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1、微生物学专业毕业论文微生物学专业毕业论文 精品论文精品论文 花生果种皮特异表达基因及花生果种皮特异表达基因及其启动子克隆其启动子克隆关键词：花生关键词：花生 果皮果皮 种皮种皮 特异表达基因特异表达基因 启动子启动子摘要：花生种子是花生收获的主要目标产物，它决定花生的产量和品质的形成。 但是花生种子在生长过程中容易受到黄曲霉等病菌的侵染。本研究的主要目的 是：(1)在已经获得的花生果种皮差异表达基因片段的基础上，通过构建花生果 种皮全长 cDNA 文库并筛选该全长基因；(2)对筛选的基因进行表达模式研究， 并通过 Tail-PCR 克隆其上游启动子序列，为花生遗传转化提供果种皮特异表达 启动子
2、，使外源抗性基因蛋白在花生果种皮表达而果仁中不表达，有利于解决 转基因食品中存在的安全性问题。主要研究结果如下： 1.构建了一个花生果 种皮全长 cDNA 文库，采用基于 PCR 技术的逐步浓缩法筛选到三个花生果种皮全 长基因：AhPSG8、AhPSG13、AhPSC11。测序结果表明，AhPSG8 基因 cDNA 全长 1118bp，起始密码子 ATG 位于 33-35 个核苷酸处。开放阅读框从第 33 个碱基始 至 833 个碱基止，编码 266 个氨基酸残基组成的多肽，该基因编码的蛋白含有 多个活性位点；AhPSG13 基因 cDNA 全长 1369bp，开放阅读框从第 28 个碱基始
3、到 1122 个碱基止，编码 364 个氨基酸；AhPSC11 基因全长 609bp，开放阅读框 从第 67 个核苷酸始至 462 个核苷酸止，编码 131 个氨基酸。这三个基因均为新 基因，将其登陆在 NCBI/GeneBank 上。 2.半定量 RT-PCR 研究所获得的上述 基因在不同器官的表达发现这三个基因均为花生果种皮特异表达基因。根据已 经获得的 AhPSG8 和 AhPSC11 基因全长序列，通过染色体步移技术克隆了其上游 启动子序列：生物信息学分析表明，AhPSC11 基因上游 683bp 启动子序列中含 有 TATA Box、CAAT Box、ATCT-motif、GAG-m
4、otif. GARE-motif 和 sp1 等多个 与转录有关的结构域；AhPSG8 基因上游获得了一个 1551bp 的核苷酸片段，但 是该片段仅与基因上游部分序列重叠，推测为内含子序列，有待进一步验证。 目前，分子生物学技术发展迅速，但是就花生方面研究而言，总体来讲相对薄 弱。本试验可以一定程度上增强花生基础理论研究，丰富花生功能基因组学研 究内容，为最终解决花生生产问题奠定基础。正文内容正文内容花生种子是花生收获的主要目标产物，它决定花生的产量和品质的形成。 但是花生种子在生长过程中容易受到黄曲霉等病菌的侵染。本研究的主要目的 是：(1)在已经获得的花生果种皮差异表达基因片段的基础上，
5、通过构建花生果 种皮全长 cDNA 文库并筛选该全长基因；(2)对筛选的基因进行表达模式研究， 并通过 Tail-PCR 克隆其上游启动子序列，为花生遗传转化提供果种皮特异表达 启动子，使外源抗性基因蛋白在花生果种皮表达而果仁中不表达，有利于解决 转基因食品中存在的安全性问题。主要研究结果如下： 1.构建了一个花生果 种皮全长 cDNA 文库，采用基于 PCR 技术的逐步浓缩法筛选到三个花生果种皮全 长基因：AhPSG8、AhPSG13、AhPSC11。测序结果表明，AhPSG8 基因 cDNA 全长 1118bp，起始密码子 ATG 位于 33-35 个核苷酸处。开放阅读框从第 33 个碱基
6、始 至 833 个碱基止，编码 266 个氨基酸残基组成的多肽，该基因编码的蛋白含有 多个活性位点；AhPSG13 基因 cDNA 全长 1369bp，开放阅读框从第 28 个碱基始 到 1122 个碱基止，编码 364 个氨基酸；AhPSC11 基因全长 609bp，开放阅读框 从第 67 个核苷酸始至 462 个核苷酸止，编码 131 个氨基酸。这三个基因均为新 基因，将其登陆在 NCBI/GeneBank 上。 2.半定量 RT-PCR 研究所获得的上述 基因在不同器官的表达发现这三个基因均为花生果种皮特异表达基因。根据已 经获得的 AhPSG8 和 AhPSC11 基因全长序列，通过染
7、色体步移技术克隆了其上游 启动子序列：生物信息学分析表明，AhPSC11 基因上游 683bp 启动子序列中含 有 TATA Box、CAAT Box、ATCT-motif、GAG-motif. GARE-motif 和 sp1 等多个 与转录有关的结构域；AhPSG8 基因上游获得了一个 1551bp 的核苷酸片段，但 是该片段仅与基因上游部分序列重叠，推测为内含子序列，有待进一步验证。 目前，分子生物学技术发展迅速，但是就花生方面研究而言，总体来讲相对薄 弱。本试验可以一定程度上增强花生基础理论研究，丰富花生功能基因组学研 究内容，为最终解决花生生产问题奠定基础。 花生种子是花生收获的主要
8、目标产物，它决定花生的产量和品质的形成。但是 花生种子在生长过程中容易受到黄曲霉等病菌的侵染。本研究的主要目的是： (1)在已经获得的花生果种皮差异表达基因片段的基础上，通过构建花生果种皮 全长 cDNA 文库并筛选该全长基因；(2)对筛选的基因进行表达模式研究，并通 过 Tail-PCR 克隆其上游启动子序列，为花生遗传转化提供果种皮特异表达启动 子，使外源抗性基因蛋白在花生果种皮表达而果仁中不表达，有利于解决转基 因食品中存在的安全性问题。主要研究结果如下： 1.构建了一个花生果种皮 全长 cDNA 文库，采用基于 PCR 技术的逐步浓缩法筛选到三个花生果种皮全长基 因：AhPSG8、Ah
9、PSG13、AhPSC11。测序结果表明，AhPSG8 基因 cDNA 全长 1118bp，起始密码子 ATG 位于 33-35 个核苷酸处。开放阅读框从第 33 个碱基始 至 833 个碱基止，编码 266 个氨基酸残基组成的多肽，该基因编码的蛋白含有 多个活性位点；AhPSG13 基因 cDNA 全长 1369bp，开放阅读框从第 28 个碱基始 到 1122 个碱基止，编码 364 个氨基酸；AhPSC11 基因全长 609bp，开放阅读框 从第 67 个核苷酸始至 462 个核苷酸止，编码 131 个氨基酸。这三个基因均为新 基因，将其登陆在 NCBI/GeneBank 上。 2.半定
10、量 RT-PCR 研究所获得的上述 基因在不同器官的表达发现这三个基因均为花生果种皮特异表达基因。根据已 经获得的 AhPSG8 和 AhPSC11 基因全长序列，通过染色体步移技术克隆了其上游 启动子序列：生物信息学分析表明，AhPSC11 基因上游 683bp 启动子序列中含有 TATA Box、CAAT Box、ATCT-motif、GAG-motif. GARE-motif 和 sp1 等多个 与转录有关的结构域；AhPSG8 基因上游获得了一个 1551bp 的核苷酸片段，但 是该片段仅与基因上游部分序列重叠，推测为内含子序列，有待进一步验证。 目前，分子生物学技术发展迅速，但是就花
11、生方面研究而言，总体来讲相对薄 弱。本试验可以一定程度上增强花生基础理论研究，丰富花生功能基因组学研 究内容，为最终解决花生生产问题奠定基础。 花生种子是花生收获的主要目标产物，它决定花生的产量和品质的形成。但是 花生种子在生长过程中容易受到黄曲霉等病菌的侵染。本研究的主要目的是： (1)在已经获得的花生果种皮差异表达基因片段的基础上，通过构建花生果种皮 全长 cDNA 文库并筛选该全长基因；(2)对筛选的基因进行表达模式研究，并通 过 Tail-PCR 克隆其上游启动子序列，为花生遗传转化提供果种皮特异表达启动 子，使外源抗性基因蛋白在花生果种皮表达而果仁中不表达，有利于解决转基 因食品中存
12、在的安全性问题。主要研究结果如下： 1.构建了一个花生果种皮 全长 cDNA 文库，采用基于 PCR 技术的逐步浓缩法筛选到三个花生果种皮全长基 因：AhPSG8、AhPSG13、AhPSC11。测序结果表明，AhPSG8 基因 cDNA 全长 1118bp，起始密码子 ATG 位于 33-35 个核苷酸处。开放阅读框从第 33 个碱基始 至 833 个碱基止，编码 266 个氨基酸残基组成的多肽，该基因编码的蛋白含有 多个活性位点；AhPSG13 基因 cDNA 全长 1369bp，开放阅读框从第 28 个碱基始 到 1122 个碱基止，编码 364 个氨基酸；AhPSC11 基因全长 60
13、9bp，开放阅读框 从第 67 个核苷酸始至 462 个核苷酸止，编码 131 个氨基酸。这三个基因均为新 基因，将其登陆在 NCBI/GeneBank 上。 2.半定量 RT-PCR 研究所获得的上述 基因在不同器官的表达发现这三个基因均为花生果种皮特异表达基因。根据已 经获得的 AhPSG8 和 AhPSC11 基因全长序列，通过染色体步移技术克隆了其上游 启动子序列：生物信息学分析表明，AhPSC11 基因上游 683bp 启动子序列中含 有 TATA Box、CAAT Box、ATCT-motif、GAG-motif. GARE-motif 和 sp1 等多个 与转录有关的结构域；Ah
14、PSG8 基因上游获得了一个 1551bp 的核苷酸片段，但 是该片段仅与基因上游部分序列重叠，推测为内含子序列，有待进一步验证。 目前，分子生物学技术发展迅速，但是就花生方面研究而言，总体来讲相对薄 弱。本试验可以一定程度上增强花生基础理论研究，丰富花生功能基因组学研 究内容，为最终解决花生生产问题奠定基础。 花生种子是花生收获的主要目标产物，它决定花生的产量和品质的形成。但是 花生种子在生长过程中容易受到黄曲霉等病菌的侵染。本研究的主要目的是： (1)在已经获得的花生果种皮差异表达基因片段的基础上，通过构建花生果种皮 全长 cDNA 文库并筛选该全长基因；(2)对筛选的基因进行表达模式研究
15、，并通 过 Tail-PCR 克隆其上游启动子序列，为花生遗传转化提供果种皮特异表达启动 子，使外源抗性基因蛋白在花生果种皮表达而果仁中不表达，有利于解决转基 因食品中存在的安全性问题。主要研究结果如下： 1.构建了一个花生果种皮 全长 cDNA 文库，采用基于 PCR 技术的逐步浓缩法筛选到三个花生果种皮全长基 因：AhPSG8、AhPSG13、AhPSC11。测序结果表明，AhPSG8 基因 cDNA 全长 1118bp，起始密码子 ATG 位于 33-35 个核苷酸处。开放阅读框从第 33 个碱基始 至 833 个碱基止，编码 266 个氨基酸残基组成的多肽，该基因编码的蛋白含有 多个活
16、性位点；AhPSG13 基因 cDNA 全长 1369bp，开放阅读框从第 28 个碱基始 到 1122 个碱基止，编码 364 个氨基酸；AhPSC11 基因全长 609bp，开放阅读框 从第 67 个核苷酸始至 462 个核苷酸止，编码 131 个氨基酸。这三个基因均为新基因，将其登陆在 NCBI/GeneBank 上。 2.半定量 RT-PCR 研究所获得的上述 基因在不同器官的表达发现这三个基因均为花生果种皮特异表达基因。根据已 经获得的 AhPSG8 和 AhPSC11 基因全长序列，通过染色体步移技术克隆了其上游 启动子序列：生物信息学分析表明，AhPSC11 基因上游 683bp 启动子序列中含 有 TATA Box、CAAT Box、ATCT-motif、GAG-motif. GARE-motif 和 sp1 等多个 与转录有关的结构域；AhPSG8 基因上游获得了一个 1551bp 的核苷酸片段，但 是该片段仅与基因上游部分序列重叠，推测为内含子序列，有待进一步验证。
