《骨髓瘤冻融物致敏树突细胞介导的特异性抗瘤免疫的研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《骨髓瘤冻融物致敏树突细胞介导的特异性抗瘤免疫的研究（35页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、上海第二医科大学硕士学位论文骨髓瘤冻融物致敏树突细胞介导的特异性抗瘤免疫的研究姓名：邓晓辉申请学位级别：硕士专业：内科学（血液）指导教师：梁辉2003.5.23嚣髓癌冻融壤致敏树突缨照会导豹特异性抗瘸兔疫的研究( 中文详细搞墼)背景：多发性骨髓瘤( m u l t i p l em y e l o m a ，M M ) 是浆细胞恶性增殖悭疾病。应用传统化疗，完全缓解率不到5 。近来用大剂量化疗加于细胞移植支持，虽可延长M M 惠者的无病生存期，但结果仍凳法令入满意。太多数M M 患者，甚至是得到完全缓解的患者，仍会出现疾病的复发，从而导致治疗失败。为此，藜熬浚疗方法有黪撵索。近年来耱突蘩魏(
2、d e n d r i t i cc e l l ，轴C ) 嚣莫童麓学特性和在熊疫应答中所起的重要作用，引起了人们的重视。D C 是一类强有力的抗原遂壁缎胞，在娥动瓿俸免疫凝斑中起罄至笑重要的佟燃，它可有力姥裁激T 、B 细胞发生免痰反应，从而激发特异性羽抗肿瘤效应。已有研究表明，应用肿瘸抗原体外致敏D C ，少量嘲输即可诱导机体产生极强的抗肿瘤免疫。本实验将M M 。患者静髓瘸细臆冻融物在薅井与盘体束成熟搴孽突细胞共弼培养，研究其熊否激发自体特异性T 细胞免疫以达到抗骨髓瘤效应。爱的；逶过魄较不露缎蕤嚣予( G M - C S F 、| L 罐、T N F ，8 ) 对D e 艇长靛影响，
3、研究M M 患蒲肿瘤冻融物致敏的D e 诱导T 细胞对不同靶细胞( 患者骨髓瘸绷胞、细腿株K 5 馥) 产擞的缨臆毒作用。方法；1 D C 的培养：取M M 患者骨髓分离单个核细臆( m o n o n u c l e a rc e l l s ，M N c ) ，经免疫磁珠阳性分选出C D 3 4 + 细胞，谶行D C 培养。在含1 0 F B S ，G M C S F ( 终浓度1 0 0 0 u m 1 ) ，I L 4 ( 终浓瘦1 0 0 0 u m 1 ) 匏R P M l l 6 4 0 培葬液中培养。辩6 天，加入T N F - a ( 1 0 n g m 1 ) ，2 4 小
4、时后，收集悬浮细胞和辍微贴壁缯爨，透露形态学、受疫表型瓣梭溺。2 。学潍瘘缀庭豹蝰葵：取患考费懿寒源的M N C ，加入I L 2 ，I L 3 ，I L 6 ，T N F ( 终浓度均为2 0 0 u m 1 ) 培养，第6 天收集部分轻微贴壁细胞，并反复冻融制成冻融物致敏D C 。其余细胞继续培养6 7 天，以作为靶细胞骨髓瘤细胞。3 抽取M M 患者外周血分离得到M N C ，取非贴壁细胞作为自体T 淋巴细胞的来源( 经检测该方法获得的C D 3 + T淋巴细胞可达9 0 以上) 。以M T T 法检测T 淋巴细胞对不同靶细胞的杀伤力。三种不同的效应细胞( T 细胞+ I L 2 、T
5、细胞+ I L 2 + D C 、T 细胞+ I L 2 + M M 患者肿瘤冻融物致敏的D C ) ，分别与靶细胞( 患者M M 细胞、K 5 6 2 细胞) 混合，测各组O D 。值，以此评估D C 介导的特异性T 细胞抗肿瘤作用。结果：1 C D 3 4 + 细胞在G M C S F 和I L - 4 存在的情况下，培养至第7 天，细胞群体具有典型的D C 形态，表达所有D C 表型：C D l a 、H L A D R 、C D S 0 、C D 5 4 。加入T N F d2 4 小时后，C D l a 下调，而H L A D R 、C D S 0 、C D 5 4 则上调。2 用M
6、 T T 法检测各组效应细胞对靶细胞的杀伤率。效靶比为5 ：1 ，1 0 ：1 ，2 0 ：l时：不同效应细胞对M M 细胞的杀伤率分别为：T + I L 2 组：5 4 2 4 ，5 7 0 9 5 9 7 + 0 7 ；T + I L - 2 + D C 组：6 4 5 0 6 6 6 + 2 3 6 7 + 0 6 ；T + I L - 2+ M M 患者肿瘤冻融物致敏的D C 组：1 6 5 6 I ，2 2 6 5 7 ，2 8 3 5 7 。不同效应细胞对K 5 6 2 细胞的杀伤率分别为：T + 儿2 组：3 1 1 4 ，3 7 + 1 0 ，3 9 1 6 ；T + I L
7、2 + D C 组：4 0 + 2 1 ，4 9 1 8 ，4 3 + 2 1 ；T + 几一2 + M M 患者肿瘤冻融物致敏的D C 组：5 3 1 8 ，5 7 2 5 ，5 4 + 2 O 。我们发现，杀伤率最大的是M M 患者肿瘤冻融物致敏的D C 诱导激活的自体T 细胞对患者骨髓瘤细胞的杀伤，且杀伤率随效靶比的增高而增强；而未经肿瘤抗原致敏的D C诱导的细胞毒效应较小；M M 患者T 细胞对K 5 6 2 细胞仅轻度杀伤。经统计。结果有显著性差异( P ( 0 0 5 ) 。结论：本研究结果显示，联合应用不同的细胞因子对D C 的生长有着不同的影响。G M C S F 和I L 4
8、 可使C D 3 4 + 细胞向未成熟D C 分化，而T N F a 则可加速D C 的成熟；多发性骨髓瘤患者肿瘤冻融物致敏的D C 能有效地诱导自身T 细胞对患者M M 细胞的特异性杀伤。关键词树突细胞多发性骨髓瘤肿瘤冻融物抗肿瘤效应4T h er e s e a r c ho fs p e c i f i ca n t i t u m ri m m u n i t yn m d i a t e db ym y e i o m al y s a t e s - p u I s e dd e n d r i t i cC O I1 S( A b s t r a c t ；nd a t a il
9、 )B a c k g r o u n d s ：M u l t i p l em y e l o m ai sam a l i g e n e n tm 弦l o m ac o l o n yd i s e a s eW i t hc o n v e n t i o n a lc h e m o t h e r a p y , c o m p l e t er e m i s s i o nr a t e sh a v en o te x c e e d e d5 R e c e n t l y , h i 曲* d o s ec h e m o t h e r a p yf o l l o
10、 w e db ys t e mc e l lt r a n s p l a n m t i o ns u p p o r tp r o l o n g e dd i s e a s e - f r e es u r v i v a li nM M B u tt h er e s u l tW a sn o ts a t i s f y i n g M o s tM Mp a t i e n t s ，e v e nc o m p l e t er e m i s s i o np a t i e m s ，w o u l dr e l a p s e d T h er e l a p s e
11、r e m a i n st h ep r i m a r yc a u s eo ft r e a t m e n tf a i l u r e T h e r em u s tb es o m en e wt r e a t m e n t st oe l i t et h i sd i s e a s e I nr e c e n ty e a r s ，d e n d r i t i cc e l l ( D e ) a t t r a c t e dm o r ea t t e n t i o nf o ri t sb i o l o g i c a lc h a r a c t e
12、 ra n di t si m p o r t a n tr o l ei ni m m u n er e s p o n s e D e n d r i t i cc e l li sam o s tp o t e n ta n t i g e np r e s e n t i n gc e l l I tt a k e sak e yr o l ei ni n i t i a t i n gi m m u n er e a c t i o n D CC a ne f f e c t i v e l ys t i m u l a t eTa n dBc e l l st oa r i s e
13、i m m u n er e a c t i o n ，a c c o r d i n g l yi n s p i r es p e c i f i ca n t i - t u m o re f f e c t 。T h e r ew e r es t u d i e ss h o wt h a tt r a n s p o r t i n gD Cp u l s e dw i t ht u m o ra n t i g e ni nv i t r oc o u l di n d u c es t r o n ga n t i t u m o re f f e c t I no B rs
14、t u d y , w ec u l t u r e di m m a t u r ed e n d r i t i cc e l l sw i t hm y e l o m al y s a t e si nv i t r ot oe x p l o r eh o w 扛i n i t i a t es p e c i f i cTc e l l si m m u n er e a c t i o na n da c h i e v ea n t i - m y e l o m ar e s p o n s e O b j e c t i r e ：F i r s t ，t o c o m
15、p a r e t h e i n f l u e n c e o f d i f f e r e n t c y t o k i n e s ( G M - C S F 、I L 4 、T N F - 程) o ng e n e r a t i o no fD Cf r o mb o n em a r r o w S e c o n d 。t oe x p l o r et h ec y t o t o x i cr e s p o n s ei n d u c t i o n e db yD Cp u l s e dw i t hM Ml y s a t ea i m e da td i
16、f f e r e n t“4 ；。4 4 。4 “4 啪4 4 4 州科”4 “蜥4 槲”瓣潍4 。“嘲埘”“川。4 饼”9 4 。“。斟”“4 “。鼬9 。“”。”。“”4 4 “蹦“瞬5a n t i g e n ( M Mc e l l 、K 5 6 2c e l l )M e t h o d s ：1 D C Sg e n e r a t i o n ：C D 3 4 + c e l l sw e r eh i g h l yp u r i f i e db yM i n i M a c sh i g h - g r a d i e n tm a g n e t i cs e p a r a t i o ns y s t e mf r o mM N Ci s o l a t e df r o mM Mp
