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1、FACSCalibur 流式细胞仪操作维护规程1. 目的规范流式细胞仪 FACSCalibur 操作维护规程，正确使用和维护仪器，保证检测工作顺利进行和设备安全。2. 适用范围适用流式细胞仪 FACSCalibur 的使用操作。3. 职责3.1 操作人员按照本规程操作仪器，对仪器进行正常维护，并作使用记录。3.2 保管人负责监督仪器操作是否符合规程，并对仪器进行定期维护和保养。3.3 仪器管理人以及科室负责人负责仪器综合管理。4. 操作程序4.1 安全操作注意事项和特别提示：4.1.1 该仪器必须有专人保管，使用前需通读仪器说明书。4.1.2严格遵守操作规程，如仪器出现故障，应马上停止使用，并
2、立即向保管人、 仪器管理人以及科室负责人报告，严格按照单位有关制度实施，不得擅自 ?修理? ，查明原因，处理后仪器保管人应及时做好故障情况及维修记录。4.2 设备每日开机程序：4.2.1 开启稳压电源、变压器，打开流式细胞仪电源。4.2.2 开启其它周边配备电源，如打印机，开启计算机。4.2.3确认鞘液筒有八分满，废液桶近似空的，桶盖是旋紧的；所有管线及管路装置连接通畅，无扭曲、折叠。4.2.4 将气压阀方向调在加压位置， 用手感觉鞘液桶在慢慢鼓起。4.2.5 排除液流过滤器中的气泡。4.2.6 等待机器预热 5-10分钟后可开始实验。4.3 设备质控程序：4.3.1 试剂准备：4.3.1.1
3、取试剂盒中的 Unlabeled 试剂，充分混匀，加一滴到装有 1ml 鞘液的试管中，混匀，标记为unlabeled 。4.3.1.2取 FITC、PE 、PerCP 、Unlabeled 试剂 ，充分混匀，各加一滴到第二支装有3ml 鞘液的试管中，混匀，标记为mixed。4.3.2 上机操作：4.3.2.1按电脑桌面的 FacsComp 进入质控程序。4.3.2.2在出现的? Sign in ?窗口中输入操作者姓名、单位、领导姓名等相关信息，计算机将保存这些信息；单击?Accept?。4.3.2.3在试验选项中，选择 Lyse/No-Wash(LNW)：免洗程序。4.3.2.4在 Calib
4、rite Beads Lot IDs 中, 根据每种颜色的 beads所对应的 Lot Ids ， 输入编号，此编号在 Calibrite beads 试剂盒内，打开新买的试剂盒，里面有一张橙色胶纸，取出贴在试剂盒的背面，标题是 Calibrite beads? 3 Batch NO, 选择 FACS Flow Sheath 下的编号 ( 右侧的编号 ) 。APC Lot ID( 此栏不能空，即使是三色校正试剂) 。4.3.2.5在 右 侧 的 保 存 选 项 中 文 件 会 自 动 保 存 , 路 径FacstationBD fileFACSCompDDMMYY, 还可以单击? Locati
5、on ?改变文件保存路径。4.3.2.6按 Run开始上样，在仪器面板上按Run Hi。高速运行，速度不能低于 400 个细胞/ 秒，速度过低可在管中加一滴微球。4.3.2.7上第一管后，按Start键，仪器自动调节PMT, 完成后窗口底部出现?PMT set Successfully? , 暂停 5 秒后自动进入下一个调节窗口。注意：速度不能低于400 个细胞/ 秒，速度过低可在管中加一滴微球。4.3.2.8上第二管，单击 Start ，仪器开始自动调节补偿并进行灵敏度测试。4.3.2.9完成后仪器会给出提示，最后软件给出一个Summary Report 。检查报告中的 ? Result ?
6、 是否都 PASS ，如果有的没有 PASS ，检测原因。是否试剂过期， 两个试管中的液体和鞘液桶中的是否相同, 仪器做月维护 ,完成后再重新做 FACSComp 仪器指控。4.3.2.10打印报告，退出 FACScomp 软件。4.4 样本检测程序4.4.1.样本准备：4.4.1.1取 TruCount Tube ，编号。4.4.1.2用反向加样法在 Tube中加入 50ul 充分混匀的抗凝全血，注意血不要碰到试管底部的微球（Beads） 。4.4.1.3取 20ul 荧光抗体加入到管中，注意：不要碰到血。涡旋混匀，室温避光放置15min。4.4.1.4取出加入 450ul 1 FACS 溶
7、血素，充分混匀，避光放置 15min。4.4.1.524小时内上机用 MultiSET 软件获取细胞进行检测，上机前应充分混匀。4.4.2.上机操作 : 4.4.2.1执行 FACSCalibur 开机程序，进入 MultiTEST 软件。4.4.2.2在出现的? Sign in ?窗口中输入操作者姓名、单位、领导姓名等相关信息，计算机将保存这些信息，单击?Accept?。4.4.2.3进入? Set up ?窗口：在?Data Source ?对话框中选择? From Cytometer: Acquisition and Analysis ?，在? Entry Level File Name
8、 Prefix?中选择?Sample name ?；在? Automatic Saving Options ?中选择?Data File ?、 ? Laboratory Report ?、 ? Physician Report ?， 软件会自动生成一个文件， 文件的默认路径 FacstationBD file Multiset DDMMYY 文件夹；在? View Reports ?中选择?Until NextButton Pressed ?。4.4.2.4单击? Accept?，进入? FACSComp?窗口，单击?Skip FACSComp?。4.4.2.5进入 ? Test Prefs
9、?窗口， 在 ? Physician Report Choices?中，这一项可以是全选，运行了一种试剂，会自动报告相应的结果。在窗口 的最 下方点 ? Lot Ids ?，跳 出一 窗口 , 点此窗 口左 侧的? Absolute Count Beads ? ,在此窗口右侧输入TruCount tube的批号和 Beads总数（标在包装袋上），单击? Save?。单击? Accept?。4.4.2.6进入? Samples?窗口，在表格中输入相应的Patient Name 、ID、Case Number ，在 Panel 中选择 CD4/8/3 Truc. 4.4.2.7在窗口最上方的?Cy
10、tometer ?的下拉菜单中，单击? Instrument Setting ?，在出现的新对话框中单击?Open ?；打开此路径下 FacstationBD file Instrument Setting Calibur.LNW文件。调用仪器各个参数的条件，选好后单击?Set?， ? Done ? . 4.4.2.8单击? Run Tests?，上样，调整 SSC电压和阈值后，单击? Acquire ?。4.4.2.9获取 完 成后， 可 以人 工调 整各 个 门的 大 小 ，单 击? Continue ?；打印? Phys Report ?。4.4.2.10继续下一个实验，或单击?Quit
11、 ?， ? Don t Save?，退出 MultiTest软件。4.5 每日关机程序4.5.1 将样品支撑架置于旁位，用2ml10% 漂白剂（有效氯浓度0.5%）作样品，使外管吸入1-2ml. 4.5.2 将样品支撑架置于中位，以 HI RUN 5-10 分钟，使内管吸入约 1ml. 4.5.3 将样品换成蒸馏水重复步骤4.5.1 和 4.5.2 。注意：最后要剩余约 1ml 蒸馏水浸泡进样针，防止结晶形成。4.5.4 选择 Standby 模式 5 分钟后可关掉主机 . 4.5.4 退出所有应用软件，关闭电脑，关闭稳压器和变压器。4.5.5 将流式细胞仪的压力阀置于减压状态。5.FACSC
12、alibur 清洁和维护5.1. 每日维护：实验结束后，请于关机前清洁加样针的外管和内管，防止加样针堵塞或有染料残留。清洁方法同每日关机程序。5.2 每月维护：流式细胞仪使用一段时间后，在鞘液管路、废液管路和流动池中会有残留的碎片、污染物等，因此，需要定期清洗管路，要求至少每个月做一次。5.2.1 在仪器减压后，取下鞘液筒，倒空。如有必要，应清洗鞘液筒。5.2.2 将鞘液滤器短路，使鞘液不流经滤器，直接沿鞘液管路进入流动池。5.2.3 鞘液筒中倒入 2L 浓度为 0.5-1%稀释漂白剂（注意不能使用原浓度）。5.2.4 上样管中加入 4ml 浓度为 0.5-1%稀释漂白剂。5.2.5 流速选择
13、 HI 档，RUN 运行 20-30 分钟。5.2.6 鞘液筒用蒸馏水清洗干净，再加入蒸馏水2L。5.2.7 取下有漂白剂的上样管，换上有4ml 蒸馏水的上样管。5.2.8 流速选择 HI 档，RUN 运行 20-30 分钟。5.2.9 鞘液筒中换成鞘液，重新安装好鞘液滤器管路。5.2.10流动池 PRIME两遍，PRIME 结束后，仪器自动回复到STANDBY 状态。5.2.11上样管中加入蒸馏水， RUN 运行 5 分钟。5.2.12仪器进入 STANDBY 状态，可以进行样本检测。5.3 定期维护5.3.1 更换鞘液过滤器如果鞘液污染将会影响样品检测结果时，在技术支持指导下或参照用户手册的有关内容自行更换5.3.2空气滤网的清洁：空气滤网位于鞘液筒上方，可以用吸尘器或水洗的办法清洁。空气滤网需要定期检查，发现滤网脏了，就需要清洗了。5.3.2.1拉出抽屉后取下空气滤网。5.3.2.2 清洁滤网，如果水洗处理，应等滤网完全干了以后，再进行安装。5.3.2.3装回滤网，将其慢慢推回原位。 安装时注意滤网的方向，气流由下往上通过。6. 支持性文件6.1 全国艾滋病检测技术规范(2009 年修订版 ) 6.2 FACSCalibur中文操作手册。
