《穿心莲内酯衍生物AL1抑制铜绿假单胞菌生物膜作用机理研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《穿心莲内酯衍生物AL1抑制铜绿假单胞菌生物膜作用机理研究（122页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、密级：中阉斜孥j i l 宪硒窥垡跪博士学位论文窒! 坠蓬凼酯堑生塑L ：! 控剑鱼堡堡皇照营生塑照佳旦狃理婴究作者姓名：呈莉指导教师：韭寞堑硒究旦虫国抖堂院邀生塑婴究逝塞福复副硒塞员虫垦型堂陵丝生塑鲤窒近学位类别：堡堂熊学科专业：生堑丝堂皇筮王生物堂培养单位：虫国型堂随丝生塑受究匮2 0 1 2 年0 5 月P s e u d o m o n a sa e r u g i n o s aB yL iM aAD i s s e r t a t i o nS u b m i t t e dt oG r a d u a t eU n i v e r s i t yo fC h i n e s eA
2、 c a d e m yo fS c i e n c e sI np a r t i a lf u l f i l l m e n to ft h er e q u i r e m e n tF o rt h ed e g r e eo fD o c t o ro fP h i l o s o p h yI n s t i t u t eo fM i c r o b i o l o g y , C h i n e s eA c a d e m yo fS c i e n c e sM a y , 2 0 1 2目录中文摘要IA b s t r a c t I I缩略用语第一章综述11 1 铜绿
3、假单胞菌简介及其危害11 2 铜绿假单胞菌致病因子研究进展21 ，2 1 绿脓菌素21 2 2 鼠李糖脂21 2 3 蛋白酶41 2 4 鞭毛及菌毛51 2 5 三型分泌系统91 3 铜绿假单胞菌多重耐约的原因1 21 3 1 产生抗生素修饰酶一1 31 - 3 2 抗菌药物靶点的改变1 31 3 3 主动外排系统，131 3 4 生物膜一1 41 4 铜绿假单胞菌的治疗，2 71 5 基于高通量筛选技术的互动模型3 01 6 穿心莲内酯衍生物A L 1 3 l1 6 1 穿心莲内酯研究进展3 l1 6 2A L 1 研究进展一3 21 7 本研究的目的和意义3 4第二章材料与方法3 62 1
4、 实验材料3 62 1 1 细菌及生长3 62 1 2 试剂3 92 1 3 仪器3 92 2 实验方法一4 02 ，2 1 铜绿假单胞菌P A 0 1 基因组D N A 的提取4 02 2 2 大肠杆菌感受态细胞的制备一4 l2 2 3 铜绿假单胞菌感受态细胞的快速制备一4 l2 2 4 电转化4 l2 2 5 质粒D N A 提取4 22 2 6 铜绿假单胞菌生物膜的检测4 32 2 7 细菌泳动和丛动性实验4 42 2 8 分子对接预测A L 1 和L a s R 的相互作用4 52 2 9 A L 1 对L a s 群体感应系统的影响一4 62 2 1 0 群体感应相关基因转录情况的检
5、测及生长曲线的测定4 82 2 1 1A L 1 对多糖P s l 的影响4 92 2 1 2 表面等离子共振技术研究A L 1 与E x o S 的相互作用5 22 2 1 3W e s t e r n - b l o t 检测A L 1 作用下E x o S 的变化情况5 42 2 1 4R N A 的提取及R T - P C R 5 52 2 1 5 统计分析5 8第三章实验结果5 93 1A L 1 对铜绿假单胞菌生物膜的作用5 93 1 1 结晶紫染色法5 93 1 2 孔板微流控技术6 03 2 A L 1 对鞭毛介导的泳动性及丛动性的影响6 l3 3D o c k i n g ，
6、6 33 4A L 1 对L a s R 的作用一6 53 5 群体感应相关基因表达水平的检测6 63 6 A L 1 对铜绿假单胞菌生长的影响6 73 7A L 1 对P s l 的影响6 83 8 转录水平及翻译水平上检测A L l 对瑚，的作用6 93 9S P R 检测A L 1 与E x o S 的相互作用7 l3 1 0W e s t e r nb l o t 检测A L - 1 对E x o S 分泌量的影响7 23 1 1R T - P C R 检测A L 1 作用下相关基因的转录水平7 33 1 2A L 1 和常用抗生素的互动作用7 6第四章总结与展望7 84 1 总结7
7、84 2 主要创新点8 34 3 展望8 3参考文献8 4致谢1 0 7攻读学位期问发表的学术论文1 0 8附勇t 1 0 9图目录图1 铜绿假单胞菌的生长特征及透射电子显微镜图l图2 嗪吩合成示意图图3 鼠李糖脂的合成图4 铜绿假单胞菌鼠李糖脂合成调控图图5 铜绿假单胞菌分泌的毒性因子对上皮细胞的炎症反应5图6 铜绿假单胞菌鞭毛合成在C F 患者肺部的抑制作用，6图7 铜绿假单胞菌表面毒力因子示意图8图8 三型分泌系统概况图9图9 效应蛋白E x o S 、E x o T 、E x o U 和E x o Y 结构域l1图1 0 E x o S 和E x o U 在宿主细胞中的定位1 l图1
8、1 环境信号及调控基因对T 3 S S 的调控1 2图1 2 铜绿假单胞菌生物膜扫描电镜图15图13 铜绿假单胞菌群体感应系统1 6圈1 4 生物膜形成步骤图2 1图1 5 藻酸盐、P s i 和P e l 操纵子2 2图1 6 藻酸盐和P s i 多糖的结构图2 3图1 7 三种不同的方法观察铜绿假单胞菌多糖2 3图1 8 P s l 的合成过程2 4图1 9 互动药物筛选流程3 1图2 0 穿心莲内酯及A L 1 结构图3 3图2 1 A L - I 对P A O I 生物膜、E P S 及绿脓菌素的影响3 4图2 2 B i o F l u x 生物流孔板4 4图2 3 L a s R L B D 结构一4 6图2 4 3 - o x o C 1 2 - H S L 和L a s R 配基结合区4 6图2 5 依赖于A H L 信号分子的艮s 系统元件示意图4 7圈2 6 测试流程图4 8图2 7 S P R 技术的主要构成部分5 3图2 8 S P R 检测系统5 3
