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1、1白英总苷抗肿瘤作用初步研究【关键词】 肿瘤he Primary Study on the Antitumor Effect of Total Saponin of Solanum Lyratum ThunbAbstract：Objective To observe the anti-tumor activity of the total saponin of Solanum Lyratum in vitro and vivo. Methods In vitro, the inhibitory effects of total saponin of Solanum lyratum on pro
2、liferation of human hepatoma BEL7402 cells and gastric carcinoma SGC7901 cells were measured by MTT colorimetric assay. The mouse tumor model was used to investigate the effects of total saponin on tumor growth. Results The studies demonstrate that total saponin of Solanum lyratum inhibited prolifer
3、ation of BEL7402 cells and SGC7901 cells, and the IC50 values on them were (180.226.32) g/ml and (14.894.89) g/ml, respectively. The tumor inhibitory rate of high dose of total 2saponin on S180 sarcomatransplanted mice were 33.76%3.24%. When the dose of total saponin varied from low to high, it was
4、able to inhibit the growth of S180 sarcomatransplanted mice in a dosedependent manner. There was no influence of total saponin on the growth of H22 hepatic cancer. Conclusion The total saponin of Solanum lyratum could inhibit the proliferation of tumor cells and inhibit the growth of graft tumor in
5、mice. No acute toxic effect was seen in our experiment.Key words：Solanum Lyratum Thunb；Antitumor ；MTT method；S180；H22摘要：目的 研究白英总苷体内外抗肿瘤作用。方法 采用MTT 法考察白英总苷体外对人肝癌 BEL7402细胞及人胃腺癌SGC7901细胞的增殖抑制作用；以小鼠 S180 肉瘤及 H22 肝癌为模型，考察白英总苷体内对肿瘤生长的抑制作用。结果 白英总苷对人肝癌 BEL7402细胞及人胃腺癌 SGC7901细胞有显著地增殖抑制作用，且均呈现良好的浓度 效应依赖关系，作用
6、 48h 的 IC50值分别为（180.226.32）g/ml 和（114.894.89 ）g/ml；白英总苷对小鼠 S180 肉瘤有显著的抑制作用，且呈现良好的剂量-效应关系，三次重复实验，高剂量组的抑瘤率达到 33.76%3.24%；3白英总苷各剂量对小鼠 H22 肝癌抑制作用均不显著。结论 白英总苷体内外有一定的抗肿瘤作用。关键词：白英；抗肿瘤；MTT 法；小鼠 S180 肉瘤；小鼠H22 肝癌0 引言茄科植物白英（Solanum Lyratum Thumb）又名白毛藤，主产于江苏、浙江、江西，具有清热解毒，祛风利湿，化瘀等作用。临床常用于治疗感冒发热，胆囊炎，胆石病，癌症，子宫颈糜烂，
7、白带等病症1。有研究表明，白英水提物体外有较强的肿瘤细胞增殖抑制活性2,脂溶性提取物能促进癌细胞凋亡3 。前期研究结果表明，白英总苷对 A375 细胞等多种体外培养的肿瘤细胞系具有良好的细胞增殖抑制活性4，本研究进一步对白英总苷体内外的抗肿瘤作用进行系统的观察。1 材料与方法1.1 动物及瘤株昆明种小鼠，购自中国医科大学第二临床医院实验动物中心，4许可证号： SCXK（辽）20030013 。人肝癌 BEL7402细胞株与人胃腺癌细胞 SGC7901细胞株，由本实验室传代保种。小鼠S180 肉瘤和 H22 肝癌瘤株，由沈阳药科大学吴英良教授惠赠。1.2 药物白英饮片购于上海徐汇中药饮片厂， 由
8、沈阳药科大学孙启时教授鉴定。 取白英全草干品 1 000.0g， 用 95%正丁醇适量浸泡过夜后， 回流提取 3 次， 每次 1h， 自然冷却， 过滤， 挥去溶剂得浸膏， 浸膏以适量水分散， 等量石油醚萃取 3 次， 水层再以等量正丁醇萃取 3 次， 正丁醇层减压干燥， 得白英总苷 10.0g。 配制成不同浓度溶液备用。 注射用环磷酰胺（CTX） （江苏恒瑞医药股份有限公司产品， 批号 00202660020270） 。 5氟尿嘧啶（5Fu ）水剂 250 毫克/瓶（上海旭东海普药业有限公司， 批号002302） 。1.3 试剂RPMI-1640 培养液（MEDIUM HyClone，批号AM
9、L17586B） ，胎牛血清（北京元亨圣马生物技术研究所，批号020902） ，四甲基偶氮唑盐 (Thiazolyl Blue Tetrazolium Eromide， MTT)（美国 Amresco, 批号 2072B77） 。51.4 方法1.4.1 白英总苷对多种人癌细胞的体外增殖抑制作用取对数生长期的 SGC7901、BEL7402 细胞，以1105/ml 密度埋 96 孔板，每孔 100l，埋板 12h 后加药。白英总苷设 5 个浓度，分别为 250、50、10、2 、0.4g/ml，阳性对照药 5Fu同样设 250、50、10、2、0.4g/ml 等浓度，每个浓度设3 个复孔。给药
10、 48h 后，小心吸弃孔内培养液，每孔以 PBS 洗一次，再将上清液吸弃。每孔加培养液 100l，MTT 液 10l，37 ，5 % CO2 饱湿继续孵育 4h 后中止培养，小心吸弃孔内培养液。每孔加入 150l DMSO，振荡 10min。用酶标仪在 492nm 处测吸光度值5，求出 IC50 值。细胞生长抑制率按下列公式计算：生长抑制率= (对照组平均值-用药组平均值)/ 对照组平均值100%1.4.2 白英总苷最大给药量实验66健康昆明种小鼠 20 只，雌雄各半，体重 1822g，禁食10h 并自由饮水，白英总苷以生理盐水配置成 2.0g/ml，按灌胃动物能允许的最大容积 0.4ml/1
11、0 g 灌服给药 1 次，给药量相当于8000.0g 生药/kg/d ，观察 24h 及 2 周内动物的状态及死亡数，每日记录，以下式计算此剂量相当于人日用剂量的倍数。小鼠的最大耐受量倍数=每只小鼠的耐受药量小鼠的平均体表面积（0.00442m2)成人的平均体表面积（1.36m2)成人每日用量1.4.3 白英总苷体内对小鼠移植性肿瘤的作用7 ，8选择腹腔接种 79d，生长良好的荷 S180 肉瘤或22 肝癌的小鼠，断颈处死，无菌抽取腹水，以无菌生理盐水稀释成1107/ml 瘤细胞悬液，接种于健康小鼠右前肢腋部皮下，每只0.2ml，接种 60 只。接种次日，按体重随机分为 5 组，灌胃给予受试药
12、物各剂量或生理盐水，每日一次，连续d。阳性对照组腹腔注射 CTX（0.02g/kg/d） 。白英总苷高、中、低剂量组分别为62.4、31.2、15.6g 生药/kg/d。期间，每日观察小鼠的一般活动、皮毛、粪便等情况。最后一次给药后 24 h，处死动物，称瘤重并计算抑瘤率，实验结果进行 t 检验。实验重复 3 批，每批实验中动物选取同一性别。7抑瘤率(%)=(对照组平均瘤重-给药组平均瘤重)/ 对照组平均瘤重100%2 结果2.1 白英总苷对 BEL7402和 SGC7901细胞的体外增殖抑制作用白英总苷对体外培养的 BEL7402细胞与 SGC7901细胞具有一定的增殖抑制作用，且呈现良好的
13、浓度依赖性关系，见表1。表 1 白英总苷对 BEL7402与 SGC7901细胞的增殖抑制作用（略）表 2 白英总苷对小鼠 S180 肉瘤及肝癌 H22 的抑制作用（略）* P0.05，* P0.01，与荷瘤对照组相比2.2 白英总苷最大耐受量实验8给药后小鼠活动均正常，2 周后亦全部存活，且体重增加，据此动物的最大耐受量为人日用量的 1 641.0 倍，表明白英总苷急性毒性甚小。2.3 白英总苷的体内抗癌活性荷 S180 肉瘤小鼠给予总苷各剂量肿瘤重量明显减轻，与对照组比较，有显著性差异，见表 2。3 讨论体外实验表明，总苷对多种体外培养的人癌细胞均呈现一定的增殖抑制作用，并呈现良好的浓度
14、剂量依赖关系。动物实验表明，白英总苷的小鼠最大耐受量相当于人用剂量的 1 641.0 倍，急性毒性甚小。体内小鼠移植瘤实验表明，白英总苷对小鼠移植性 S180 肉瘤有显著的抗肿瘤作用，高剂量组抑瘤率大于 30%，且与荷瘤对照组有显著性差异，同时药物的作用强度与剂量呈现良好的依赖关系，但其对小鼠移植性 H22 肝癌虽有肿瘤平均重量的减少，但不具有显9著性差异，肿瘤重量的变异范围较大，高剂量组抑瘤率仅 16.7%。通过较为系统的研究认为，白英总苷体内外具有一定的抗肿瘤作用，且其作用存在一定的选择性，考虑可能与不同肿瘤的生物学性状的差别有关，其抗肿瘤作用机制有待进一步的研究。【参考文献】1 全国中草
15、药汇编编写组全国中草药汇编M北京：人民卫生出版社，1988.2912 施文荣，刘艳 白英对人急性早幼粒白血病 HL60细胞生长的影响J 福建中医学院学报，2002，12(1) ：3638 3 单长民，胡娟娟，杜冠华，等白英提取物诱导人肝癌BEL7404细胞凋亡作用J 中国临床药理学与治疗学，2001,6（3）：200203 4 孙立新，任靖，王敏伟，等白英抗肿瘤有效部位筛选J沈阳药科大学学报，2005，22(3)：210212 5 徐叔云药理实验方法学 M第版北京：人民卫生出版社，2002.17621763 106 陈奇中药药理研究方法学M第版.北京：人民卫生出版社，1993.119120 7 徐叔云药理实验方法学 M第版北京：人民卫生出版社，2002.17571779 8 李仪奎中药药理实验方法学 M上海：上海科学技术出版社，1991.513514
