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1、中文论著摘要大鼠血浆中灭多威的分析及其代谢物的质谱研究目的本文建立了血浆中灭多威的固相萃取高效液相色谱( S P E H P L C ) 快速定性定量分析方法，并利用固相萃取高效液相色谱质谱( S P E H P L C M S ) 法对大鼠血浆中的灭多威及其代谢物进行了研究。方法以空白大鼠血浆添加灭多威标准品及内标物安定标准品对血浆样品的前处理方法、仪器测试条件、特异性、回收率、灵敏度、精密度、准确度、线性关系、稳定性进行全面考察，建立血浆中灭多威的S P E H P L C 快速定性定量分析方法；H P L C M S 法在大鼠血浆中检出了灭多威及其代谢物。采用H P L C 法：测定不同
2、时间点大鼠血浆中灭多威的药物浓度。按照灭多威5 m g k g 给雄性大鼠灌胃后，收集0 3 3 h ，0 6 7 h ，l h ，2 h ，3 h ，5 h ，7 h ，9h ，l l h ，1 3 h ，1 5 h ，1 7 h ，1 9 h ，2 1 h ，2 3 h 的大鼠血浆，S P E H P L C 法测定血浆中灭多威，并对2 4 h 内大鼠血浆中灭多威浓度的变化规律进行了描述；模拟法医鉴定，按照灭多威5 0 m g k g 给雄性大鼠灌胃后，将大鼠尸体室温存放7 2 h ，取心血，S P E H P L C法检测大鼠血浆中灭多威的含量；色谱柱：k r o m a s i lC
3、1 8 柱( 4 6 m mi d x 2 5 0 m m ，靴m 粒径) ；流动相：甲醇：水= 4 0 ：6 0 ( V V ) ；检测波长：2 3 5 n m ；安定作为内标。采用H P L C M S 法：分析大鼠血浆中灭多威及其代谢物。模拟法医鉴定，按照灭多威5 0 m g k g 给雄性大鼠灌胃后，将大鼠尸体室温存放7 2 h ，取心血，S P E H P L C - M S 法检测大鼠血浆中的灭多威及其代谢物。色谱柱：X t e r r aC 。柱( 2 1 m mi d x 1 5 0 m m ，靴m 粒径) ；流动相：甲醇：水= 1 5 ：8 5 ( v v ) ；检测波长：2
4、 3 5 n m ：质谱：采用电喷雾电离方式( E S l + ) ，毛细管电压：3 0 k V ；离子源温度：11 0 ：干燥气温度：3 0 0 ；干燥气流速：4 5 0 I h ；扫描范围：5 0 - - 一3 0 0 m z 。结果S P E H P L C 法测得灭多威在血浆中的线性范围是0 1 t g m l 2 0 k t g m l ( r = 0 9 9 93 ，P 血 肺 肾 心 脑。氨基甲酸酯类农药的代谢与排泄迅速，一般在体内无蓄积，在体内的代谢形式主要有氧化、水解、结合三种。动物经口服给药后，脏器内含量在1 5 m i n 左右达到高峰，4 h 后几乎测不出，在2 4 小
5、时内即以解毒产物葡萄糖醛酸酯的形式排出摄入量的7 0 - - 一9 0 ，主要经尿液排出。在氨基甲酸酯进入机体后以其整个分子形式与胆碱酯酶结合，使乙酰胆碱酯酶活性中心一卜的丝氨酸的羟基被氨基甲酰化，从而阻止了乙酰胆碱2 0与月日碱酯酶的结合，由于胆碱酯酶失去了酶解乙酰胆碱的能力而致乙酰胆碱在体内蓄积而中毒1 。在水、土壤、水果、蔬菜以及其它农作物方面，已经建立了很多氨基甲酸酯类农药的检测方法p 。本文将着重介绍S P E H P L C 法对氨基甲酸酯类农药的分析的应用及进展，并对现有的各种检测方法做简单回顾，并与S P E H P L C 法相比较，指出S P E H P L C 法在氨基甲
6、酸酯类农药分析中的应用优势及意义。二、氨基甲酸酯类农药的前处理方法目前对于氨基甲酸酯类农药的生物检材的前处理方法主要有液液萃取法( L L E ) 、固相萃取法( S P E ) 、固相微萃取技术( S P M E ) 、超临界流体提取( S E E ) 、加速溶剂萃取( A S E ) 、免疫亲和色谱技术( I A C ) 、基质固相分散萃取技术( M S P D E ) 、分子印迹技术( M I T ) 等。( 一) 液液萃取法( L L E )最早使用的一种提取净化方法，利用待测农药与干扰杂质在2 种互不相溶的溶剂中溶解度( 分配系数) 的差异而达到分离的目的，该方法不需要昂贵的设备和试
7、剂，方法简单，易于操作。但由于液液萃取法( L L E _ ) 有消耗溶剂量较大，易形成乳状液，萃取后杂质较多、回收率低、耗费时间等缺点。M i c h e lM 【4 1 比较了液液萃取法和固相萃取法并指出了液液萃取法的这一系列缺陷。( 二) 固相萃取法( S P E )近年来开发的并得到广泛应用的一种新技术，通过使样品在吸附剂与溶剂中溶解度及功能团的相互作用最佳化来影响样品的滞留与洗脱，从而达到分离目的。由于其具有操作简便快速、有机溶剂用量少、环境污染小等优点，在农药分析的样品前处理中得到了广泛的应用。K u m a r Y p l 利用S e p P a kC 1 8 固相萃取小柱对水中
8、残杀威的含量进行了检测，然后液相色谱测定，添加回收率为8 5 3 8 - 9 1 3 5 。( 三) 固相微萃取技术( S P M E )由加拿大W a t e r l o o 大学的P a w l i s z y n 等人于1 9 9 0 年提出的，在固相萃取的基础发展起来的新方法。目前S P M E 萃取待测物可与气相色谱、液相色谱等分折分离技术联用，适用于分析挥发性和难挥发性有机物。由于它是一种无溶剂萃取技2 1术，并具有操作时间短、样品用量少、重复性好、精密度高、检出限低等优点，在农药分析中有很好的应用前景。G o n z a l e z R o d r i g u e z 等p 1
9、采用固相微萃取和低压气相色谱质谱联用技术对不同种类牛奶中的4 0 多类农药残留和其代谢产物进行净化和测定，回收率为8 0 - - “ 1 1 0 。但与固相萃取柱相比固相微萃取柱价格较贵不易普及使用。( 四) 超临界流体提取( S F E )以超临界流体代替各种溶剂来提取样品中待测组分的方法。目前最常用的超临界流体为C O ，其无毒，分子极性比较小，可用于提取非极性或弱极性农药残留，同时也可以加入适量极性调节剂如甲醇等，可最大限度地提取不同极性的农药残留而最低限度地减少杂质的提取。其具有提取效率高、速度快、节省大量的有机溶剂、容易实现操作自动化等优点。该方法的缺点是所需的超零界流体需特殊制备，
10、故不如固相萃取法易行。E 1 S a e i dM H 等H 1 利用超临界流体对食品，水果，蔬菜中的氨基甲酸酯类农药残留进行了测定。( 五) 加速溶剂萃取( A S E )A S E 是一种全新的萃取方法，在较高的温度和压力下用有机溶剂萃取固体或半固体样品的新颖的样品前处理方法。其突出的优点是有机溶剂用量少、快速、回收率高，该法已被美国E P A ( 环保局) 选定为用于环境样品中杀虫剂污染物检测的推荐的标准方法。该方法的缺点是必须在较高的温度和压力下才能进行，故也不如固相萃取法易行。O k i h a s h iM 刚等利用这一方法对食品中氨基甲酸酯类农药进行了提取分离。( 六) 免疫亲和
11、色谱技术( I A C l一种将免疫反应与色谱分析相结合的分析方法，它是把抗体固定在适当的支持物上，利用抗体与抗原或半抗原可逆的生物专一性相互作用来净化富集分析物。该技术的关键是选择合适的支持物，合适的抗体和合适的淋洗缓冲液。它具有高度的选择性的优点。R u l eG S 等p 1 建立了一种应用亲和柱净化，液相色谱测定生物样品中呋喃丹含量的方法。目前，这项技术在国内外尚处于研究阶段。该方法的缺点是技术不成熟、实验条件苛刻。2 2( 七) 基质固相分散萃取技术( M S P D E )是将样品与适量的固体基质( 硅胶，弗罗里硅土，C 1 8 ，C 8 等) 研磨，使样品吸附在固定基质上，混匀制
12、成半固态作为填料装柱，然后选择合适的有机溶剂洗脱固定相，将各种待测物洗脱下来。其优点样品提取、净化一步完成，不需要进行组织匀浆、沉淀、离心、p H 调节和样品转移等操作步骤，适用于多残留分析，特别适合于进行一类化合物的分离或单个化合物的分离。G a r c i n u r i oR M 等1 0 1 利用硅胶做为基质固相分散吸附剂，乙腈作为洗脱剂对杏仁中氨基甲酸酯类农药残留进行提取净化，R P L C D A DU V 测定，回收率7 6 8 5 。该方法效果较好，回收率与固相萃取法相当。( 八) 分子印迹技术( M I T )分子印迹( M I T ) 是可用于制备合成受体的新技术，其原理是
13、：首先使拟被印迹的分子与聚合物单体结合，然后将聚合物单体交联，再将印迹分子从聚合物中提取出来，聚合物内部就留下了印迹分子的印迹，该聚合物与含印迹分子样品相遇时，对印迹分子具有较强的结合能力、较大的吸附容量，因此可用于样品的提取净化。与传统方法相比，分子印迹技术可同时实现目的组分的分离与检测，选择性高，适用范围广，因此应用十分广泛。分子印迹技术可以用于药物、农药、蛋白质、氨基酸等各种化合物的分离工作。I m m e r 等1 1 1 利用分子印迹聚合物固相萃取水样和土壤中农药，回收率为8 0 ，最低检测量0 0 5 “ - 一0 知g L 。但由于大多数分子印迹聚合物只适合于非极性环境，而且需要
14、合成被印迹分子衍生物，使该项技术受到限制，故应用不如S P E 广泛。三、氨基甲酸酯类农药的检测分析方法目前对于氨基甲酸酯类农药的检测分析方法主要有薄层色谱法( T IC ) 、液相色谱法( H P L C ) 、气相色谱法( G c ) 、气相色谱一质谱联用( G C M S ) 、超临界流体色谱( S F C ) 、柱切换高效液相技术( C S H P L C ) 、液相色谱质谱联用技术( L C M S ) 、毛细管电泳( C E ) 和毛细管区带电泳( C Z E ) 、免疫分析( 认) 、传感器技术( T r a n s d u c e rT e c h n o l o g y )
15、等。( 一) 薄层色谱法( T h i n l a y e rc h r o m a t o g r a p h y )以固体吸附剂( 如硅胶、氧化铝等) 为载体，水为固定相溶剂，流动相一般为有机溶剂所组合的分配型色谱分离分析方法。其不需要特殊设备，方法简单、快速、直观，可同时分析多个样品，但灵敏度较低，近年来使用较少，现经常与其他技术联用，对样品被分离的一种或多种成分进行定性定量分析。S w e t h aV P 纠等在不同的薄层色谱板上利用不同的溶剂对氨基甲酸酯类农药进行检测分离，获得了较高的回收率。缺点是该方法不如液相色谱法灵敏度高。( 二) 液相色谱法( H P L C )是农药残留检
16、测中不可缺少的重要方法，具有分离速度快、检测效率高、重复性好的特点，主要分离检测极性强、相对分子质量大的离子型农药，尤其对不易气化或受热易分解的农药更能显示出其突出优点。F a r a h a n iG H 1 3 1 等对土壤中的呋喃丹经高效液相检测回收率，效果较好。( 三) 气相色谱法( G C )G C 具有操作简便、分析速度快、分离效能高、灵敏度高、应用范围广及可以同时分离分析多种组分等优点，广泛的用于相对分子量较小，易气化，气化后又不发生分解的农药残留的分析，如有机氯、有机磷、拟除虫菊酯等。K u m a r iB 等畔1 采用G C 测定了食物中氨基甲酸酯类农药的残留。该方法的缺点是对待分析组分有限制条件。( 四) 气相色谱质谱联用法( c c M S )该方法既具有气相色谱高分离效能，又具有质谱准确鉴定化合物结构的特点，可达到同时定性定量的检测目的。用于农药残留量检测工作，特别是应用于农药代谢物
