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1、霍文莹2015年12月,微生物基础知识培训,目的,无菌定义 微生物污染的相关知识 医疗器械生产过程中微生物污染的来源和预防,药典对无菌保证的定量标准,理想状态：没有任何活的微生物。 药典定义（无菌保证值）：经灭菌后，产品中污染菌存活的概率不大于百万分之一（10-6）。,什么是微生物？,它们是非常小的单细胞或多细胞生物，肉眼无法看到。 它们对营养的要求非常低。 它们是一类繁殖非常快的生物。 它们非常容易发生变异。 它们无处不在。 大多数微生物对人类有益。 有些微生物对人类有害。,微生物的分类：,一、微生物按结构、化学组成及生活习性分类： 原核类:仅有原始核质，无核仁或核膜，细胞器很不完善。如细菌
2、、放线菌、支原体、立克次氏体、衣原体、螺旋体。 真核类:细胞核的分化程度较高，有核膜、核仁和染色体，细胞器完整。如真菌（酵母菌和霉菌）、 原生动物、藻类。 非细胞类:体积微小，能通过除菌过滤器。如病毒和朊病毒等。二、按其致病性可分为: 病原性微生物非病原性微生物,微生物的特点：,个体小,面积大：小于0.1mm。肉眼不可见。 分布广,种类多（10万多种） ：自然界中到处都有，如水、空气、土壤等, 土壤中的数量最多。 代谢强，转化快：发酵乳糖的细菌在1小时内可分解其自重100010000倍的乳糖。 生长旺，繁殖快：微生物有惊人的繁殖速度，大多数微生物几十分钟内就可以繁殖一代。 适应性强，易变异（耐
3、药性产生的原因）。,葡萄球菌,酵母菌（芽痕）,棒状杆菌,大肠杆菌,弧状菌,链球菌,菌落单位：,菌落单位-CFU定义：由单个菌细胞或几个同种菌细胞在培养基上长成肉眼可见的菌落，每个菌落就是1CFU。,微生物的分布,土壤：是微生物生活的最适环境。 水：仅次于土壤的微生物分布、定居的第二场所。 空气：空气中的微生物主要来源于带有微生物菌体及孢子的灰尘，这类微生物大多数是腐生性的，还来源于人和动物，它们大多数是通过呼吸道排出的，其中也包含有病原微生物，悬浮在大气中。,正常人体微生物的分布,微生物的类群和形态结构,一、细菌细菌是一类细胞细而短、结构简单、细胞壁坚韧，以二分裂方式无性繁殖的原核微生物，分布
4、广泛。 细菌的形态与结构 （1） 球菌 多数球菌直径在1微米左右，外观呈球形或近似球形。由于繁殖时分裂平面不同可形成不同的排列方式，分为双球菌、链球菌、葡萄球菌等。（2） 杆菌 形态多数呈直杆状，也有的菌体稍弯，多数呈分散存在，也有的呈链状排列，分为棒状杆菌、链状杆菌、球杆菌等。（3） 螺形菌 菌体弯曲，呈弧形或螺旋形。如幽门螺杆菌。细菌虽小，仍具有一定的细胞结构和功能。细胞壁、细胞膜、细胞质和核质等各种细菌都有，是细菌的基本结构。,球菌(coccus),双球菌(diplococcus),链球菌(streptococcus),球菌(coccus),八叠球菌(sarcina),四联球菌(tetr
5、ad),杆菌(bacillus) 不同杆菌的大小、长短、粗细很不一致。,杆菌(bacillus),分枝杆菌,双歧杆菌,螺形菌(spiral bacterium),细菌的繁殖,细菌生长速度很快，一般约20min分裂一次。若按此速度计算，细菌群体将庞大到难以想象的程度。但事实上由于细菌繁殖中营养物质的逐渐消耗，有害代谢产物的逐渐积累，细菌不可能始终保持高速度的无限繁殖。经过一段时间后，细菌繁殖速度逐渐减慢，死亡菌数增多，活菌增长率随之下降并趋于停滞。,微生物的类群和形态结构,二、真菌 真菌是一类有细胞壁，无叶绿素，以寄生或腐生方式生存，少数为单细胞，多数为多细胞，能进行无性或有性繁殖的一类真核细胞
6、型微生物。 真菌包括单细胞与多细胞两类。单细胞真菌呈圆形或卵圆形，称为酵母菌；多细胞真菌由菌丝和孢子组成，并交织成团，称丝状菌或霉菌。 真菌生长的最适的温度为2228，最适的pH值为46。其繁殖能力强，但生长速度比细菌慢，常需1-4周才形成菌落。真菌对热的抵抗力不强，一般加热6070 1小时即被杀死，但对干燥、日光、紫外线和一些化学消毒剂有抵抗力，但对2.5碘酒、10甲醛则较敏感。,微生物的类群和形态结构,三、病毒 病毒属非细胞型微生物，在自然界分布非常广泛，可在人、动物、植物、真菌和细菌中寄居并引起感染。病毒是体积最小、结构最简单的微生物，它仅有一种核酸（DNA或RNA）作其遗传物质。病毒必
7、须在宿主活细胞内寄生，依靠细胞提供的能量、营养物质及生物大分子合成机制，完成病毒的复制过程。 病毒与人类的关系极为密切，人类的传染病约75是由病毒引起的。有些病毒传染性强，可引起世界大流行（如流感、艾滋病等）。,热原与内毒素,热原：许多细菌、病毒和真菌（如酵母菌）都能产生热原。热原是微量即可引起恒温动物体温异常升高的物质的总称。主要物质为细菌内毒素、胞壁酰二肽及其他抗原抗体复合物、半抗体原物质和某些药物（类固醇）等。 内毒素：细菌内毒素一般指革兰阴性细菌细胞壁的结构成分，主要是脂多糖。 热原与内毒素的理化特性： 耐热性：120加热4h，可破坏98%。180加热2h或250加热30min，才可彻
8、底破坏。 滤过性：其体积小，约在15nm之间，故能通过滤器进入滤液中。 具有水溶性及不挥发性。 能被强酸、强碱和氧化剂破坏。,微生物的益处 绝大多数微生物对人和动物是有益的，已广泛应用于农业、食品、医药、酿造、化工、制革、石油等行业，发挥了越来越重要的作用。例如与我们日常生活密切相关的如酸奶、酒类、抗生素、疫苗等。,啤酒，葡萄酒的生产 面包酵母的生产 奶酪的生产 醋的生产 酸奶的生产 维生素的生产,类固醇的生产 抗菌素、干扰素的生产 分解废物，循环利用 帮助肠道中的食物消化,微生物的害处 微生物中也有一部分能引起人及动、植物发生病害，这些具有致病性的微生物，称为病原微生物。如人类的许多传染病（
9、感冒、伤寒、痢疾、结核、脊髄灰质炎、病毒性肝炎等），均是由病原微生物引起的。 从医疗器械生产的卫生学而言，微生物对医疗器械的原料、生产环境和成品的污染是造成生产失败、成品不合格的重要因素。,导致伤口感染 导致胃肠不适 引起感冒，咳嗽 尿道感染 败血症,癌症 脑脊膜炎 破伤风 艾滋病,感冒血常规常识（看三项）：,白细胞增高：炎症 中性粒细胞增高：细菌性感冒 淋巴细胞增加：病毒性感冒,微生物的主要类群：杆菌(大肠杆菌),微生物的主要类群：杆菌(碳疽),沙门氏菌,微生物的主要类群：葡萄球菌,微生物的主要类群：链球菌,微生物的主要类群：弧状菌,微生物的主要类群：四叠球菌,细菌的繁殖：二分裂繁殖,微生物
10、的主要类群：黑曲霉菌,微生物的主要类群：丝状真菌,真菌的繁殖：分生孢子,医疗器械生产中微生物控制,为什么要对医疗器械生产进行微生物控制？微生物可以致病。特别是对无菌、植入性医疗器械产品的危害。 如果细菌得到了必要的养料、一定量的水份和合适的温度，它们就能迅速繁殖，它们繁殖的速度快得惊人。通常一个细菌在仅仅24小时后可产生出281兆(百万)个的细菌。,生产过程中的主要的微生物污染源,空气水设备原辅料人员,微生物的污染途径,自身污染：由于患者和员工自身携带微生物而污染。 接触污染：由于和非无菌的用具、器械或人的接触而污染。 空气污染：由于空气中所含微生物的沉降、附着或被吸入而污染。 其他污染：由于
11、其他因素（如昆虫）而污染。,控制微生物的污染途径,有效地阻止室外的污染侵入室内。迅速有效地排除室内已发生的污染。控制污染源，减少污染发生量。,控制微生物污染途径（人、机、料、法、环）,污染途径及解决措施人、机、料、法、环,控制微生物污染途径,一、人 在洁净室中人体是主要菌源之一，不仅皮肤带有 细菌(其中约l为病原性的)，人通过呼吸、讲 话、操作、走动也会散布细菌。,控制微生物污染途径,根据国外实验资料，人员的发菌量有以下数据可供参考： 洁净室内当工作人员穿无菌服时：静止时的发菌量一般为10300 个(min人)；躯体一般活动时的发菌量为1501000 个(min人)；快步行走时的发菌量为900
12、2500 个(min人)。 咳嗽一次的发菌量一般为70700 个(min人)，喷嚏一次的发菌量一般为400060000 个(min人)。 穿平常衣服时发菌量为330062000 个(min人)。 无口罩发菌量：有口罩发菌量比率为： (1：7)(1：14)。,人员不良行为所产生的污染,当有如下行为时将相应增加微粒的产生量:吸烟者的呼吸 500% 喷嚏 2000% 搓手 200% 行走 200% 跺脚 5000%,更衣,着衣部位 测定日期 细菌数/100mm2上衣内侧 使用五日后 300外侧 使用五日后 200 裤子内侧 使用五日后 450外侧 使用五日后 70 帽子内侧 使用五日后 100外侧
13、使用五日后 150 口罩内侧 使用一日后 22000外侧 使用一日后 100,更衣的目的-阻菌,想混进去，没门！,操作幅度,1.洁净区行为要控制，要缓慢移动，保持好的身体姿势，轻声谈话，减少交谈频率等。2.人的行为是维持洁净区平衡不可或缺的。,手的卫生,每只手可携带40万个细菌；刚洗过的手，每平方厘米也可检验出3200个细菌 。,洗手的重要性:,用流水（如自来水）洗手，能使手上的致病微生物减少80%； 用皂液充分洗手，再用自来水冲洗能使致病微生物减少95%。 洗手后正确使用消毒剂能使致病微生物减少99%。,手的细菌对照实验,未洗的手,漂洗的手(只用清水),洗净的手(用皂液),洗净的手(用消毒剂
14、),洗手七步法：,控制微生物污染途径,二、环 洁净度测定包括：悬浮粒子微生物- 浮游菌- 沉降菌,洁净区空气洁净度等级:,欧盟 GMP 2002 微粒指标,A级风速为：0.36-0.54m/s（指导值） 级别分动态及静态；5m ：1 应视作不检出；2005年9月21日修改，考虑光散射及电子噪声等可能误报，标准为20个/ m3 应对A级区的空气粒子进行连续测定，并建议对B级区也连续测定,控制微生物污染途径,三、料 A、原辅料； B、内包材； C、与医疗器械接触的其它部分（气体、溶剂）,控制微生物污染途径,四、机 设备和器具与医疗器械的直接接触。特别是设备或设施的卫生死角。,控制微生物污染途径,设
15、备和器具的清洗 清洁程序必须经过验证 严格按清洗周期清洗 清洗和存放设备、器具处应与生产区域洁净等级相同 注重与物料接触设施及部件处理,控制微生物污染途径,五、法 上述各种控制方法应该以相关SOP形式存在。,SOP的概念,SOP是Standard Operation Procedure三个单词中首字母的大写 ，即标准作业程序，就是将某一事件的标准操作步骤和要求以统一的格式描述出来，用来指导和规范日常的工作。SOP是一种标准的作业程序。所谓标准，在这里有最优化的概念，即不是随便写出来的操作程序都可以称作SOP，而一定是经过不断实践总结出来的在当前条件下可以实现的最优化的操作程序设计。说得更通俗一些，所谓的标准，就是尽可能地将相关操作步骤进行细化，量化和优化，细化，量化和优化的度就是在正常条件下大家都能理解又不会产生歧义。,思考题：,从微生物学角度，自己岗位有哪些过程控制需要完善？（分别从“人、机、料、法、环”五方面分工序排查。）,
