二氢铵1g 磷酸氢二钾1g 葡萄糖2g 琼脂20g

11、蒸馏水1000mL 0.2%溴麝香草酚蓝溶液40mL pH6.8 制法： 先将盐类和糖溶解于水内，校正pH，再加琼脂，加热溶化，然后加入指示剂，混合均匀后分装试管， 121高压灭菌15min，放成斜面。试验方法： 用接种针轻轻触及培养物的表面，在盐水管内做成极稀的悬液，肉眼观察不见混浊，以每一接种环内含菌数在20 100 之间为宜。将接种环灭菌后挑取菌液接种，同时再以同法接种普通斜面一支作为对照。于36 1培养 24h。阳性者葡萄糖铵斜面上有正常大小的菌落生长；阴性者不生长， 但在对照培养基上生长良好。如在葡萄糖铵斜面生长极微小的菌落可视为阴性结果。注： 容器使用前应用清洁液浸泡。再用清水、蒸

12、馏水冲洗干净，并用新棉花做成棉塞，干热灭菌后使用。如果操作时不注意，有杂质污染时，易造成假阳性的结果。08 HughLeifson培养基 (O/F 试验用 ) 成分：蛋白胨2g 氯化钠5g 磷酸氢二钾0.3g 琼脂4g 葡萄糖10g 0.2%溴麝香草酚蓝溶液12mL 蒸馏水1000mL pH7.2 制法： 将蛋白胨和盐类加水溶解后，校正pH 至 7.2。加入葡萄糖、琼脂煮沸，溶化琼脂，然后加入指示剂。混匀后，分装试管，121高压灭菌15min，直立凝固备用。试验方法： 从斜面上挑取小量培养物作穿刺接种，同时接种两支培养基，其中一支于接种后滴加溶化的 1%琼脂液于表面，高度约1cm，于 36 1

13、培养。09 马尿酸钠培养基成分：马尿酸钠1g 肉浸液100mL 8 制法： 将马尿酸钠溶解于肉浸液内，分装于小试管内，并于管壁画一横线。以标志管内液面高度，高压灭菌12120min。试剂： 三氯化铁 (FeCl3 6H2O)12g，溶于 2%盐酸溶液100mL 中即成。试验方法： 用纯培养物接种，于 42培养 48h，观察培养液是否到达试管壁上记号处，如不足时，用蒸馏水补足至原量。经离心沉淀，吸取上清液0.8mL ，加入三氯化铁试剂0.2mL，立即混合均匀，经 1015min，观察结果。结果： 出现恒久之沉淀物为阳性。10 营养明胶成分：蛋白胨5g 牛肉膏3g 明胶120g 蒸馏水1000mL

14、 pH6.87.0 制法： 加热溶解、校正至pH7.47.6，分装小管， 121高压灭菌10min，取出后迅速冷却，使其凝固。复查最终pH 应为 6.8 7.0。试验方法： 用琼脂培养物穿刺接种，放在2225培养，每天观察结果，记录液化时间。或放在36 士 1培养，每天取出，放冰箱内30min 后再观察结果。11 苯丙氨酸培养基成分：酵母浸膏3g DI 苯丙氨酸 (或 L苯丙氨酸1g)2g 磷酸氢二钠1g 氯化钠5g 琼脂12g 蒸馏水1000mL 制法： 加热溶解后分装试管，121高压灭菌15min，使成斜面。试验方法： 自琼脂斜面上挑取大量培养物，移种于苯丙氨酸琼脂，在36 1培养 4h

15、或 1824h。滴加 10%三氯化铁溶液23 滴，自斜面培养物上流下，苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈深绿色。12 氨基酸脱羧酶试验培养基成分：蛋白胨5g 酵母浸膏3g 葡萄糖1g 蒸馏水1000mL 1.6%滇甲酚紫乙醇溶液1mL L氨基酸或DL氨基酸0.5 或 1g/100mL pH6.8 制法： 除氨基酸以外的成分加热溶解后，分装每瓶100mL，分别加入各种氨基酸：赖氨酸、精氨酸和鸟氨酸。 L氨基酸按0.5%加入， DL氨基酸按1%加入。再行校正pH 至 6.8。对照培养基不加氨基酸。 分装于灭菌的小试管内，每管 0.5mL ， 上面滴加一层液体石蜡，115高压灭菌10min。9 试验方法： 从琼

16、脂斜面上挑取培养物接种，于36 1培养 1824h，观察结果。氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱，培养基应呈紫色。阴性者无碱性产物，但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色。对照管应为黄色。13 蛋白胨水 (靛基质试验用 ) 成分：蛋白胨 (或胰蛋白胨 )20g 氯化钠5g 蒸馏水1000mL pH7.4 制法： 按上述成分配制，分装小试管，121高压灭菌15min。靛基质试剂柯凡克试剂 ：将 5g 对二甲氨基苯甲醛溶解于75mL 戊醇中。然后缓慢加入浓盐酸25mL。欧波试剂 ：将 1g 对二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95% 乙醇内。然后缓慢加入浓盐酸20mL。试验方法 ：挑取小量培养物接种，在36 1培养 12d，必要时可培养45d。加入柯凡克试剂约 0.5mL ，轻摇试管，阳性者于试剂层呈深红色；或加入欧波试剂约0.5mL ，沿管壁流下，覆盖于培养液表面，阳性者于液面接触处呈玫瑰红色。注： 蛋