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1、过继免疫细胞疗法的临床应过继免疫细胞疗法的临床应 用及研究进展用及研究进展福建省重点实验室 （福建省肿瘤医院内科研究室）叶韵斌 郝明志过继免疫细胞疗法的作用 p直接清除体内的残存肿瘤细胞和病毒p提高机体的整体免疫功能p将患者个体化的肿瘤抗原信息递呈给免疫杀伤细胞已成为肿瘤综合治疗方案中，提高治愈率和有效率的关键措施 。机体抗肿瘤的免疫学效应机制一、体液免疫应答（略） 二、细胞免疫应答v细胞免疫在机体抗肿瘤效应中起重要作用。 主要有CD4+T细胞、CD8+T细胞、抗原递呈细胞、NK细胞1. CD4+T细胞：参与B细胞、巨噬细胞、NK细胞和 CTL细胞的活化和抗肿瘤效应。A. 辅助激活CTL,B细
2、胞,NK，巨噬细胞;B. 分泌细胞因子：IL-2，IFN-，TNF- C.少数属于细胞毒性T细胞，具有杀瘤作用2. CD8+T细胞：在机体的肿瘤效应中起关键作 用。CTL（细胞毒性T淋巴细胞） A. 通过其细胞膜上的T细胞抗原识别受体（TCR）， 特异性识别MHC分子肿瘤抗原肽复合物，引起T 细胞活化、增殖，杀伤肿瘤细胞。 B. 分泌细胞因子3. 抗原递呈细胞：M、DCA. 通过摄取、加工处理和递呈肿瘤抗原，激 发特异性T细胞免疫。B. 活化的巨噬细胞通过溶酶体酶直接杀伤,且 可通过分泌细胞因子间接杀伤肿瘤细胞。 C. 介导炎症反应 D. ADCC(抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用)4. NK细
3、胞非特异性免疫应答A. 非特异性杀伤 B. 无MHC限制性，无需预先致敏 C. 不依赖抗体和补体 D. ADCC (抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用) E. 释放IFN-HBVIL-12IL-12活化活化DCDCTh1Th1DCDCCTLCTLCD4CD4CD4CD4IL-12IL-12NK/NKTNK/NKTPathogenIFNIFNIL-2IL-2 IFNIFNIL-12IL-12机体对肿瘤抗原的免疫应答过继免疫细胞疗法适应症过继细胞免疫疗法是指转输具有生物活性的效应细胞，诱导机体产生特异性或非特异性的免疫应答，从而用于治疗肿瘤和病毒相关性疾病的免疫学治疗方法。 只有少数肿瘤单独应用细胞免
4、疫疗法可达到很好的疗效，但对大多数肿 瘤，过继免疫细胞疗法作为综合治疗的一部分，用于：l手术后防治复发或转移；l无法手术、放疗、化疗的中晚期患者；l放化疗患者的综合治疗；l放化疗失败的患者；l癌性胸腹水l白血病等。理想的过继免疫细胞治疗应具有以下特点:(1)可大量获得 ，实验室研究及临床实践显示 ，临床治疗量的免疫细胞应在1 1010以上 (2)具有抗原特异性 (3)抗肿瘤、抗病毒活性强 (4)体内应用可耐受 (5)可聚集在肿瘤病灶 (6)可在体内存活 、增殖 一、肿瘤浸润的淋巴细胞（TIL）v肿瘤浸润的淋巴细胞，是从新鲜的肿瘤组织中分离出来，体外经IL-2，抗CD3单抗，TNF等刺激，经20
5、-45天培养，获得的具有一定特异性的抗肿瘤细胞。其局限在于分离困难，体外培养时间过长,限制了临床应用。TIL细胞治疗恶性胸腹水临床经验我们于1997-1998年选择21例癌性胸腹水患者，共抽取33次胸腹水做TIL细胞培养，21例患者中14例经16次的TIL胸腹腔回输治疗。14例患者回输治疗结果显示总有效率为78.57%，其中3例胸腹水消失，并观察1个月无复发，1个月后检查胸腹水无瘤细胞；8例胸腹水有明显减少，并控制1个月以上；3例仅控制12周。v肿瘤浸润淋巴细胞治疗癌性胸腹水的初步观察 浙江肿瘤 1997， 3（3）二、细胞因子激活的杀伤细胞 （CIK）v是将人外周血单个核细胞（PBMC,包括
6、淋巴细胞和单核细胞）经体外用各种细胞因子共同刺激培养所获得 的免疫细胞。由于同时表达CD3和CD56分子，故 又称为NK样T细胞，CIK细胞兼具有T淋巴细胞强大 的抗瘤活性和NK细胞的非MHC限制性杀瘤特点， 其抗肿瘤活性远大于LAK和TIL。因此被认为是新一代肿瘤过继细胞免疫治疗的首选方案。v引进日本的无血清培养技术，体外高效培养CIK细胞v只需50 ml 全血，培养1020天，可供36次的回 输，回输细胞总量达11010vCD3CD56细胞比例显著增加v治疗205例肿瘤患者（肝癌、肠癌、胃癌、食道癌、肺癌、乳腺癌、肾癌 、鼻咽癌、等）TACE+CIK治疗原发性肝癌资料: 72 patien
7、ts were treated with TACE + CIK 74 patients were treated with TACE only同期非随机对照(年龄、AFP、分期、肝功能、肿瘤结节数等方面有可比性) 结果:治疗组与对照组中位OS分别为31个月 vs. 10个月。中位TTP分别为11个月 vs. 5个月。 两组半年、1年、2年生存率分别为 91.3%、71.9%、62.4% vs.74.6%、42.8%、18.8 结论: TACE+CIK能够明显提高介入治疗效果，延长疾病进 展时间，提高远期生存率。TACE+CIK治疗 原发性肝癌v两组基线材料比较无病生存时间/总生存时间生存分析H
8、ao MZ. C Qiang. Ye YB. et al. Efficacy of transcatheter arterial chemoembolization combined with cytokine-induced killer cell therapy on hepatocellular carcinoma: a comparative studyChi J of cancer 2010，29（2）：182-189CIK在介入术后应用时机肝癌术后补充TACE术联合CIK细胞免疫治疗对 复发率及生存率的影响 福建省科技厅青年人才项目 2006F3035 负责人余文昌v方法：对200
9、6年-2009年在本院行肝癌切除术的50例HCC患者，按术后是 否补充TACE术联合CIK细胞免疫治疗分为研究组(25例)和对照组(25例), 对比分析两 组患者术后l、2、25年的累积复发率和生存率。v结果：两组1、2、2.5年的累积复发率分别为287、382、519Vs. 324、526、605，两组1、2、2.5年的累积生存率分别为 100、889、698%vs96、749、642v结论: 肝癌切除术后补充TACE+CIK治疗是降低患者复发率及延长生存期的有效 手段。 肝癌术后补充动脉插管化疗栓塞术联合细胞免疫治疗对复发率及生存率的影响.微创医学.2009,4(5):459-461CIK
10、细胞疗法治疗HCC-典型病例v 患者，74岁，男性，以体检发现肝占位3月于2007年3月26入院，当时MRI:肝 硬化结节恶变，表现为弥漫多发结节，最大者1.1cm；AFP:3710 ng/ml。肝功能 child-pugh分级B级。患者心肺功能差，同时合并酒精性肝硬化、冠心病、房颤 、糖尿病、甲减、肺间质改变、脑梗塞等，无法耐受手术、介入治疗等，而采用 CIK细胞免疫疗法+支持治疗。4月13日开始CIK回输，4月26日复查AFP229 ng/ml，出院休息。电话随访，5月底在外院查AFP20 ng/ml，其后未进一步治疗 。v08年5月体检肿瘤复发，AFP32360ng/ml，MRI：肝多发
11、肿瘤伴门脉瘤栓，最大 肿瘤5cm，病灶较2007年3月片明显增多增大。再次CIK治疗未见明显疗效。7月 消化道出血，脑梗塞去世。CIK治疗胃癌 -实验研究v方法： 取正常人外周血单个核细胞，体外诱导成 CIK细胞 ， 在 Balb/c裸小鼠腹腔内接种胃癌细胞株OCUM-2MD3， 观 察 CIK细胞对荷瘤鼠的抑瘤作用。v结果： 体外实验证明， CIK细胞对胃癌细胞株OCUM-2MD3 有明显的细胞毒活性。体内实验表明， CIK细胞能够显著抑 制癌性腹水的生长， 其抑100%； 肿瘤标志物 CEA含量明显 降低。v结论: CIK细胞是一种新型、高效的免疫活性细胞，具有较 强的体内外抗胃癌细胞活性
12、，具有明显的抑制癌性腹水的生 长的作用， 有可能用于临床上晚期胃癌的过继性免疫治疗 。CIK治疗病毒性肝炎v文献报道自体CIK治疗乙型肝炎肝硬化和白血 病合并丙型病毒性肝炎，取得以下成效：CIK细胞治疗改善肝脏功能CIK细胞治疗抑制病毒复制v综合国内外的研究，CIK免疫细胞疗法在病毒 性肝炎的防治中起到重要作用。CIK输注不良反应v免疫活性细胞回输后患者可出现一过性类流 感样症状，如发热（体温37.539.5）， 轻度头痛、乏力、关节酸痛，持续时间均不 超过12 h， 可自行缓解，所有患者均能很好 耐受治疗。 v由于该治疗技术能在一定程度上打破免疫耐 受、进而清除病毒和肿瘤细胞，因此不仅是 治
13、疗病毒感染性疾病的重要方法，也成为继 手术、化疗、放疗后的肿瘤第四疗法。v1999年国家食品药品监督管理局批准将自体 CIK用于治疗急性白血病及慢性丙肝。v2001年CIK疗法作为经常性医疗项目，进入 全国医疗服务价格项目规范。目前在我 省也列入各级医保项目。 三、自然杀伤细胞（NK）为机体免疫的第一道防线表面标志： CD3-/CD16+/CD56+NK细胞受体和配体叶韵斌，周志锋，郑蕊蕊，等，KIR不相和NK细胞对乳腺癌体外杀伤 作用， 中国肿瘤生物肿瘤杂志 2007，14（1）郑蕊蕊, 叶韵斌, 陈强. 杀伤细胞免疫球蛋白样受体与肿瘤免疫治疗J.中国肿 瘤,2006,15(1):39-42
14、. NK细胞依赖受体与相应配体结合 以实现其生物学功能。 MICA在各种肿瘤中表达vMICA是NK细胞表面活化性受体NKG2D的相应配体，不表达 于正常组织细胞或仅低表达于肠上皮细胞v上皮来源的原发性肿瘤如肺癌、乳腺癌、肝癌、前列腺癌等 细胞高表达。Busche等报道人肺癌组织有30%的MICA表达。 而Jennifer等报道前列腺癌95%表达，说明各种癌MICA表达 不一样。v而且，同种肿瘤由于生物学行为的不同，也出现MICA表达的 不均一性。我们用流式细胞术检测乳腺癌细胞株MICA的表达 , 结果, MCF-7、MDA-MB-231表达MICA，而SK-Br3不表达。v乳腺癌细胞表面表达的
15、MICA分子可上调NK细胞表面NKG2D的 表达,激发NK细胞对乳腺癌细胞的细胞毒效应. v目前已经观察了人HCC中MICA 的肿瘤特异性表达形式以及 NK细胞通过 MICANKG2D 途径对HCC细胞的识别。v晚期HCC患者中，从肿瘤细胞表面脱落的可溶性的MICA能 下调NKG2D的表达，并且抑制NKG2D介导的免疫应答。这 可能是晚期HCC免疫逃逸机制中的一个环节。 v最近研究发现，催化色氨酸分子氧化裂解的限速酶-吲哚胺2 ,32双加氧酶 (IDO)具有抗肿瘤作用，其主要机制就是上调 NK细胞的活性，抑制 IDO 可以降低 NK细胞的活性，并且 呈剂量依赖关系，可见NK细胞在抗肝癌免疫中发
16、挥重要作 用的 。v肿瘤细胞表面MICA存在是NK细胞杀伤肿瘤 的重要分子机制。v通过测定肿瘤细胞表面MICA的表达水平，可 预测NK细胞为主的免疫治疗的疗效。v换句话说，可以根据患者肿瘤组织MICA水平 决定是否进行免疫治疗或采取何种免疫治疗 ，避免了盲目性。美国已经开始该方面的临床治疗研究四、DC细胞树突状细胞（Dendritic Cells, DC）是近年来倍受人们关 注的专职抗原呈递细 胞（Antigen presenting Cells,APC ），能摄取、加工及 呈递抗原，启动T细胞 介导的免疫反应。DC-T细胞相互作用缺 陷可导致特异性T细胞 免疫缺陷。 CD4+ T 细胞CD8+ T 细胞NK 细胞 NKT 细胞树突状细胞 （DC）v体外实验证实，人DC至少有三条来自于不同 前体细胞的发育途径：1）CD34+细胞分化为DC 2）外周血单核细胞分化为DC 3）淋巴样DC前体细胞分化途径v我们比较了人外周血单核细胞及脐血CD34+细胞
