《褪黑素对噪声应激大鼠肝损伤的保护作用及其机制》由会员分享，可在线阅读，更多相关《褪黑素对噪声应激大鼠肝损伤的保护作用及其机制（9页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1褪黑素对噪声应激大鼠肝损伤的保护作用及其机制【摘要 】 目的： 探讨褪黑素（MT）对噪声应激大鼠肝损伤的保护作用及可能机制. 方法： 将 40 只雄性 SD 大鼠随机分为 5 组： 空白对照组、模型 1 组、模型 2 组、实验 1 组、实验 2 组，每组 8只. 实验组和模型组分别在应激前 30 min 腹腔注射 MT(15 mg/kg)和等体积生理盐水. 以 56 式冲锋枪射击时产生的 120 dB（A）的脉冲噪声，对实验组及模型组大鼠进行连续噪声刺激. 噪声应激后，观察 MT 对各组大鼠血浆中皮质醇、超氧化物歧化酶（SOD） ，丙二醛（MDA）以及肝组织匀浆中 SOD，MDA 的影响.
2、结果： 肝脏病理检查显示模型组大鼠出现明显的病理性损伤,实验组大鼠损伤程度明显减轻；模型组大鼠血浆皮质醇、血浆及肝组织匀浆的MDA 浓度较空白对照组显著升高，血浆及肝组织匀浆 SOD 活性显著降低(P0.01)，实验组大鼠血浆皮质醇的浓度、血浆及肝组织匀浆的 MDA 浓度较模型组显著降低，血浆及肝组织匀浆 SOD 活性显著升高(P0.01). 结论： MT 能减轻噪声引起的大鼠肝损伤，其机制可能与抑制脂质过氧化反应有关. 【关键词】 褪黑素 噪声 肝/损伤 皮质醇 超氧化物歧化酶 丙二醛20 引言研究表明，噪声不仅能够引起记忆力减退，还可以对机体的血液循环系统、内脏器官和中枢神经系统产生危害1
3、-2. 目前，国内鲜见对噪声所致肝功能损害的防治报道. 我们观察了 MT 对噪声应激大鼠肝脏功能的影响，并通过测定大鼠血浆激素浓度的变化探讨其可能发生的机制，为肝功能损害的防治提供理论依据.1 材料和方法1.1 材料健康雄性 SD 大鼠 40 只，12 wk 龄，体质量(28030) g(第四军医大学实验动物中心提供 ). 为消除 MT 分泌的生物节律对实验结果的影响,于每日 800AM 时开始实验. MT（ Sigma 公司） ；超氧化物歧化酶（SOD）测试盒、丙二醛（MDA）测试盒（南京建成生物工程研究所） ；皮质醇测试盒（北京北方伟业发展有限公司）. XH2060 型全自动 免疫分析仪(
4、中国核工业部西安二六二厂).1.2 方法1.2.1 动物给药将 40 只雄性 SD 大鼠在 7 d 环境适应期后随机分为 5 组：空白对照组、模型 1 组、模型 2 组、实验 1 组、实验32 组，每组 8 只，模型组及实验组给予每日 120 dB（A ）噪声连续应激 8 h，第 1 组应激 1 d，第 2 组应激 3 d，每次噪声刺激前 30 min 根据分组,实验组腹腔注射 MT(15 mg/kg)，模型组腹腔注射等量生理盐水.1.2.2 枪击噪音应激模型的建立3大鼠禁食 12 h 后置于隔音室内，用 56 式冲锋枪射击时产生的噪音制成录音，通过扬声器由电脑控制随机播放，扬声器距离大鼠 2
5、030 cm. 采用国营红声器材厂生产的 ND2 型精密声级计及频谱分析仪分析检测，控制噪音强度为 120 dB（A） ，频率为 0.254.00 kHz.1.2.3 血液中皮质醇含量、SOD 活性及 MDA 含量的测定各组大鼠应激结束后，麻醉，开胸取血 4 mL，其中 2 mL 加入 100 g/L 乙二胺四乙酸钠 30 L 和抑肽酶 40 L 的离心管中，混匀，于4，3000 r/min 离心 10 min，离心半径 12 cm，分离血浆，-20下保存待测定. 采用放射免疫法测定血浆中皮质醇含量. 操作程序严格按照试剂盒及仪器说明书由 1 人完成检测 . 另外 2 mL 血液于3000 r
6、/min 离心 10 min，离心半径 12 cm，吸取上清液，-20下保存待测定. 严格按照试剂盒说明书进行操作，测量 SOD 活性及MDA 含量.1.2.4 肝组织匀浆中 SOD 活性及 MDA 含量的测定取血后，4将大鼠处死，取肝脏组织洗去残血并吸干水分，用天平称取 1 g 肝脏组织，用生理盐水配置成 100 g/L 组织匀浆 . 于 3000 r/min 离心10 min，离心半径 12 cm，吸取上清液，-20下保存待测定. 严格按照试剂盒说明书进行操作，测量 SOD 活性及 MDA 含量.1.2.5 肝组织的病理学检测将部分肝组织洗去残血并吸干水分，放入 40 g/L 甲醛溶液中
7、4 保存，送第四军医大学西京医院病理科做病理学切片检查.统计学处理：所有数据均以 xs 表示，结果采用 SPSS10.0统计软件进行方差分析,均数间的多重比较用 LSDt 进行显著性检验.2 结果2.1 各组大鼠血浆皮质醇的变化空白对照组、模型 1 组、模型 2 组、实验 1 组、实验 2 组血浆皮质醇浓度分别为（0.950.10）, （1.990.08）,（2.590.09）,（1.270.14）,（1.630.09）. 模型 1 组、模型 2 组大鼠血浆皮质醇均较空白对照组显著升高（P0.01 ） ，实验 1 组较模型 1 组显著降低（P0.01） ，实验 2 组较模型 2 组显著降低（P
8、0.01）.2.2 各组大鼠血浆及肝组织匀浆 SOD， MDA 的变化模型 15组及模型 2 组显著低于空白对照组（ P0.01，表 1） ，实验 1 组较模型 1 组显著升高（ P0.01） ，实验 2 组较模型 2 组显著升高（P0.01）. 各组大鼠血浆肝组织匀浆 MDA 水平比较，模型 1组及模型 2 组较空白对照组显著升高（ P0.01） ，实验 1 组较模型 1 组显著降低（P0.01 或 0.05） ，实验 2 组较模型 2 组显著降低（P0.01）.表 1MT 对噪声应激大鼠血浆肝组织匀浆 SOD，MDA 的影响（略）bP0.01 vs 空白对照组； dP0.01 vs 模型
9、1 组； fP0.01 vs 模型 2 组.2.3 各组大鼠肝脏组织形态学模型组比实验组肝脏组织明显充血水肿，有较多炎细胞浸润，肝小叶结构受到破坏，细胞形态不规则，有部分肝细胞变性（图 1）. 其中模型 2 组较模型 1 组严重. 实验 1 组、实验 2 组肝细胞损伤明显减轻.3 讨论应激是机体在受到各种因素刺激时所出现的一些非特异性反应，而下丘脑 垂体 肾上腺皮质激素系统(HPA 轴)是应激系统的重要组成部分4 ，机体主要是通过 HPA 轴来调节机体完成对应激6的适应. HPA 轴兴奋时，促肾上腺激素释放激素（ CRH）合成增加，刺激垂体前叶释放促肾上腺皮质激素（ACTH）进而增加糖皮质激素
10、分泌，血浆皮质激素水平是其最终表现形式. 研究发现，心理应激可导致大鼠血浆内的皮质激素显著上升5. 我们的实验也表明，急性的噪声应激会导致大鼠血浆内的皮质醇水平较正常状态下大鼠显著升高，并且随应激时间的延长升高更加明显.褪黑素(MT)是松果腺分泌的一种吲哚类的化学物质,对应激反应有着重要影响. MT 的合成分泌与日照周期同步,呈现极显著的昼低夜高的生理性节律波动6 ，并且与 HPA 轴所涉及的激素分泌节律恰恰相反，这提示两者可能有着一定的关系. 研究表明，腹腔注射 0.2 mg/kg 剂量的 MT 即可改善外源性皮质醇所诱导的大鼠血浆ACTH 及皮质酮水平下降7. 为避免内源性 MT 对实验结
11、果的影响，本实验在早 8 时开始 . 实验显示，两实验组的血浆皮质醇水平均显著低于相应模型组，尽管略高于空白对照组，但已无显著差异. 这说明外源性的 MT 可以使大鼠血浆内的皮质激素水平接近于正常水平，提示可能机体应激状态有所改善.A: 空白对照组 HE 100; B: 模型 1 组 HE 400; C: 实验 1组 HE 400; D: 模型 2 组 HE 400; E: 实验 2 组 HE 400.图 1 各组大鼠肝脏组织形态（略）7超氧化物歧化酶(SOD)是一类广泛存在于生物体内含不同金属元素的酶蛋白,是唯一能够催化超氧阴离子自由基发生歧化反应的生物酶, 使超氧自由基分解, 快速清除体内
12、过剩的氧自由基 . 机体在处于应激状态时，体内的氧自由基含量可以明显高于正常状态. 而丙二醛（MDA）是机体氧自由基与生物膜多不饱和脂肪酸发生脂质过氧化的产物,其产生的量与氧自由基的量及脂质过氧化的程度呈正相关, 故检测 MDA 可反映氧自由基的水平及脂质过氧化的程度. 本实验发现，实验组大鼠血清及肝脏中 SOD 活性和 MDA 含量较空白对照组均有明显升高，说明噪声可以损伤到肝脏组织的正常功能.实验结果显示，噪声可使大鼠处于明显的应激状态，兴奋HPA 轴，提高血浆内皮质醇水平，并且随应激的加强皮质醇水平升高更加明显. 在 HPA 轴的影响下，大鼠血清及肝匀浆的 SOD 活性和 MDA 含量产
13、生异常变化，同时肝脏功能受到损害. 而外源性的MT 抑制了应激所导致的 HPA 轴的兴奋，使血清中 SOD 活性和MDA 含量接近于正常水平，拮抗了应激所致的肝脏功能紊乱. 病理检查结果也显示，实验组的肝组织较模型组损伤明显减轻. 我们既往的研究也发现，MT 对酒精所诱导的肝损伤具有保护作用 8. 由于 MT 在人体内尚未发现毒性作用，在多种动物体内也未建立其半数致死剂量(LD50) ，故其临床应用具有较高的安全性. 进一步开展 MT 的临床研究，可望使其成为应激性肝脏功能紊乱治疗措施的8一种新选择.【参考文献】1 孙喜庆，刘挺松，曹新生，等 . +6 Gz 和噪声复合应激对大鼠学习记忆的影响
14、J. 第四军医大学学报 ,2004,25(21):1928-1931.2 王亚东，杨海燕. 噪声接触与神经行为功能关系的Meta 分析 J. 实用预防医学， 2005,12:284-285.3 穆振斌，黄裕新，赵保民，等. 枪击噪音对大鼠胃肠传输液体食物的影响及其机制探讨 J. 解放军医学杂志, 2004,29(11):991-992.4 Seematfer G， Binnert C， Martin JL， et al. Relationship between stress inflammation and metabolismJ. Curr Opin Clin Nutr Metab Car
15、e，2004，7(2) ：169-173.5 尹剑春，童昭岗，颜军. 中小负荷运动对反复心理应9激大鼠血清皮质酮、IL2 和血浆 T 淋巴细胞亚群的影响 J. 中国运动医学杂志，2005，24（4）：419-423.6 Ana I, Esquifino SR. PandiPerumal, Daniel P. CardinaliCircadian organization of the immune response: A role for melatoninJ. Clin Appl Immunol Rev, 2004，4 ：423-433.7 钟历勇，沈自尹，冉瑞琼，等. 褪黑素对大鼠下丘脑垂体 肾上腺轴及免疫功能受抑状态的影响J. 中国免疫学杂志，2003，19(11) ：761-764.8 刘卫辉，蔡川，周扬，等. 褪黑素对乙醇致小鼠慢性肝损伤的保护作用J. 第四军医大学学报，2006，27（18 ）：1665-1667.
