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1、FACSCalibur 流式细胞仪操作维护规程1. 目的规范流式细胞仪 FACSCalibur 操作维护规程,正确使用和维护仪器,保证检测工作顺利进行和设备安全。2. 适用范围适用流式细胞仪 FACSCalibur 的使用操作。3. 职责3.1 操作人员按照本规程操作仪器,对仪器进行正常维护,并作使用记录。3.2 保管人负责监督仪器操作是否符合规程,并对仪器进行定期维护和保养。3.3 仪器管理人以及科室负责人负责仪器综合管理。4. 操作程序4.1 安全操作注意事项和特别提示:4.1.1 该仪器必须有专人保管,使用前需通读仪器说明书。4.1.2严格遵守操作规程,如仪器出现故障,应马上停止使用,并
2、立即向保管人、 仪器管理人以及科室负责人报告,严格按照单位有关制度实施,不得擅自 ?修理? ,查明原因,处理后仪器保管人应及时做好故障情况及维修记录。4.2 设备每日开机程序:4.2.1 开启稳压电源、变压器,打开流式细胞仪电源。4.2.2 开启其它周边配备电源,如打印机,开启计算机。4.2.3确认鞘液筒有八分满,废液桶近似空的,桶盖是旋紧的;所有管线及管路装置连接通畅,无扭曲、折叠。4.2.4 将气压阀方向调在加压位置, 用手感觉鞘液桶在慢慢鼓起。4.2.5 排除液流过滤器中的气泡。4.2.6 等待机器预热 5-10分钟后可开始实验。4.3 设备质控程序:4.3.1 试剂准备:4.3.1.1
3、取试剂盒中的 Unlabeled 试剂,充分混匀,加一滴到装有 1ml 鞘液的试管中,混匀,标记为unlabeled 。4.3.1.2取 FITC、PE 、PerCP 、Unlabeled 试剂 ,充分混匀,各加一滴到第二支装有3ml 鞘液的试管中,混匀,标记为mixed。4.3.2 上机操作:4.3.2.1按电脑桌面的 FacsComp 进入质控程序。4.3.2.2在出现的? Sign in ?窗口中输入操作者姓名、单位、领导姓名等相关信息,计算机将保存这些信息;单击?Accept?。4.3.2.3在试验选项中,选择 Lyse/No-Wash(LNW):免洗程序。4.3.2.4在 Calib
4、rite Beads Lot IDs 中, 根据每种颜色的 beads所对应的 Lot Ids , 输入编号,此编号在 Calibrite beads 试剂盒内,打开新买的试剂盒,里面有一张橙色胶纸,取出贴在试剂盒的背面,标题是 Calibrite beads? 3 Batch NO, 选择 FACS Flow Sheath 下的编号 ( 右侧的编号 ) 。APC Lot ID( 此栏不能空,即使是三色校正试剂) 。4.3.2.5在 右 侧 的 保 存 选 项 中 文 件 会 自 动 保 存 , 路 径FacstationBD fileFACSCompDDMMYY, 还可以单击? Locati
5、on ?改变文件保存路径。4.3.2.6按 Run开始上样,在仪器面板上按Run Hi。高速运行,速度不能低于 400 个细胞/ 秒,速度过低可在管中加一滴微球。4.3.2.7上第一管后,按Start键,仪器自动调节PMT, 完成后窗口底部出现?PMT set Successfully? , 暂停 5 秒后自动进入下一个调节窗口。注意:速度不能低于400 个细胞/ 秒,速度过低可在管中加一滴微球。4.3.2.8上第二管,单击 Start ,仪器开始自动调节补偿并进行灵敏度测试。4.3.2.9完成后仪器会给出提示,最后软件给出一个Summary Report 。检查报告中的 ? Result ?
6、 是否都 PASS ,如果有的没有 PASS ,检测原因。是否试剂过期, 两个试管中的液体和鞘液桶中的是否相同, 仪器做月维护 ,完成后再重新做 FACSComp 仪器指控。4.3.2.10打印报告,退出 FACScomp 软件。4.4 样本检测程序4.4.1.样本准备:4.4.1.1取 TruCount Tube ,编号。4.4.1.2用反向加样法在 Tube中加入 50ul 充分混匀的抗凝全血,注意血不要碰到试管底部的微球(Beads) 。4.4.1.3取 20ul 荧光抗体加入到管中,注意:不要碰到血。涡旋混匀,室温避光放置15min。4.4.1.4取出加入 450ul 1 FACS 溶
7、血素,充分混匀,避光放置 15min。4.4.1.524小时内上机用 MultiSET 软件获取细胞进行检测,上机前应充分混匀。4.4.2.上机操作 : 4.4.2.1执行 FACSCalibur 开机程序,进入 MultiTEST 软件。4.4.2.2在出现的? Sign in ?窗口中输入操作者姓名、单位、领导姓名等相关信息,计算机将保存这些信息,单击?Accept?。4.4.2.3进入? Set up ?窗口:在?Data Source ?对话框中选择? From Cytometer: Acquisition and Analysis ?,在? Entry Level File Name
8、 Prefix?中选择?Sample name ?;在? Automatic Saving Options ?中选择?Data File ?、 ? Laboratory Report ?、 ? Physician Report ?, 软件会自动生成一个文件, 文件的默认路径 FacstationBD file Multiset DDMMYY 文件夹;在? View Reports ?中选择?Until NextButton Pressed ?。4.4.2.4单击? Accept?,进入? FACSComp?窗口,单击?Skip FACSComp?。4.4.2.5进入 ? Test Prefs
9、?窗口, 在 ? Physician Report Choices?中,这一项可以是全选,运行了一种试剂,会自动报告相应的结果。在窗口 的最 下方点 ? Lot Ids ?,跳 出一 窗口 , 点此窗 口左 侧的? Absolute Count Beads ? ,在此窗口右侧输入TruCount tube的批号和 Beads总数(标在包装袋上),单击? Save?。单击? Accept?。4.4.2.6进入? Samples?窗口,在表格中输入相应的Patient Name 、ID、Case Number ,在 Panel 中选择 CD4/8/3 Truc. 4.4.2.7在窗口最上方的?Cy
10、tometer ?的下拉菜单中,单击? Instrument Setting ?,在出现的新对话框中单击?Open ?;打开此路径下 FacstationBD file Instrument Setting Calibur.LNW文件。调用仪器各个参数的条件,选好后单击?Set?, ? Done ? . 4.4.2.8单击? Run Tests?,上样,调整 SSC电压和阈值后,单击? Acquire ?。4.4.2.9获取 完 成后, 可 以人 工调 整各 个 门的 大 小 ,单 击? Continue ?;打印? Phys Report ?。4.4.2.10继续下一个实验,或单击?Quit
11、 ?, ? Don t Save?,退出 MultiTest软件。4.5 每日关机程序4.5.1 将样品支撑架置于旁位,用2ml10% 漂白剂(有效氯浓度0.5%)作样品,使外管吸入1-2ml. 4.5.2 将样品支撑架置于中位,以 HI RUN 5-10 分钟,使内管吸入约 1ml. 4.5.3 将样品换成蒸馏水重复步骤4.5.1 和 4.5.2 。注意:最后要剩余约 1ml 蒸馏水浸泡进样针,防止结晶形成。4.5.4 选择 Standby 模式 5 分钟后可关掉主机 . 4.5.4 退出所有应用软件,关闭电脑,关闭稳压器和变压器。4.5.5 将流式细胞仪的压力阀置于减压状态。5.FACSC
12、alibur 清洁和维护5.1. 每日维护:实验结束后,请于关机前清洁加样针的外管和内管,防止加样针堵塞或有染料残留。清洁方法同每日关机程序。5.2 每月维护:流式细胞仪使用一段时间后,在鞘液管路、废液管路和流动池中会有残留的碎片、污染物等,因此,需要定期清洗管路,要求至少每个月做一次。5.2.1 在仪器减压后,取下鞘液筒,倒空。如有必要,应清洗鞘液筒。5.2.2 将鞘液滤器短路,使鞘液不流经滤器,直接沿鞘液管路进入流动池。5.2.3 鞘液筒中倒入 2L 浓度为 0.5-1%稀释漂白剂(注意不能使用原浓度)。5.2.4 上样管中加入 4ml 浓度为 0.5-1%稀释漂白剂。5.2.5 流速选择
13、 HI 档,RUN 运行 20-30 分钟。5.2.6 鞘液筒用蒸馏水清洗干净,再加入蒸馏水2L。5.2.7 取下有漂白剂的上样管,换上有4ml 蒸馏水的上样管。5.2.8 流速选择 HI 档,RUN 运行 20-30 分钟。5.2.9 鞘液筒中换成鞘液,重新安装好鞘液滤器管路。5.2.10流动池 PRIME两遍,PRIME 结束后,仪器自动回复到STANDBY 状态。5.2.11上样管中加入蒸馏水, RUN 运行 5 分钟。5.2.12仪器进入 STANDBY 状态,可以进行样本检测。5.3 定期维护5.3.1 更换鞘液过滤器如果鞘液污染将会影响样品检测结果时,在技术支持指导下或参照用户手册的有关内容自行更换5.3.2空气滤网的清洁:空气滤网位于鞘液筒上方,可以用吸尘器或水洗的办法清洁。空气滤网需要定期检查,发现滤网脏了,就需要清洗了。5.3.2.1拉出抽屉后取下空气滤网。5.3.2.2 清洁滤网,如果水洗处理,应等滤网完全干了以后,再进行安装。5.3.2.3装回滤网,将其慢慢推回原位。 安装时注意滤网的方向,气流由下往上通过。6. 支持性文件6.1 全国艾滋病检测技术规范(2009 年修订版 ) 6.2 FACSCalibur中文操作手册。