《慢性束缚应激腹泻型肠易激综合征大鼠模型的改良与评价》由会员分享，可在线阅读，更多相关《慢性束缚应激腹泻型肠易激综合征大鼠模型的改良与评价（10页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、慢性束缚应激腹泻型肠易激综合征大鼠模型的改良与评价 周天然 张瑶 逯晓旭 夏炎 操红缨 谈博 广州中医药大学中西医结合基础研究中心 广州中医药大学基础医学院 广州中医药大学中药学院 摘 要： 【目的】对慢性束缚应激腹泻型肠易激综合征 (IBS-D) 的大鼠模型进行改良, 并建立客观的评价方法。【方法】将 30 只 SD 大鼠采用随机分层抽样方法分为对照组、模型 1 h 组、模型 2 h 组, 每组 10 只, 雌雄各半。模型 1 h 组、模型2 h 组分别每日束缚 1 h 和 2 h, 持续造模 14 d。造模开始后第 7、14、21、28天, 观察各组大鼠 4 h 粪便粒数、粪便面积、体质量
2、变化;于第 28 天时, 进行腹壁回缩反射 (AWR) 评分以评价内脏敏感性, 采用苏木素伊红 (HE) 染色法观察各组大鼠胃窦部、十二指肠、中段回肠、结肠组织病理改变, 采用实时定量聚合酶链反应 (q PCR) 法检测结肠组织 5-羟色胺受体 3A (5-HT3AR) 表达水平。【结果】与对照组比较, 模型 1 h 组大鼠第 7、14、21、28 天的粪便粒数无明显变化 (P0.05) , 仅在第 14 天粪便面积显著升高, 体质量下降 (P0.05) 。光学显微镜观察结果显示, 模型 1 h、2 h 组大鼠的胃、十二指肠、回肠、结肠组织样本与对照组比较, 均无明显的病理改变。q PCR 结
3、果显示, 模型 2 h 组结肠 5-HT3AR 表达水平显著高于对照组 (P0.05) 。【结论】慢性束缚应激 2 h, 持续 14 d 可完成腹泻型肠易激综合征模型制备;粪便面积和 AWR 评分可作为其客观评价的指标。关键词： 腹泻型肠易激综合征; 慢性束缚应激; 模型评价; 疾病模型, 动物; 大鼠; 作者简介：周天然 (1992-) , 女, 硕士研究生;E-mail:作者简介：谈博 (1974-) , 男, 副教授, 医学博士;E-mail:收稿日期：2017-08-29基金：国家自然科学基金资助项目 (编号:81573715) Improvement and Evaluation o
4、f Rat Model of Diarrhea-predominant Irritable Bowel Syndrome Induced by Chronic Restrain StressZHOU Tian-Ran ZHANG Yao LU Xiao-Xu XIA Yan CAO Hong-Ying TAN Bo The Research Center for Integrative Medicine, Guangzhou University of Chinese Medicine; School of Chinese Materia Medica, Guangzhou Universit
5、y of Chinese Medicine; Abstract： Objective To modify the rat model of diarrhea-predominant irritable bowel syndrome (IBS-D) induced by chronic restrain stress, and to evaluate the modified model. Methods Thirty specific-pathogen free Sprague Dawley rats were randomly divided into control group, one-
6、hour model group and 2-hour model group, 10 rats in each group and half being male. One-hour model group and 2-hour model group were given restrain stress one, 2 hour (s) per day respectively, and the treatment lasted 14 days. On day 7, 14, 21, 28 after modeling, the number of feces grains within 4
7、hours, area of the excrement and body mass were monitored. On modeling day 28, abdominal withdrawal reflex (AWR) scores for visceral sensitivity were calculated, thepathological features of gastric antrum, duodenal, ileac, colonic tissues were observed by hematoxylin-eosin staining, and the expressi
8、on level of 5-hydroxytryptamine-3 A receptor (5-HT3 AR) in rat colon tissue was detected by real time quantitative polymerase chain reaction (q PCR) . Results Compared with control group, the number of feces grains in one-hour model group showed no obvious changes on day 7, 14, 21, 28, but the area
9、of the excrement was obviously increased and body mass was decreased on day 14 (P 0.05) . The optical microscopy results showed that no various changes in gastric, duodenal, ileac, colonic tissues in the two model groups as compared with those in the control group. QPCR results showed that the expre
10、ssion level of 5-HT3 AR in rat colonic tissues of the two model groups was higher than that of the control group (P 0.05) . Conclusion IBS-D model can be successfully established with chronic restrain stress for 2 hours per day and lasting for 14 days.Excrement area and AWR scores can be used as the
11、 objective indexes for the evaluation of IBS-D model.Keyword： diarrhea-predominant irritable bowel syndrome; chronic restrain stress; model evaluation; disease models, animal; rats; Received： 2017-08-29肠易激综合征 (irritable bowel syndrome, IBS) 是一种以腹痛、腹胀、排便频率或排便性状改变为特征的常见功能性肠病。应激事件常能诱发或加重 IBS患者的症状1。罗马标准
12、2,3将 IBS 分为腹泻型 (IBS with predominant diarrhea, IBS-D) 、便秘型、混合型和不定型。在我国, IBS-D 患者占比高达74.1%4,5。建立理想的 IBS-D 实验动物模型, 是开展各种与 IBS-D 有关的研究工作的基础。IBS-D 模型复制方法多样, 但 IBS-D 模型的应用仍存在许多问题。本研究使用创新性束缚器材, 对单一慢性束缚应激的刺激量和持续时间进行了对照研究, 使用 Image J 软件量化粪便面积, 对慢性束缚应激 IBS-D 大鼠模型进行了改良与评价, 现将研究结果报道如下。1 材料与方法1.1 实验动物30 只 SPF 级
13、 Sprague-Dawley (SD) 大鼠, 雌雄各 15 只, 4 周龄, 95105 g, 购自广州中医药大学实验动物中心许可证号:SCXK (粤) 2013-0034。饲养于SPF 级动物房许可证号:SCXK (粤) 2013-0085, 温度 22C25C, 湿度50%70%, 昼夜光照恒定, 各循环 12 h。大鼠单笼饲养, 以灭菌全价颗粒饲料喂养, 自由饮食、饮水, 并按实验动物使用的 3R 原则对其给予人道关怀。1.2 主要试剂与仪器乙醚 (天津市宏达化学试剂厂) ;RNA 提取、逆转录、扩增试剂盒 (美国 Thermo Fisher 公司, 批号分别为 15596026、0
14、0392892、00320777) 。医用弹力网状绷带 (天津市华澳医疗保健有限公司, 批号:2016-03-17) ;8Fr 导尿管 (重庆加加林世纪医疗器械有限公司, 批号:20150605) ;台式水银血压计 (上海鱼跃医疗设备有限公司, 批号 1506183) ;三通阀 (日本 Terumo 公司) 。1.3 分组与模型制备经适应性饲养 1 周后, SD 大鼠采用随机分层抽样方法分为 3 组, 每组雌雄各 5只, 设为对照组、模型 1 h 组、模型 2 h 组。参考文献6的束缚造模方法, 并改进如下:乙醚轻度麻醉大鼠后, 用医用弹性网状绷带束缚大鼠的前上肢、前肩、胸部, 限制前上肢搔抓
15、头面部, 但不限制其他活动。各组每日束缚时间为:对照组 0 h, 模型 1 h 组 1 h, 模型 2 h 组 2 h, 参考文献7的造模时间, 造模持续 14 d。1.4 模型评价指标1.4.1 大鼠粪便粒数与粪便面积在造模前 (第 0 天) 及造模开始后第 7、14、21、28 天, 在笼内放置吸水性清洁滤纸, 以固定时间收集并记录每只大鼠 4 h 粪便粒数;设定刻度标尺, 在固定高度对滤纸进行拍照, 使用软件 Image J 图像处理软件8, 参考文献9方法, 计算粪便面积。图 1 Image J 软件处理前后的粪便图 Figure 1 Graph of the excrement be
16、fore and after Image J analysis 下载原图1.4.2 IBS-D 模型内脏敏感性评价参考 Al-Chaer 方法7, 在第 28 天对各组大鼠进行结直肠扩张 (colorectal distention, CRD) 行为反应测试 (盲法) 。以 2 名观察者记录腹壁回缩反射 (abdominal withdrawal reflex, AWR) 评分, 评价内脏敏感性:对 CRD 无行为反应, 计 0 分;由不动变为短暂的头部活动, 计 1 分;腹壁肌肉收缩, 计 2 分;腹部抬起, 计 3 分;身体呈弓形, 骨盆结构抬高, 计 4 分。具体改进方法如下:乙醚轻度麻醉大鼠后, 将 8Fr 导尿管经肛门缓慢插入, 当球囊外端距离肛门约 1 cm 时固定, 经三通阀与血压计联通;大鼠苏醒并适应 1 h 后, 依次按照20、40、60、80 mm Hg 压力值对球囊进行 CRD 加压扩
