《野油菜黄单胞菌野油菜致病变种中一个与EPS合成有关的新基因的鉴定》由会员分享，可在线阅读，更多相关《野油菜黄单胞菌野油菜致病变种中一个与EPS合成有关的新基因的鉴定（7页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、!“ 卷 # 期 $%6 对野油菜黄单胞菌野油菜致病变种 （3+$/“(4($+A1BC （DE-0.8) 8FG.-D0HI H:D-01)8I-J BC） 分析突变体的 4:61)&;6 插入位点， 发现其中一株编号为 !6!K%“ 的突变体的插入位点位于 300 5%2 菌株的基因组编号为 LB+BC 和 ?(ODE-0: 杂交的方法对突变体进行了验证。;+=? 产量与野生型菌株 5%2 相比， 降低 +=? 产量， 表明 300 ;+=? 的生物合成有关。关键词野油菜黄单胞菌野油菜致病变种，胞外多糖，;+=?） 又称黄原胶 （L8:DE8: QO.） ， 具有独特的流变性、 良好的水溶
2、性、 对各种盐类良好的相容性以及对酸、 碱、 热稳定， 在石油、 食品、 纺织 等多个行业用作增稠剂、 乳化剂、 稳定剂等$， 6 对 300 野生型菌株 5%2 进行大规模诱变， 分离到一批 =? 合成减 少 （=?1） 的突变体。采用 4;A1BC 分析转座子插 入位 点， 发 现 一 株 编 号 为 !6!K%“ 的 突 变 体 的4:61)&;6 插 在 300 5%2 菌 株 的 基 因 组 编 号 为LB4BB+、卡那霉素 （?=） .“;、 氨苄青霉素 （2=A） 、壮观霉素 （*A:） .+“;、 利福平 （“BC） .+“;、 庆大霉素 （D=） .“;。!“#!“ 的转座子
3、诱变 将 07.!2#“5!34.()2.、$+,、(0$G 公司， 其它生化试剂购自上海生工公司。 构建用于同源双交换的重组质粒。以 ?5、 ?（?5、 ? 分别加上 /01#和 %2“#酶切位点） 为引物， 质粒 A2#“5!34.()2. 为模板，以 %.T预变性 , =B4， %.T变性 5 =B4， .+T复性 -+ U， =?A“ 9%3+8B。蛋白质分子量和等电点的预测在 .+/： 001112 %C/(-D28B70374E,4GHIJIK。表 !本工作所用的引物()*+, !-./0,.1 21,3 /4 56/1 78.9LB46%BLB46%B -%MN%O;$= $=;
4、OO $;$OO;O$=$=$=O=;O;$= =O=;$; =;$;O=O;=O$;$S8685878N- +8 JIT,/ B%748K， 38O; $= $; =O O$; =O$ ;$ ;$ =$= OO$;O; $= $= ;OO =$ ;O $O$ ;=; ;=$ O;$S8685878N- +8 T!J,/ B%748O; $= =O= ;$; $O$ O$ ;O= $;$ OO; ;=$;O; $= $=O $;O =;O $O$ ;=$ =$ ; ;OOS8685878N- +8 JJH,/ B%748O; $= $; =OO =$ $;= $O; ;$ =$; $O;O;
5、$= ;$ O= OO; $O= = ;=$ O$ O$;S8685878N- +8 RKRR,/ B%748-G$; 平板筛选菌落形态变小变干燥的菌落， 为避免选择到同一插入位点的突变体， 在每次诱变时只选择一株突变体， 共获得一批YL; 序列组成一个编号为 OHJK 的 PV， 因此，YL!“#$ 基因的特征PVHJK 位于 !“ 野生型菌株 !“# 基因组#T!JJ!,/ #TJ!RJ,/ 的区域， 全长 !II,/， 编码一 个 IT# 个氨基酸残基组成的蛋白质， 蛋白质的预测分子量为 HRA“)*， 等电点为 JAT。同源比较发现，PVHJK 演绎的编码产物与 $%=!JT 通过三亲
6、本接合导入 !“# 的细胞， 由于/:;=!JT 的 ,$- 基因上下游序列与染色体 #$%? 54;A 87CB7478? !“#$、 %)* 5A !“$ 78随机取 D 株 %9;459;? ? 9N7 A7=79;? 6B95983,H* :7549;?8 P7:7 !7:?:67A P;9N 9?95= FG# ? P;=AO9Q!7 89:5; %22D 5AD ;8?=5978 ? 9N7 A7=79;? 6B959 %R7=Q，) 5A )%58 !:;67:8，5A +2 4Q4=78 ? A759B:59;? 59 8;? 59 +S ?: + 6;3 ,H* !:?AB4
7、98 P7:7 7=749:?O!N?:787A ; .KJU 5A7!7A79 ;8?=5978 ? P5TW7 A7=79;? 6B959 % I=?9 55=Q8;8 ? 9N7 A7=79;? 6B95983$?95= FG# ? P;=AO9Q!7 89:5; %22D 5A D ;8?=5978 ? 9N7 A7=79;? 6B959%A 7=749:?!N?:787A ; .K2U 587:7A 9? GQ=? 676I:57，5A NQI:;A;X7A P;9N+1,O=5OI7=7A %“A7!7A79 ;8?=5978 ?!“#$ 7 A7=79;? 6B959 %5 ?A
8、959 =B ;8?: (?9C5E ()* +,!“#$7F?9C5E G-*9 H8;8 E5689:8E H5:I !“#J!?E $%8? C5L:M;8 H8;8 88 %N0O ?6?;=98 687 +I8 ;88?98E%N?6C8: B;=C ()*+,!“#$ :?58E :I8 8 “()7R7#G-*$%P8;；% ()*234； SN()*+,!“#$!“#突变体的生长特征 突变体 !“#$ 在 -./* 平板形成的菌落较 !001小而干燥， 但在 -./T 培养基的生长繁殖特征却与!001 基本相同 （见图 =H:I : !“#$ ?EH5EK:A(8 9:;?5
9、!001 5 ;5: 9:;?5 !“#$； T7)FV B;=C H5EK:A(8 9:;?5 !001将 !“#$()*234、 !“#$()*+,!“#$、 !001()*234三种菌株分别接种在含 SO葡萄糖的 -./* 培养基平板上， S!X生长 1 1 1 1 1 1 1 1 1 G“$： 7=? I 7=; = J*+A% 2，FH4GH D X，L$ =，G*AA- H ;， G = 0+ )#/ =-“7#A !/ 56%#0$% 8%$9. ;0.，011L， !#：JJ5KJL F#“)A-9 H，GA Q#)-A#IC-A: P#,(#$/ J,%*%，T*8 R-A9
10、：=-$% F7A0+ )#/Q0.， 0123，“0.，011L， !“#： LJ0 4 LJ5*+,-./0/12./3- 2-+ 453-/-6 30 2 738,5 9,-, *-8358,+ /- :;?-.,/ 30 !“#$%TS HTS O-,+IH3，#,% # ,(“)*A - V6FI%*.C3 ,-*$ +*,*，?)IJ，3 M=D125 #A)-A&,+ #, &,C#.C ?)IJ +*,*， #,% C* V6F :&*$% - C* “(C#,C 8#! A*!C-A*%/ M* .-“)&,*% %#C# !-8*% C#C ?)IJ +*,* &,-$*%
11、 &, V6F )&-!:,C*!&! &, (%/F,? G3E+()*+,“-“*). %)-/0.+&$. 7/ %)-/0.+&$.，*YCA#.*$($#A 7-$:!#.#A&%*，?)IJ +*,*&! 8-A9 8#! !(77-AC*% ): # 9*: +A#,C A-“ T#C&-,#$ T#C(A#$ F.&*,.* G-(,%#C&-, - =&,# （T-/LK0LKK0K） /!=-AA*!7-,%&,+ #(C-A/ M*$：D5I220ILJLL53K； G#Y： D5I220ILJL2D2L/2555 期陆光涛等： 野油菜黄单胞菌野油菜致病变种中一个与 V6F 合成有关的新基因的鉴定
