《宫颈癌组织中游离型hpv16变异ctse片段的克隆及其对启动子活性影响》由会员分享，可在线阅读，更多相关《宫颈癌组织中游离型hpv16变异ctse片段的克隆及其对启动子活性影响（57页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、夕 A . 0 i 游离型H P V 1 6 ; 克隆; C T S E ; 突变; 瞬 时表达;Y Y l 【 论文类型】理论研究 ABS T RACT Ti t l e :CLONI NG OF MUT ATI ONAL EP I S OME- HP V1 6 CTS E F ROM THE CERVI CAL S P ECI MENS AND I NF LUENCE OF P ROMOTER ACTI VI T Y Ma j o r : Ma s t e r : S u p e r v i s o r : P a t h o g e n i c b i o l o g y L i u X
2、 i a n g S i g n a t u r e : C h u Y o n g l i e S i g n a t u r e : d X i a x 沐俨亡 之一- ABS TRACT T h e c e r v i c a l c a r c i n o m a i s t h e m o s t c o m m o n t u m o r i n f e m a le g e n i t a l t r a c t . E p i d e m i o l o g y a n d m o l e c u l a r b i o l o g y d a t a s h o w e d
3、t h a t i n f e c t i o n o f t h e h i g h - r i s k H P V , s u c h as H F V 1 6 / 1 8 , i s c l o s e l y r e l a t e d t o t h e d e v e l o p m e n t o f c e r v i c a l c a r c i n o m a . E 6 / E 7 g e n e s o f H P V 1 6 / 1 8 D N A e n c o d e t h e o n c o g e n i c p r o t e i n s ; l o n
4、 g c o n t ro l r e g i o n ( L C R ) i n H P V 1 6 / 1 8 D N A r e g u l a t e s t h e t r a n s c r i p t i o n a n d r e p l i c a t i o n o f t h e v i r a l D N A . A c e l l t y p e s p e c i f i c e n h a n c e r ( C T S E ) i n H P V L C R c a n p o s it i v e l y o r n e g a t i v e l y r e
5、 g u l a t e t h e a c t i v i ty o f E 6 / E 7 p r o m o t e r P 9 7 t h r o u g h m u l t i p l e c e l l u l a r f a c t o r s b i n d i n g s i t e s c o m b i n i n g t h e s p e c i f i c c e l l u l a r f a c t o r s . T h e r e f o r e , t h e a c t i v ity o f p ro m o t e r P 9 7 i s i n f
6、l u e n c e d b y C T S E w i t h v a r i a t i o n o f c e l l u l a r b i n d i n g s i t e s , r e s u l t i n g i n o v e r - e x p r e s s i o n o f E 6 / E 7 g e n e s . I n o u r l a b s p r e v i o u s s t u d y , s e v e r a l m u t a t i o n a l c e l l u l a r f a c t o r - b i n d i n g
7、s it e s , s u c h as Y Y l s i t e , w e r e f o u n d in C T S E fr o m t h e e p i s o m a l H P V 1 6 - p o s i t i v e c e r v i c a l c a r c in o m a s p e c i m e n s . I n o r d e r t o f u r th e r r e s e a r c h t h e m e c h a n i s m o f e p i s o m a l H P V - as s o c i a t e d c a r
8、 c i n o g e n e s i s , t h e i n fl u e n c e o f p r o m o t e r a c t i v i ty b y t h e m u t a t i o n a l C T S E w a s i n v e s t i g a t e d . O b j e c t i v e : T o c o n s t r u c t t h e re c o m b i n a n t C A T r e p o rt e r p l asm i d s c o n t a i n i n g t h e p r o t o t y p e
9、 H P V 1 6 C T S E a n d t h e m u t a t i o n a l e p i s o m e - H P V 1 6 C T S E a n d t o i n v e s t i g a t e t h e i n f l u e n c e o f p r o mo t e r a c t i v i ty b y t h e mu t a t i o n a l CT S E. Me t h o d : O n e e p i s o m a l H P V1 6 C T S E a n d o n e w i l d - t y p e H P V1
10、 6 西安交通大学硕士学位论文 C T S E fr a g m e n t w e r e a m p l i fi e d w i t h P C R a n d i n s e rt e d i n t o p U C m- T v e c t o r r e s p e c t i v e l y , f o l l o w in g p U C m - T v e c t o r r e f e r e n c e . I s o l a t e d r e s p e c t i v e l y t h e D N A fr a g me n t fr o m t h e t w
11、o k i n d s o f p U C m- T / C T S E f o l l o w i n g d i g e s t i o n w it h K p n I a n d B g l I I a n d l i g a t e d t o t h e p C A T 3 - P r o m o t e r C A T r e p o r t e r p l a s m i d s . T h e r e c o m b i n a n t p l as m i d s w e r e d e s i g n a t e d p C A T - 1 a n d p C A T -
12、 2 r e s p e c t i v e l y . F u n c t i o n a l a n a l y s i s o f t h e m u t a t i o n a l C T S E a n d t h e w i l d - t y p e C T S E w as p e r f o r me d i n C A T as s a y e x p e r i m e n t s . T h e H e L a c e l l l i n e s w e r e t r a n s i e n t l y t r a n s f e c t e d w i t h p
13、C A T 3 - P r o m o t e r a n d t h e re c o m b i n a n t p l as m i d s p C A T - 1 , p C A T - 2 D N A u s i n g t h e L ip o f e c t a m i n e 2 0 0 0 . T h e c y t o p l as m p r o t e i n s o f H e L a c e ll s w e r e e x t r a c t e d a n d t h e e x p r e s s i o n s o f C A T w e r e e v a
14、 l u a t e d w i t h E L I S A ass a y . R e s u l t s : 1 .T h e re c o m b in a n t 禅 a s m i d s s h o w e d a 1 .5 - 2 . 5 f o l d in c r e a s e i n c o m p a r i s o n t o t h e C A T e x p re s s e d o f t h e p C A T 3 - P r o m o t e r . 2 . T h e p C A T - 2 s h o w e d a 1 .6 f o l d i n
15、c r e as e o f t h e C A T e x p re s s e d i n c o m p a r i s o n t o p C A T - 1 c o n t a in in g t h e p r o t o t y p e H P V - 1 6 C T S E . C o n c l u s i o n : 1 . W e s u c c e s s f u l l y c o n s tr u c t e d t h e r e c o m b i n a n t C A T r e p o rt e r p l as m i d s c o n t a i n
16、 i n g t h e p r o t o t y p e B P V - 1 6 C T S E a n d t h e m u t a t i o n a l e p i s o me - H P V 1 6 C T S E . 2 .T h e a c t i v i t y o f p ro m o t e r w as u p - r e g u l a t e d b y Y Y 1 s i t e m u t a t i o n in t h i s C T S E . 3 .O u r r e s u l t s i n d i c a t e d t h e m e c h a n i s m o f e p i s o m a l H P V - ass o c i a t e d c a r c i n o g e n e s i s i n S h a n x i i s c l o s e l y as s o c i a t e d w i t h Y Y I s i t e m u t a
