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2、保密论文在解密后应遵守此规定。 导师签 日 J1 - I k 囊 矗、 ， 一 些奎窒些奎堂堡主童些堂垡笙塞 l 掣I I I 1 1 I 7 l l l 8 l16lE4lI掣II 螋 - _ - _ - _ - 。一 UU o o 目录 摘要i 4 A b s t r a c t 6 引言8J1 日V 1 鸡传染性法氏囊病的研究历史8 2 病原学一9 2 1 病毒组成9 2 2 血清型9 2 3 病毒对理化条件的抵抗力9 3 流行病学1 0 4 临床症状、病理变化1 1 5 培养特性1 2 5 1 鸡胚培养1 2 5 2 细胞培养1 2 5 3I B D V 在细胞中增殖的分子机制1 3
3、6I B D 的诊断1 4 6 1 病毒分离培养1 4 6 2 血清学及分子生物学检测1 4 7 预防治疗1 5 7 1 综合预防措施1 5 7 2 治疗措施1 6 8 本研究的目的与意义1 7 实验一鸡传染性法氏囊病病毒山东株的分离鉴定1 8 1 材料与方法1 8 1 1 材料1 8 1 2 方法1 9 1 2 1 病料处理1 9 1 2 2 琼脂免疫扩散试验( A G P ) 1 9 1 2 3 病毒分离培养1 9 1 2 4 动物试验? 2 0 1 2 5 外源病毒检测2 0 鸡传染性法氏囊病病毒山东株的分离鉴定及免疫预防研究 1 2 6 毒力测定试验一。：2 1 1 2 6 1 分离毒
4、株对S P F 鸡胚的致病力2 1 1 2 6 2 分离毒株对S P F 鸡的致病力2 l 2 结果2 1 2 1 发病情况2 1 2 2 琼扩试验结果2 2 2 3 病毒分离培养结果2 3 2 4 动物实验结果。2 3 2 5 外源病毒检测结果2 4 2 6 毒力试验结果2 4 3 讨论2 7 实验二I B D V 分离株的驯化培养2 9 1 材料与方法2 9 1 1 材料2 9 1 2 方法2 9 1 2 1C P V 株种毒的制备2 9 1 2 2 不同收毒方式比较试验3 0 1 2 3 对C P V 的C E F 细胞培养3 0 2 结果3 1 2 1C P V 鸡胚培养结果3 l 2
5、 2 不同收毒方式比较试验结果3 3 2 3 C P V 细胞培养结果3 4 3 讨论3 5 实验三鸡传染性法氏囊病病毒山东分离株灭活苗的制备及应用3 6 l 材料与方法3 6 1 1 材料3 6 1 2 方法：3 7 1 2 1 病毒增殖3 7 1 2 2 病毒灭活：3 7 1 2 3 疫苗的制备：j3 8 1 2 4 无菌检验3 8 2 - ， 山东农业大学硕士专业学位论文 1 2 5 物理性状检验 1 2 6 免疫。 1 2 7 安全检验 1 2 8 效力试验 1 2 9 田间试验 2 结果： 2 1E C P V 病毒含量测定结果 2 2C C P V 细胞病毒含量测定结果 2 3 B
6、 J Q 9 0 2 细胞培养结果 2 3 无菌检验结果 2 4 物理性状检验检验结果 2 5 安全检验结果 2 6 免疫效力试验结果 2 7 田间动物试验结果 3 讨论 结论 参考文献 附录一相关的试验方法 方法1 鸡胚半数感染量( E L D 拍) 的测定方法 方法2 鸡胚成纤维细胞半数感染量( T C I D ) 测定方法 致谢 8 8 9 9 1 l l l l 2 2 3 3 5 5 7 8 1 1 1 2 3 3 3 3 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 5 5 5 5 鸡传染性法氏囊病病毒山东株的分离鉴定及免疫预防研究 摘要 鸡传染性法氏囊病是由鸡传染性法氏囊病
7、病毒引起的一种免疫抑制性传染 病，造成免疫缺陷，造成鸡对细菌和其它病毒等致病因子的易感性增加，给养 鸡业造成严重的危害。近年来，由于疫苗的使用，使本病在一定程度上得到了 控制。但是，自2 0 世纪8 0 年代以后，世界上先后出现变异毒株及超强毒株， 为法氏囊病的免疫防治带来一定的难度。到目前为止，我国已有多处报道发生 I B D V 超强毒株的感染，造成I B D 疫苗免疫失败，由此，寻找更合理有效的防治 办法成为控制I B D 流行的当务之急。 目前，病毒性传染病仍无有效的药物进行治疗，疾病的控制仍以免疫预防 为主，因此寻找免疫原性好的I B D 流行毒株成为免疫预防的关键所在。本试验 通过
8、对山东省内不同地区法氏囊病流行情况的调查，经实验室分离培养鉴定得 到一株I B D V 野毒株C P 株，同时对该毒株进行驯化得到一株细胞适应毒C C P V ， 对此两株毒进行免疫效力试验，证明该毒株具有较好的免疫原性并对疫苗株有 交叉保护作用。本试验共分三部分： 实验一：鸡传染性法氏囊野毒株的分离鉴定 本试验通过对山东省内不同地区法氏囊流行情况的调查，采集疑似病症的 病料8 2 9 份，根据病鸡的流行病学和临床症状，结合琼脂免疫扩散试验及回归 易感染鸡试验方法，初步选出阳性病料1 1 8 份。其次对阳性病料通过外源病毒 检测，经过上述方法的筛选，顺利得到一株I B D 野毒株C P V ，
9、该毒株临床症状、 病理剖检变化典型，发病快，病程短，病死率高，属于超强毒力毒株。 实验二I B D V 分离株的传代培养 试验证明C P 株不能直接适应细胞，要想得到一株细胞适应毒需要较长的时 间，所以，本试验仍以鸡胚培养为主，以优化鸡胚培养方式，使该方法更适合 I B D V 的培养。I B D V 在鸡胚中以C A M 和肝含毒量为最高，在尿囊液中为最低，由 于在试验过程中发现鸡胚肝肿大，肺、肾及卵黄囊出血严重，那么将鸡胚全部 4 山东农业大学硕士专业学位论文 收获会不会影响到I B D V 的病毒含量呢? 本试验通过比较鸡胚的C A M 、鸡胚胚体、 卵黄及尿囊液的混合物与C A M 病
10、毒含量证明这一观点成立，同时在鸡胚培养的 过程中对C P V 进行细胞驯化，经细胞培养至第八代出现了细胞病变，得到细胞 适应毒C C P 株。 实验三：鸡传染性法氏囊病病毒山东分离株灭活苗的制备及应用 本试验分别将C P 株和法氏囊B J Q 9 0 2 制备成油乳剂灭活疫苗，免疫2 1 日龄 S P F 鸡进行免疫效力实验，通过抗体监测和攻毒保护试验得出C P 株在免疫后第 二周相对疫苗株产生抗体较高，抗体滴度整齐，对C P 株和疫苗株攻击均能产生 较高保护率，而疫苗株免疫后对C P 株的攻击抵抗率较低，由此说明C P 株免疫 鸡群后不仅能产生高而整齐的抗体效价，而且对疫苗株有较好的交叉保护
11、作用， C C P V 株制备的疫苗还具有稳定性好，安全性高等优点，具备作为疫苗的条件。 关健词：鸡传染性法氏囊野毒株病毒含量免疫效力交叉保护 鸡传染性法氏囊病病毒山东株的分离鉴定及免疫预防研究 A b s t r a c t I n f e c t i o u sb u r s a ld i s e a s ec a u s e db yi n f e c t i o u sb u r s a ld i s e a s ev i r u sa n di sah i g h l y c o n t a g i o u si m m o s u p p r e s s i o n I nr e
12、c e n ty e a r s ，t h ed i s e a s eh a db e e nb r o u g h tu n d e rc o n t r o lt o s o m ee x t e n tb e c a u s eo f p e o p l e Sg r a d u a lu n d e r s t a n d i n go fl B D H o w e v e r i nt h el a t eo f19 8 0 s ，t h e m o r ev i r u l e n tI B D Vh a v ee m e r g e d ，w h i c hm a k e si tv e r yd i f f i c u l tt ov a c c i n e a t i o n S of a r , w I B D V h a sb r o
