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1、北京雷根生物技术有限公司 4- 香豆酸辅酶A 连接酶 (4CL) 检测试剂盒 (香豆酸微板法 ) 简介：4- 香豆酸辅酶A 连接酶是催化桂皮酸形成咖啡酸、香豆酸的酶。该酶多存在于高等植物、酵母、菌类可溶性部分物质，属于细胞木质素合成途径中间的关键酶，研究该酶可以探讨多种生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理，为减少水果石细胞含量提高其品质提供依据。Leagene 4-香豆酸辅酶 A连接酶 (4CL) 检测试剂盒 (香豆酸微板法)检测原理是以香豆酸作为底物，在酶促反应的最适条件下采用每隔一定时间测定产物生成量的方法，于酶标仪检测吸光度，以吸光度变化所需酶量进行计算。该试剂盒主要用于植物组织的裂
2、解液或匀浆液、 血清等样品中内源性的4- 香豆酸辅酶A 连接酶活性， 尤其适用于检测水果中4- 香豆酸辅酶 A 连接酶活性。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。组成：自备材料：1、 蒸馏水2、 研钵或匀浆器3、 离心管或试管4、 冷冻离心机5、 水浴锅或恒温箱6、 酶标板7、 酶标仪操作步骤(仅供参考 )：1、 准备样品： 植物样品：取植物组织或水果中层果肉，冰浴情况下充分捣碎研磨或匀浆，加入 4CL Lysis buffer继续研磨或匀浆，离心，留取上清液冻存，用于4- 香豆酸辅酶A 连接酶的检测。编号名称TE0411 60T Storage 试剂 (A): 4CL Lysi
3、s buffer125ml 4 避光试剂 (B): 4CL Assay buffer 1.5ml 4 避光试剂 (C): CoA-SH Solution 10ml -20 使用说明书1 份北京雷根生物技术有限公司 血浆、血清和尿液样品：血浆、 血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，冻存，用于4- 香豆酸辅酶A 连接酶的检测。 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，离心，取上清液，冻存，用于4- 香豆酸辅酶A 连接酶的检测。 高活性样品：如果样品中含有较高活性的4- 香豆酸辅酶A 连接酶，可以使用蒸馏水或C4H Lysis buffer稀释进行恰当的稀释
4、。2、 加样： 按照下表设置对照孔、测定孔， 取出 CoA-SH Solution等试剂恢复至室温溶解，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的4CL 活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测最好能设置平行孔，求平均值。3、 4CL 检测：立即以酶标仪，以对照孔为对照，测定测定孔的吸光度(A测定 0)。准确孵育后，立即加入终止液终止反应(备选方案 )，以酶标仪，以对照孔为对照，测定测定孔的吸光度 (A测定 1)。注意：加入终止液终止反应不是必须步骤，可准确孵育后直接以酶标仪，以对照孔为对照，测定测定孔的吸光度(A测定 1)。计算：4CL 活性单位的定义：在该
5、实验条件下，每1min吸光度变化所需酶量为一个活性单位。组织样本4CL(U)=(A测定 1-A测定 0) VT/(W VS 0.01t) 式中：A测定 1= 孵育 5min后测定孔的吸光度值A测定 0= 加入 CoA-SH Solution后立即测定的测定孔吸光度值W= 组织样本的重量(g) VT= 提取酶液的总体积(ml) VS= 测定时所用酶液体积(ml) 液体样本4CL(U)=(A测定 1-A测定 0)/( 0.01t) 式中：A测定 1= 孵育 5min后测定孔的吸光度值A测定 0= 加入 CoA-SH Solution后立即测定的测定孔吸光度值t= 反应时间加入物 ( l) 对照孔测
6、定孔4CL 对照17.5 待测样品35 35 4CL Assay buffer 17.5 CoA-SH Solution 157.5 157.5 北京雷根生物技术有限公司 注意事项：1、 CoA-SH Solution需避免反复冻融，以免检测效率下降，可分装成小份保存。2、 4CL 酶液提取时，注意低温操作，防止酶活性，亦可-20 保存。3、 4CL 终止液具有一定腐蚀性，请小心操作。4、 如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定。每次检测指标不宜过多，否则操作时间不一，有可能导致样本间的差异。5、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。有效期：6 个月有效。相关：编号名称CC0007 磷酸缓冲盐溶液(10PBS, 无钙镁 ) CM0004 LB 培养基DC0032 Masson 三色染色液DF0135 多聚甲醛溶液(4% PFA) NR0001 DEPC处理水 (0.1%) PS0013 RIPA裂解液 (强 ) TC1167 尿素 (Urea)检测试剂盒 (脲酶波氏比色法)
