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1、第五章第五章 人类疾病的分子遗传学人类疾病的分子遗传学 - - 血红蛋白病血红蛋白病本章内容提示本章内容提示分子病（分子病（molecular disease)molecular disease)血红蛋白病（血红蛋白病（hemoglobinpathyhemoglobinpathy）血红蛋白类型（血红蛋白类型（HbF, HbAHbF, HbA2 2 ,HbA) ,HbA)及发育变化及发育变化遗传控制：类遗传控制：类链链 （排列、定位）（排列、定位） 类类链链 （排列、定（排列、定位）位）异常血红蛋白病及分子基础异常血红蛋白病及分子基础地中海贫血：地中海贫血： 地贫（基因型，临床症状，分子基地贫（
2、基因型，临床症状，分子基础）础） 地贫（基因型，临床症状，分子基地贫（基因型，临床症状，分子基础）础）分子病分子病 Molecular disease Molecular disease GeneGene突变导致蛋白质分子质和量异常，从而引突变导致蛋白质分子质和量异常，从而引起机体功能障碍的一类疾病，称为分子病。起机体功能障碍的一类疾病，称为分子病。19491949年年Pauling LPauling L对镰状细胞贫血病患者的血红蛋白对镰状细胞贫血病患者的血红蛋白HbSHbS电泳分析，推论其泳动异常是分子结构改变所致，从而电泳分析，推论其泳动异常是分子结构改变所致，从而提出分子病的概念。提出分
3、子病的概念。分子病的种类分子病的种类：依据蛋白质功能可将其分为：依据蛋白质功能可将其分为 1 1、运输蛋白病、运输蛋白病 2 2、凝血及抗凝因子缺乏症、凝血及抗凝因子缺乏症 3 3、免疫球蛋白病、免疫球蛋白病 4 4、膜转运蛋白病、膜转运蛋白病 5 5、受体蛋白病、受体蛋白病 6 6、胶原蛋白病、胶原蛋白病血红蛋白病血红蛋白病HemoglobinopathyHemoglobinopathy： 由于由于珠蛋白珠蛋白分子结构异常或合成量异常分子结构异常或合成量异常所引起的疾所引起的疾病。病。是常见的遗传病之一，从分子结构到发病机理研究是常见的遗传病之一，从分子结构到发病机理研究的均较清楚，是研究人
4、类的均较清楚，是研究人类分子病分子病的最好模型。的最好模型。原因：原因： 1 1）红细胞取材方便，来源丰富）红细胞取材方便，来源丰富 2 2）血红蛋白浓度高，不需纯化）血红蛋白浓度高，不需纯化 3 3）网织红细胞含有）网织红细胞含有、珠蛋白珠蛋白mRNAmRNA，便于克隆其，便于克隆其cDNAcDNA 4 4）血红蛋白异常引起的疾病种类很多）血红蛋白异常引起的疾病种类很多人类疾病的分子遗传学血红蛋白病第一节第一节 血红蛋白概述血红蛋白概述第二节第二节 血红蛋白基因血红蛋白基因第三节第三节 Hb Hb病的类型和分子基础病的类型和分子基础 第一节第一节 血红蛋白概述血红蛋白概述 - -HbHb的组
5、成、结构及类型的组成、结构及类型正常正常HbHb的组成的组成 是一种是一种结合蛋白：结合蛋白： 血红素血红素 珠蛋白珠蛋白 （Heme) (globinHeme) (globin) )每个每个HbHb单体是由单体是由 一条珠蛋白肽链一条珠蛋白肽链 和一个血红和一个血红素组成的。素组成的。 个个HbHb单体单体 一个球形四聚体一个球形四聚体 一一血红蛋白链血红蛋白的一、血红蛋白的一、二级结构：二级结构：氨基酸排列顺序氨基酸排列顺序及多肽链螺旋及多肽链螺旋类类链：（链：（、 ）141141个氨基个氨基酸酸类类链链: :（、）146146个氨个氨基酸基酸血红蛋白链， 螺旋结构。二二血红蛋白的结构血红
6、蛋白的结构三级结构三级结构四级结构四级结构二二血红蛋白的结构血红蛋白的结构血红蛋白的类型血红蛋白的类型成人成人HbHb ：HbHb A A 2 2 2 2 979798% 98% HbHb A A2 2 2 2 2 2 2 23 3 % % 胎儿胎儿HbHb： HbHb F F 2 2 2 2 2 2G G2 2 2 2A A2 2胚胎胚胎HbHb： HbHb Gower Gower 2 2 2 2 2 2G G2 2 2 2A A2 2 ( (妊娠妊娠1212周内周内) ) HbHb Gower Gower 2 2 2 2 HbHb Portland Portland 2 2 2 2 三三血
7、血 红红 蛋蛋 白白 类类 型型第二节第二节 血红蛋白基因血红蛋白基因 排列紧密，有共同起源，含有假基因排列紧密，有共同起源，含有假基因 7 7个基因，定位于个基因，定位于16p1316p13 5-5- - - - 1 1 - - 2 2 -2 2 -1 1- - 3- - 3 6 6个基因，定位个基因，定位11p1511p155-5-2 2 - - G G- - A A-1 1 - - -3- - -3-3珠蛋白基因特点珠蛋白基因特点珠蛋白珠蛋白Gene Gene 簇簇 珠蛋白珠蛋白GeneGene簇簇 珠蛋白基因簇珠蛋白基因簇16珠蛋白基因簇: 二、二、HbHb发育演变与遗传控制发育演变与
8、遗传控制 胚胎早期先合成胚胎早期先合成 和和 Hb GowerHb Gower（ 2 2 2 2 ） 同时或稍后合成同时或稍后合成 和和 Hb Hb Gower Gower （ 2 2 2 2 ） Hb Portland Hb Portland （ 2 2 2 2 ） 1212周时周时 和和 逐渐消失，逐渐消失， 链迅速增加，链迅速增加， 开始合成，开始合成，HbFHbF为主（为主（ 2 2 2 2 ）。）。 妊娠末期和出生不久，妊娠末期和出生不久， 链迅速降低，链迅速降低， 链迅速增加，链迅速增加，HbAHbA为主（为主（ 2 2 2 2 ）。）。HbHb发育演变发育演变2 1 2 1 G
9、A 1 胚胎Hb 胎儿Hb 成人HbHbHb类型类型珠蛋白链珠蛋白链 GowerHb22基因基因2222222222Gower PortlandF转录翻译Hb发育遗传控制三、三、珠蛋白基因结构及表达珠蛋白基因结构及表达 珠蛋白基因：珠蛋白基因： IVS1IVS1由由117bp117bp组成，位于组成，位于3131和和3232密码子之间，密码子之间， IVS2 IVS2由由149149或或140bp140bp组成，位于组成，位于9999和和100100密码子之间。密码子之间。珠蛋白基因：珠蛋白基因： IVS1IVS1含含130bp130bp，位于，位于3030和和3131密码之间，密码之间， I
10、VS2 IVS2大约含大约含850bp850bp，位于，位于104104和和105105密码子之间。密码子之间。 基因结构基因结构: : 非常相似，均为非常相似，均为3 3个外显子，个外显子，2 2个内含子个内含子( (IVS1、 IVS2）131329910014113031104105146珠蛋白基因结构珠蛋白基因结构珠蛋白基因结构珠蛋白基因结构珠蛋白基因表达珠蛋白基因表达E1E2E35-3TranscriptionProcessing5-Cap-polyAAAAAmRNATranslation珠蛋白基因表达特点珠蛋白基因表达特点发育阶段特异性发育阶段特异性 5533顺次表达、关闭顺次表达
11、、关闭合成场所特异性合成场所特异性 卵黄囊、胎肝、骨髓卵黄囊、胎肝、骨髓表达数量协调性表达数量协调性 类类、类、类链维持链维持1 1：1 1的比例的比例 总之，珠蛋白基因的表达具有时空特总之，珠蛋白基因的表达具有时空特异性、精确的协调性异性、精确的协调性第三节第三节 Hb Hb病的类型和分子基础病的类型和分子基础 人类珠蛋白基因的组织特异性强，仅在人类珠蛋白基因的组织特异性强，仅在RBC RBC 及前体及前体中才有大量表达。中才有大量表达。 由珠蛋白基因突变引起珠蛋白质量畸变由珠蛋白基因突变引起珠蛋白质量畸变（异常（异常HbHb病）病）和数量畸变和数量畸变（地中海贫血）（地中海贫血）所致的疾病
12、所致的疾病统称统称血红蛋白病血红蛋白病血红蛋白病分类异常异常HbHb病：病： 基因突变导致珠蛋白结构改变基因突变导致珠蛋白结构改变 例如：镰状细胞贫血例如：镰状细胞贫血地中海贫血：地中海贫血： 基因突变导致珠蛋白肽链合成缺乏基因突变导致珠蛋白肽链合成缺乏 或合成量异常或合成量异常 如如、地贫地贫异异 常常 血血 红红 蛋蛋 白白 病病 由于由于珠蛋白基因突变珠蛋白基因突变导致珠蛋白肽链结构异常，导致珠蛋白肽链结构异常，如有临床表现者称为异常血红蛋白病。如有临床表现者称为异常血红蛋白病。主要类型主要类型： （1）镰状细胞病）镰状细胞病 （2）不稳定血红蛋白病）不稳定血红蛋白病 （3）血红蛋白）血
13、红蛋白M病病 （4）氧亲和力改变的血红蛋白病）氧亲和力改变的血红蛋白病一、镰一、镰 状状 细细 胞胞 病病 遗传方式遗传方式：ARAR 形成原因形成原因： 链链第第6 6位位谷谷氨氨酸酸被被缬缬氨氨酸酸取取代代，形形成成HbHb S S。在在缺缺氧氧情情况况下下，HbSHbS聚聚合合形形成成长长棒棒状状聚聚合合物物，使使细细胞胞镰镰变变变变形形能能力力低低引引起起血血粘粘度度增增高高，导导致致溶溶血血、贫贫血血、血管梗阻性继发症状。血管梗阻性继发症状。 Hb HbS SHbHbS S 镰状细胞病镰状细胞病 Hb HbA AHbHbS S 镰形细胞性状镰形细胞性状 Hb HbA AHbHbA A
14、 正常人正常人镰镰状状 细细 胞胞 病病v临床症状临床症状：v血管阻塞的继发症状：一过性剧痛（腹痛、关节血管阻塞的继发症状：一过性剧痛（腹痛、关节痛）痛）, ,脑血管意外脑血管意外v急性大面积组织损伤：心梗，肺、肾脏损伤；急性大面积组织损伤：心梗，肺、肾脏损伤；v慢性溶血性贫血慢性溶血性贫血 患者多在成年以前死亡患者多在成年以前死亡 诊断：诊断：血涂片亚硫酸钠血涂片亚硫酸钠“镰变试验镰变试验”阳阳性性 电泳：有一电泳：有一“”区带区带S S A A ADAD（不完全显性）（不完全显性）现已发现现已发现9090余种。余种。分子机制分子机制：肽链上与血红素紧密结合的氨基酸发生：肽链上与血红素紧密结
15、合的氨基酸发生替代或缺失，损伤了肽链的立体结构，使其与血红替代或缺失，损伤了肽链的立体结构，使其与血红素的结合能力减弱，形成不稳定的异常血红蛋白易素的结合能力减弱，形成不稳定的异常血红蛋白易氧化在红细胞内聚集沉淀，形成氧化在红细胞内聚集沉淀，形成HeinzHeinz小体，红细小体，红细胞变形能力降低，通过微循环时容易被脾窦滞留破胞变形能力降低，通过微循环时容易被脾窦滞留破坏，从而导致血管内外溶血。坏，从而导致血管内外溶血。代表疾病代表疾病：Hb BristolHb Bristol 形成原因：形成原因： 链第链第6767位缬氨酸被天冬氨酸取代位缬氨酸被天冬氨酸取代 临床症状：先天性溶血性贫血、黄
16、疸、脾肿大临床症状：先天性溶血性贫血、黄疸、脾肿大二、不稳定血红蛋白病二、不稳定血红蛋白病三、血三、血 红红 蛋蛋 白白 病病 M 病病（遗传性高铁血红蛋白病）（遗传性高铁血红蛋白病） 形成原因形成原因： 肽链中与血红素铁原子连接的组氨酸发生肽链中与血红素铁原子连接的组氨酸发生替代，导致部分铁原子呈稳定的高铁状态，影响替代，导致部分铁原子呈稳定的高铁状态，影响HbHb正常带氧功能正常带氧功能 临床表现临床表现： 紫绀和继发性红细胞增多紫绀和继发性红细胞增多 遗传方式遗传方式：ADAD四、氧亲和力改变的血红蛋白病四、氧亲和力改变的血红蛋白病 形成原因形成原因： 由于珠蛋白基因突变致由于珠蛋白基因
17、突变致HbHb肽链上氨基酸发生肽链上氨基酸发生置换，致使置换，致使HbHb分子与氧的亲和力增高或降低，运分子与氧的亲和力增高或降低，运输氧功能改变。输氧功能改变。 临床表现临床表现： 红细胞增多症和紫绀红细胞增多症和紫绀异常血红蛋白病的分子基础异常血红蛋白病的分子基础 珠蛋白基因突变珠蛋白基因突变 主要类型：主要类型： （1）单个碱基置换）单个碱基置换 （2）移码突变）移码突变 （3）密码子的缺失和插入）密码子的缺失和插入 （4）融合基因）融合基因一）一）单个碱基的替代单个碱基的替代（占（占90%90%） 1 1、错义突变错义突变是由于单个核苷酸的改变导致由特定三联体是由于单个核苷酸的改变导致
18、由特定三联体密码子编码的氨基酸的改变。密码子编码的氨基酸的改变。例例： HbS HbS2 2、无义突变无义突变 原密码子原密码子原密码子原密码子终止密码终止密码终止密码终止密码肽链合成提前终止肽链合成提前终止肽链合成提前终止肽链合成提前终止 例：例：例：例：Hb Mckees-RockHb Mckees-Rock 145145 DNA 144 145 146 147 Hb A AAG UAU UCG UAA Hb McKees-Rock AAG UAA PROTEIN 144 145 146 147 Hb A Lys Tyr His （终止（终止） Hb McKees-Rock Lys （终止
19、）（终止）3 3、终止密码突变、终止密码突变终止密码终止密码编码氨基酸的密码，导致肽链异常延长。编码氨基酸的密码，导致肽链异常延长。例： Hb Constant SpringHb Constant Spring 142142 DNA 139 140 141 142 143Hb A AAA UAC CGU UAA GCUHb Constant-Spring AAA UAC CGU CAA GCU PROTEIN 139 140 141 142 143Hb A Lys Tyr Arg （ 终止）终止） Hb Constant-Spring Lys Tyr Arg Gln Ala-172二）二） 移
20、码突变移码突变 在正常密码子中插入或缺失一个或几在正常密码子中插入或缺失一个或几个碱基个碱基, ,导致该位点后面编码的氨基酸种导致该位点后面编码的氨基酸种类顺序改变类顺序改变. .例：例： loss loss 正常正常HbHb 137-137-ACC UCACC UCC C AAA UAC CGU UAA AAA UAC CGU UAA 苏苏-丝丝-赖赖-酪酪-精精- - 终终Hb Wayne Hb Wayne ACC UCA AAU ACC GUU AAGACC UCA AAU ACC GUU AAG 苏苏-丝丝-冬胺冬胺-苏苏-缬缬- - 赖赖插入AG三）三）整码突变整码突变密码子的三个碱
21、基同时缺失或插入密码子的三个碱基同时缺失或插入例：例： Hb Gun Hill Hb Gun Hill 89AGUGAGCUGCACUGUGACAAGCUGCACGUG98-丝谷亮组半胱门冬赖亮组缬-AGUGAGCUGCACGUG 89 90 96 97 9889 90 96 97 98-丝谷亮组缬-(-(91-9591-95缺失，后面氨基酸缺失，后面氨基酸顺序不变）顺序不变）四）四）融合基因融合基因由两种不同的肽链联接而成的异常血红蛋白肽链由两种不同的肽链联接而成的异常血红蛋白肽链. .产生原因：减数分裂时同源染色错误配对，使基因之产生原因：减数分裂时同源染色错误配对，使基因之间发生不等交换
22、。间发生不等交换。下图中的下图中的Hb LeporeHb Lepore是由是由、链连接而成，称链连接而成，称而而反反LeporeLepore是由是由、链连接而成，称链连接而成，称链链GA含重复片段的染色体Anti-Lepore缺失染色体HbLepore二、地中海贫血二、地中海贫血 珠蛋白链合成数量不平衡珠蛋白链合成数量不平衡最最初初发发现现在在地地中中海海地地区区居居住住的的人人群群发发病病率率特特别别高高而而得得名名，实实际际上上世世界界各各地地都都有有发发生生，非非洲洲和和东东南南亚也比较常见。亚也比较常见。珠蛋白基因珠蛋白基因缺失缺失/ /突变突变导致某种珠蛋白链合成障导致某种珠蛋白链合
23、成障碍造成碍造成链和链和链合成链合成数量不平衡数量不平衡，引起的溶血，引起的溶血性贫血称为性贫血称为地中海贫血。地中海贫血。 地中海贫血地中海贫血由于由于 珠蛋白基因的缺失或缺珠蛋白基因的缺失或缺 陷使陷使 链的合成受到抑制而引起的溶血性贫血。链的合成受到抑制而引起的溶血性贫血。特点：特点：b b 都表现为低色素性贫血都表现为低色素性贫血地地中中海海贫贫血血由由于于 珠珠蛋蛋白白基基因因的的缺缺失失或或缺缺陷陷使使 链的合成受到抑制而引起的溶血性贫血。链的合成受到抑制而引起的溶血性贫血。地地中中海海贫贫血血地地 中中 海海 贫贫 血血地中海贫血地中海贫血 每每条条1616号号染染色色体体上上有
24、有两两个个GeneGene缺缺失失程程度度不不同同，链链合合成成部部分分或或完完全全受受到到抑抑制制，导导致致不不同同类类型型的的地贫。地贫。 若若一一条条染染色色体体上上缺缺失失一一个个基基因因（）为为+ +地贫地贫，链合成减少。链合成减少。若若一一条条染染色色体体上上两两个个基基因因均均缺缺失失（ ）为为0 0地贫地贫，链不能合成。链不能合成。临床类型临床类型类类 型型症症 状状正常人正常人静止型静止型 + +地贫杂合子地贫杂合子无症状无症状轻轻 型型（标准型）（标准型） 0 0地贫杂合子地贫杂合子轻度贫血轻度贫血 + +地贫纯合子地贫纯合子血红蛋白血红蛋白H H病病 0 0地贫和地贫和
25、+ +地地贫双重杂合子贫双重杂合子溶血性贫血溶血性贫血Hb BartsHb Barts胎胎儿水肿综合征儿水肿综合征 0 0地贫纯合子地贫纯合子胎儿水肿胎儿水肿胎胎 儿儿 水水 肿肿 地贫的分子基础地贫的分子基础依依基因缺陷程度分为：基因缺陷程度分为：1 1GeneGene缺失型（缺失缺失型（缺失1 1个个基因）基因）2 2非非GeneGene缺失型（点突变）：无义突变、移码突变、缺失型（点突变）：无义突变、移码突变、终止密码突变、剪接突变等终止密码突变、剪接突变等结果结果 1 1 生成无功能或稳定性降低的生成无功能或稳定性降低的mRNAmRNA 无义突变无义突变 移码突变移码突变 终止密码突变
26、终止密码突变 起始密码突变起始密码突变 2 2 RNARNA加工突变加工突变 3 3 产生不稳定产生不稳定HbHb地中海贫血地中海贫血珠蛋白珠蛋白Gene Gene 突变或缺失突变或缺失珠蛋白链合成速珠蛋白链合成速率下率下 降降溶血性贫血溶血性贫血0 0 地贫地贫：链完全不能合成链完全不能合成 + + 地贫地贫：链可部分合成链可部分合成-地中海贫血临床分类地中海贫血临床分类临临 床床 类类 型型基基 因因 型型基基 因因 产产 物物临临 床床 表表 现现重型重型 地贫地贫 + +/ / + +、 0 0/ / 0 0 0 0/ /0 0、 + +/ / 0 0 链几乎不能合成链几乎不能合成 链
27、合成相对增加链合成相对增加Hb FHb F和和Hb AHb A2 2增高增高地中海贫血面容地中海贫血面容溶血性贫血（需溶血性贫血（需输血）输血）轻型轻型 地贫地贫 + +/ / A A、 0 0/ / A A0 0/ / A A能合成适量的能合成适量的 链链贫血不明显或轻贫血不明显或轻度贫血度贫血中间型中间型 地贫地贫 + +/ /+ + 链部分合成链部分合成介于重型和轻型介于重型和轻型之间（不需输血）之间（不需输血）遗传性胎儿遗传性胎儿血红蛋白持血红蛋白持续增多症续增多症缺失或突变缺失或突变 链和链和 链合成受抑制链合成受抑制 链合成明显增加链合成明显增加成人成人Hb FHb F持续增持续增
28、加，无症状加，无症状患儿颅骨及面颊部骨骼增大，头颅变大，额部隆起，颧高，鼻梁塌陷，两眼距离增宽，眼睑浮肿，形成地中海贫血的特殊面容。X线颅骨照片可见颅骨内外板变薄，板障增宽，在骨皮质间出现垂直短发样骨刺 -地中海贫血的分子基础地中海贫血的分子基础 地中海贫血已发现地中海贫血已发现100100多种突变类型，包括点突变和多种突变类型，包括点突变和 基因缺失。基因缺失。 绝大多数绝大多数 地中海贫血是由于地中海贫血是由于 基因发生点突变所致，突基因发生点突变所致，突 变涉及基因内及侧翼序列。变涉及基因内及侧翼序列。（1 1）编码区突变）编码区突变（2 2）非编码区突变）非编码区突变（3 3）启动子区
29、突变）启动子区突变（4 4）RNARNA裂解信号突变裂解信号突变（5 5）加帽位点单个碱基突变）加帽位点单个碱基突变编码区突变编码区突变 mRNA稳定性降低或形成无功能稳定性降低或形成无功能mRNA（1）无义突变）无义突变 密码子密码子17：AC 密码子密码子43：GT 0 地贫地贫（2）移码突变）移码突变 密码子密码子71/72：+A 密码子密码子41/42：TCTT 0 地贫地贫（3）起始密码突变）起始密码突变 ATGAGG 0 地贫地贫 内含子内含子I I G GTTA AT T丧失一个剪切信号。丧失一个剪切信号。 新的切点产生新的切点产生 同义突变同义突变激活激活II和和 ExonEx
30、on隐蔽裂解位点隐蔽裂解位点 如：如：G GGTGTAGAGT T 产生新的剪切点产生新的剪切点非编码区突变非编码区突变 影响影响mRNA剪切、加工过程剪切、加工过程GTATGGTAGTGGTAGT，激活隐蔽剪切位点，激活隐蔽剪切位点启动子区突变启动子区突变 降低降低mRNA的转录效率的转录效率-28-28位位AG AG 突变破坏了突变破坏了TATA BoxTATA Box。RNA裂解信号突变裂解信号突变 不能准确裂解和加不能准确裂解和加polyA珠蛋白基因珠蛋白基因 3侧翼序列中侧翼序列中AATAAAAACAAA加帽位点单个碱基突变加帽位点单个碱基突变 不能准确裂解和加不能准确裂解和加polyA加帽位点发生加帽位点发生AC颠换，影响转录效颠换，影响转录效率。通常是率。通常是mRNA的第一个核苷酸。的第一个核苷酸。 总 结 异常血红蛋白病和地中海贫血有异常血红蛋白病和地中海贫血有共同的分子基础共同的分子基础 突变、缺失突变、缺失 基因缺失基因缺失是引起是引起 地中海贫血的主要原因地中海贫血的主要原因 基因突变基因突变是引起是引起 地中海贫血的主要原因地中海贫血的主要原因 请注意：请注意：下次课下次课我们将学习我们将学习
