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1、1 12 2基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序必修复习：必修复习：选修新课：选修新课：1 1、提取目的基因、提取目的基因2 2、与运载体结合、与运载体结合3 3、导入受体细胞、导入受体细胞4 4、目的基因表达与检测、目的基因表达与检测1 1、获取目的基因、获取目的基因2 2、构建表达载体、构建表达载体3 3、导入受体细胞、导入受体细胞4 4、目的基因检测与鉴定、目的基因检测与鉴定四个步骤四个步骤: :429572439gao1 12 2基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序必修复习：必修复习：选修新课：选修新课：1 1、获取目的基因、获取目的基因2 2、构建表达载体、构建表达载
2、体3 3、导入受体细胞、导入受体细胞4 4、目的基因检测与鉴定、目的基因检测与鉴定四个步骤四个步骤: :为什么要进行为什么要进行429572439gao现代基因阶段现代基因阶段n基因的定义基因的定义基因是基因是DNADNA分子中含有特定遗传信息的一段分子中含有特定遗传信息的一段核苷酸序列，是遗传物质的最小功能单位。核苷酸序列，是遗传物质的最小功能单位。q基因的分类基因的分类将编码蛋白质的基因根据其是否具有转录和翻将编码蛋白质的基因根据其是否具有转录和翻将编码蛋白质的基因根据其是否具有转录和翻将编码蛋白质的基因根据其是否具有转录和翻译功能可以把基因分为三类。译功能可以把基因分为三类。译功能可以把
3、基因分为三类。译功能可以把基因分为三类。1.1.1.1.具有转录和翻译功能；具有转录和翻译功能；具有转录和翻译功能；具有转录和翻译功能；2.2.2.2.只有转录功能而没有翻译功能的基因，包括只有转录功能而没有翻译功能的基因，包括只有转录功能而没有翻译功能的基因，包括只有转录功能而没有翻译功能的基因，包括tRNAtRNAtRNAtRNA基因和基因和基因和基因和rRNArRNArRNArRNA基因；基因；基因；基因；3.3.3.3.不转录的基因，它对基因表达起调节控制作不转录的基因，它对基因表达起调节控制作不转录的基因，它对基因表达起调节控制作不转录的基因，它对基因表达起调节控制作用，包括启动基因
4、和操纵基因。用，包括启动基因和操纵基因。用，包括启动基因和操纵基因。用，包括启动基因和操纵基因。429572439gaon什么是基因什么是基因?(?(中学阶段理解）中学阶段理解）基因是基因是有遗传效应的有遗传效应的DNADNA片断片断，是决定生，是决定生物性状的基本单位。物性状的基本单位。每个每个DNADNA分子上有很多个基因，每个基因分子上有很多个基因，每个基因可以含有可以含有成百上千个脱氧核苷酸成百上千个脱氧核苷酸。不同基因中脱氧核苷酸的不同基因中脱氧核苷酸的排列顺序不同排列顺序不同，因此，因此不同的基因含有不同的遗传信息。不同的基因含有不同的遗传信息。429572439gaoDNA RN
5、ADNA RNARNA RNA 蛋白质蛋白质基因的表达基因的表达429572439gaon正品beely奇七效合一bb霜50g完美裸妆保湿遮瑕n购买地址nhttp:/ 为什么同一个体，胰岛细胞能合成胰为什么同一个体，胰岛细胞能合成胰岛素，而口腔上皮细胞却不能？是否基因岛素，而口腔上皮细胞却不能？是否基因组成是不同的？组成是不同的？429572439gao原核细胞的基因结构原核细胞的基因结构编码区编码区编码区编码区非编码区非编码区非编码区非编码区非编码区非编码区非编码区非编码区编码区上游编码区上游编码区上游编码区上游编码区下游编码区下游编码区下游编码区下游不能编码蛋白质不能编码蛋白质可调控遗传信
6、息的表达可调控遗传信息的表达( (调控序列调控序列) )编码蛋白质编码蛋白质( (编码序列编码序列) )429572439gao原核细胞的基因结构原核细胞的基因结构编码区编码区编码区编码区非编码区非编码区非编码区非编码区非编码区非编码区非编码区非编码区与与RNARNA聚合酶聚合酶结合位点结合位点 RNARNA聚合酶是由多个肽链聚合酶是由多个肽链构成的蛋白质，能识别并与构成的蛋白质，能识别并与调控序列中的结合位点结合调控序列中的结合位点结合, ,催化转录形成催化转录形成RNARNA。429572439gao非编码区非编码区非编码区非编码区编码区编码区编码区上游编码区上游 编码区下游编码区下游 与
7、与RNA聚酶聚酶结合位点结合位点RNA聚合酶能够识别调控序列中的结合位点，并与其结合。聚合酶能够识别调控序列中的结合位点，并与其结合。转录开始后，转录开始后，RNA聚合酶沿聚合酶沿DNA分子移动，并与分子移动，并与DNA分子的分子的一条链为模板合成一条链为模板合成RNA。转录完毕后，转录完毕后，RNA链释放出来，紧链释放出来，紧接着接着RNA聚合酶也从聚合酶也从DNA模板链上脱落下来。模板链上脱落下来。429572439gao与与RNARNA聚合酶聚合酶结合位点结合位点A G G U C A C G U C GA G G U C A C G U C GA G G U C A C G U C G
8、A G G U C A C G U C GA G G T C A C G T C GA G G T C A C G T C GA G G T C A C G T C GA G G T C A C G T C GT C C A G T G C A G CT C C A G T G C A G CT C C A G T G C A G CT C C A G T G C A G CRNARNARNARNA聚合酶聚合酶聚合酶聚合酶RNARNARNARNA聚合酶聚合酶聚合酶聚合酶RNARNARNARNA聚合酶聚合酶聚合酶聚合酶429572439gao知识构建知识构建1：原核细胞的基因结构：原核细胞的基因
9、结构结构结构功能功能编码区编码区能转录能转录 并并 蛋蛋白质白质编码区编码区上游上游编码区编码区下游下游非非编编码码区区是是 ，起起 作用作用终止转录终止转录mRNAmRNA（终止子）终止子）调控调控 的的表达表达mRNA编码编码RNA聚合酶结合位点聚合酶结合位点起动并催化转录起动并催化转录遗传信息遗传信息429572439gao真核细胞的基因结构真核细胞的基因结构编码区编码区编码区编码区非编码区非编码区非编码区非编码区非编码区非编码区非编码区非编码区编码区下游编码区下游编码区下游编码区下游调控遗传信息的表达调控遗传信息的表达调控遗传信息的表达调控遗传信息的表达( ( ( (调控序列调控序列调
10、控序列调控序列) ) ) )外显子外显子外显子外显子( ( ( (能编码蛋白质能编码蛋白质能编码蛋白质能编码蛋白质) ) ) )内含子内含子内含子内含子( ( ( (不能编码蛋白质不能编码蛋白质不能编码蛋白质不能编码蛋白质) ) ) )429572439gao非编码区非编码区非编码区非编码区编码区编码区与与RNARNA聚合酶聚合酶结合位点结合位点外显子外显子内含子内含子1 12 23 34 45 5加加 工工转转 录录mRNAmRNA前体前体成熟成熟mRNAmRNA加加 工工429572439gao知识构建知识构建2：真核细胞的基因结构：真核细胞的基因结构结构结构编编码码区区非编码区非编码区内
11、内含含子子外外显显子子能能够够 ，并并 序序列列能能够够 ，不不能能 序序列列（1 1）编码区是）编码区是 、 的的（2 2）在在不不同同的的基基因因中中所所含含的的 和和 数目不同数目不同（3 3）编编码码区区 占占的比例小，的比例小，大部分由大部分由 组成组成特点特点有有 序列序列 功能功能转录转录RNA编码蛋白质编码蛋白质转录转录RNA编码蛋编码蛋白质白质间隔的间隔的不连续不连续外显子外显子内含子内含子外显子外显子内含子内含子调控遗传信息的核苷酸调控遗传信息的核苷酸429572439gao原核细胞基因原核细胞基因真核细胞基因真核细胞基因相同点相同点不同点不同点原核细胞基因与真核细胞基因的
12、比较原核细胞基因与真核细胞基因的比较 都是由能够编码蛋白质的都是由能够编码蛋白质的都是由能够编码蛋白质的都是由能够编码蛋白质的编码区编码区编码区编码区和和和和具有调控作用的具有调控作用的具有调控作用的具有调控作用的非编码区非编码区非编码区非编码区组成。组成。组成。组成。编码区是编码区是编码区是编码区是连续连续连续连续的的的的编码区是编码区是编码区是编码区是间隔间隔间隔间隔的，的，的，的，是不连续的是不连续的是不连续的是不连续的429572439gao原原核核生生物物基基因因表表达达的的调调控控乳糖代谢基因表达调控图解：乳糖代谢基因表达调控图解：(没有乳糖时没有乳糖时) lacZ lacY la
13、cA 调节基因调节基因启动子启动子 操纵基因操纵基因结构基因结构基因RNA聚合酶聚合酶信使信使RNA转录转录翻译翻译阻抑物与阻抑物与操纵基因操纵基因结合，结结合，结构基因转构基因转录受阻录受阻阻抑物阻抑物429572439gao原原核核生生物物基基因因表表达达的的调调控控乳糖代谢基因表达调控图解：乳糖代谢基因表达调控图解：(有乳糖时有乳糖时) lacZ lacY lacA 调节基因调节基因启动子启动子 操纵基因操纵基因结构基因结构基因RNA聚合酶聚合酶信使信使RNA转录转录翻译翻译阻抑物与乳糖结合后构象发生了改变，因而不能与操阻抑物与乳糖结合后构象发生了改变，因而不能与操纵基因结合，使得结构基
14、因进行转录。纵基因结合，使得结构基因进行转录。阻抑物阻抑物乳糖乳糖转录转录半乳糖苷酶半乳糖苷酶酶酶酶酶429572439gao目的基因获取方法目的基因获取方法第一步：获取目的基因主要指编码蛋白质的结构基因，也可以是主要指编码蛋白质的结构基因，也可以是调控因子调控因子方法：基因的直接分离或人工合成。方法：基因的直接分离或人工合成。结果：获取含有所需要的完整的遗传信息的结果：获取含有所需要的完整的遗传信息的DNADNA片段。片段。1 1、从基因文库中获取、从基因文库中获取2 2、利用、利用PCRPCR技术扩增技术扩增429572439gao基因库基因库(gene pool):(gene pool)
15、:特定生物体全基因组的集合特定生物体全基因组的集合. .（天然存在）（天然存在） 基因组文库基因组文库（包含一种生物所有的基因）（包含一种生物所有的基因）cDNAcDNA文库文库（只含部分基因（只含部分基因) )根据构建方法的不同，基因文库分为：根据构建方法的不同，基因文库分为：1 1、从基因文库中获取、从基因文库中获取基因文库基因文库(gene library or gene bank):(gene library or gene bank):从特定生物从特定生物个体中分离的全部基因，这些基因以克隆的形式存在个体中分离的全部基因，这些基因以克隆的形式存在. .（人工构建）（人工构建）4295
16、72439gao基因组文库基因组文库c cDNA文库文库429572439gao组织或细胞染色体组织或细胞染色体DNA基因片断基因片断克隆载体克隆载体重组重组DNA分子分子含重组分子的转化菌含重组分子的转化菌限制性内切酶限制性内切酶受体菌受体菌克克隆隆载载体体: :为为使使插插入入的的外外源源DNADNA序序列列被被扩扩增增而而特意设计的载体。特意设计的载体。表表达达载载体体: :为为使使插插入入的的外外源源DNADNA序序列列可可转转录录翻翻译译成成多多肽肽链链而而特特意意设设计计的载体。的载体。(1)从基因组文库获取目的基因从基因组文库获取目的基因429572439gaomRNA cDNA
17、 双链双链cDNA 重组重组DNA分子分子 cDNA文库文库 反转录酶反转录酶 载体载体 受体菌受体菌 复制复制(2)从从cDNA文库获取目的基因文库获取目的基因 逆转录酶逆转录酶A A A A T T T T AAAASISI核酸酶核酸酶 DNA聚合酶聚合酶碱水解碱水解 T T T T429572439gao图为由图为由mRNA反转录形成反转录形成cDNA的过程的过程cDNA合成过程是：第一步，反转录酶以合成过程是：第一步，反转录酶以RNA为模板合为模板合成一条与成一条与RNA互补的互补的DNA单链，形成单链，形成RNA-DNA杂交杂交分子。第二步，核酸酶分子。第二步，核酸酶H使使RNA-D
18、NA杂交分子中的杂交分子中的RNA链降解，使之变成单链的链降解，使之变成单链的DNA。第三步，以单链第三步，以单链DNA为模板，在为模板，在DNA聚合酶的作用下合成另一条互补聚合酶的作用下合成另一条互补的的DNA链，形成双链链，形成双链DNA分子。分子。429572439gao基因组文库和基因组文库和cDNA文库的主要区别文库的主要区别429572439gao2 2、利用、利用PCRPCR技术扩增技术扩增(聚合酶链式反应聚合酶链式反应)变性变性复性复性( (退火退火) )延伸延伸氢键打开，形成氢键打开，形成模板链模板链引物与引物与DNADNA互补配对互补配对DNADNA聚合酶作用聚合酶作用使引
19、物延伸使引物延伸429572439gao1234脱氧核苷酸脱氧核苷酸DNADNA聚合酶聚合酶引引物物：人人工工合合成成的的, ,与与模模板板DNADNA上上所所要要扩扩增增的的DNADNA片片段段的的两两侧侧序序列列互互补补，长长度度为为20-2520-25碱碱基基的的寡寡核核苷苷酸单链。酸单链。变性变性 9595延伸延伸 7272退火退火 Tm-5Tm-5429572439gaoPCRPCR原理原理:DNA:DNA双链复制双链复制特点特点:1:1、体外复制、体外复制 2 2、大量获取目的基因（指数式增长）、大量获取目的基因（指数式增长） 3 3、原理和操作简单、原理和操作简单42957243
20、9gao3 3、化学合成法获取目的基因、化学合成法获取目的基因由已知氨基酸序列推测可能的由已知氨基酸序列推测可能的DNA序列序列根据蛋白质的根据蛋白质的氨基酸氨基酸顺顺序推算出序推算出mRNAmRNA核苷酸顺序，核苷酸顺序，再据此推算出再据此推算出基因基因DNADNA的脱氧的脱氧核苷酸顺序。用游离脱氧核核苷酸顺序。用游离脱氧核苷酸苷酸直接合成直接合成相应的基因。相应的基因。DNADNA合成仪合成仪429572439gao第二步：基因表达载体的构建使目的基因能稳定遗传、表达发挥作用启动子启动子：一段特殊结构的：一段特殊结构的DNADNA片段，片段，位于基因首端，是位于基因首端，是RNARNA聚合
21、酶识别和聚合酶识别和结合的部位。结合的部位。终止子终止子：使转录停止。：使转录停止。标记基因标记基因：鉴定受体细胞是否含有：鉴定受体细胞是否含有目的基因，进行细胞筛选。目的基因，进行细胞筛选。是指已知功能或已知座位的基因。是指已知功能或已知座位的基因。在基因工程中使用与选择重组体在基因工程中使用与选择重组体DNA转化细胞的基因；转化细胞的基因；在基因定位中是指定位在染色体或其它载体上的基因以在基因定位中是指定位在染色体或其它载体上的基因以作为其它基因定位的标记。作为其它基因定位的标记。 429572439gao体细胞克隆的成功为转基因动物生产掀起一场新的革命，动物体细胞克隆技术为迅速放大转基因
22、动物所产生的种质创新效果提供了技术可能。采用简便的体细胞转染技术实施目标基因的转移，可以避免家畜生殖细胞来源困难和低效率。同时，采用转基因体细胞系，可以在实验室条件下进行转基因整合预检和性别预选。在核移植前，先把目的外源基因和标记基标记基因因（如LagZ基因和新霉素抗生基因）的融合基因导入培养的体细胞中，再通过标记基因标记基因的表现来筛选转基因阳性细胞及其克隆，然后把此阳性细胞的核移植到去核卵母细胞中，最后生产出的动物在理论上应是100的阳性转基因动物。采用此法，Schnieke等（Bio Report，1997）已成功获得6只转基因绵羊，其中3只带有人凝血因子IX基因和标记标记基因基因（新霉
23、素抗性基因），3只带有标记基因标记基因，目的外源基因整合率高达50。Cibelli（Science，1997）同样利用核移植法获得3头转基因牛，证实了该法的有效性。由此可以看出，当今动物克隆技术最重要的应用方向之一，就是高附加值转基因克隆动物的研究开发。 429572439gao目的基因目的基因载体载体限制性内切酶限制性内切酶限制性内切酶限制性内切酶T4 DNA连接酶连接酶15C重组体重组体载体自连载体自连目的基因目的基因 自连自连429572439gao人人工工接接头头及及其其应应用用CCGAATTCG GGCTTAAGC5-3-Eco REco REco REco R429572439ga
24、o第三步：导入受体细胞导入方式：导入方式：转化转化 (transformation) 转染转染 (transfection) 感染感染 (infection)转化：转化：目的基因进入受体细胞内，并且在受体目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。细胞内维持稳定和表达的过程。（将质粒或其他外源 DNA 导入处于感受态的宿主细胞，并使其获得新的表型的过程。）感染：以噬菌体、粘性质粒和真核细胞病毒为载体的重组 DNA 分子，在体外经过包装成具有感染能力的病毒或噬菌体颗粒，感染适当的细胞并在细胞内扩增。转染：真核细胞主动摄取或被动导入外源 DNA 片段而获得新的表型的过程。4295
25、72439gao转化的方法：转化的方法：导入植物细胞导入植物细胞导入动物细胞导入动物细胞导入微生物细胞导入微生物细胞受体细胞应具备的条件受体细胞应具备的条件1 1、限制性缺陷型、限制性缺陷型（外切酶和内切酶活性缺陷（外切酶和内切酶活性缺陷（recBrecB- -，recCrecC- -，hsdRhsdR- -） 2 2、重组整合缺陷型重组整合缺陷型（用于基因扩增或高效表达的受体细胞（用于基因扩增或高效表达的受体细胞（recArecA- -）3 3、具有较高的转化效率具有较高的转化效率4 4、具有与载体选择标记互补的表型、具有与载体选择标记互补的表型5 5、感染寄生缺陷型、感染寄生缺陷型（防止重
26、组细菌扩散污染，生物武器除外（防止重组细菌扩散污染，生物武器除外 ）429572439gao1 1）导入植物细胞）导入植物细胞）导入植物细胞）导入植物细胞农杆菌转化法农杆菌转化法特点：特点：易感染易感染双子叶双子叶植物和植物和裸子裸子植物植物, ,可把可把TiTi质粒质粒上的上的T-DNAT-DNA转移到受体细胞，并转移到受体细胞，并整合整合到受体细胞染到受体细胞染色体的色体的DNADNA上上. .429572439gao429572439gao2) 2) 导入动物细胞导入动物细胞导入动物细胞导入动物细胞显微注射技术显微注射技术用口径为用口径为1 m1 m的的DNADNA注射器，将大量的目注射
27、器，将大量的目的基因片段注入到受精卵的核内，然后把的基因片段注入到受精卵的核内，然后把经过注射的受精卵移植到另一雌性动物的经过注射的受精卵移植到另一雌性动物的子宫内，使受精卵发育为转基因动物。子宫内，使受精卵发育为转基因动物。目的基因表达载体提纯目的基因表达载体提纯取卵取卵( (受精卵受精卵) )显微注射显微注射( (利用显微注射仪利用显微注射仪) )注射目的基因受精卵移植注射目的基因受精卵移植新性状动物新性状动物429572439gao429572439gao原核生物的特点原核生物的特点:繁殖快、单细胞、遗传物质繁殖快、单细胞、遗传物质少少2) 2) 导入微生物细胞导入微生物细胞导入微生物细
28、胞导入微生物细胞大肠杆菌转化过程大肠杆菌转化过程将细菌用将细菌用CaClCaCl2 2处理，处理，以增大细菌细胞壁的通透以增大细菌细胞壁的通透性。性。使含有目的基因的重组使含有目的基因的重组质粒进入受体细胞。质粒进入受体细胞。目的基因在受体细胞内，目的基因在受体细胞内，随其繁殖而复制，由于细随其繁殖而复制，由于细菌繁殖的速度非常快，在菌繁殖的速度非常快，在很短的时间内就能获得大很短的时间内就能获得大量的目的基因。量的目的基因。CaCa2+2+处理细胞处理细胞（感受态细胞）（感受态细胞） 表达载体与感受态细表达载体与感受态细胞混合胞混合感受态细胞吸收感受态细胞吸收DNADNA分子分子完成转化完成
29、转化429572439gao常用的受体细胞：常用的受体细胞：大肠杆菌、枯草杆菌、农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。将目的基因导入受体细胞的原理将目的基因导入受体细胞的原理借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。429572439gao第四步：目的基因的检测与鉴定DNADNA分子杂交技术分子杂交技术429572439gao探针探针 (probe)(probe)：一小段用一小段用同位素、生物素或同位素、生物素或荧光染料荧光染料标记其末端或全链的标记其末端或全链的已知序列的多已知序列的多聚核苷酸聚核苷酸，与固定在膜上的核苷酸结合，判，与固定在膜上的核苷酸结合，判断是否有断是否有同源同源的核酸分子存在。的核酸分子存
30、在。 标记物标记物同位素标记：同位素标记：32P非非放射性标记：荧光标记，放射性标记：荧光标记，生物素，生物素，dig(地高辛）地高辛）等等429572439gao1 1、检测转基因生物的染色体、检测转基因生物的染色体DNADNA上的上的目的基因目的基因2 2、检测目的基因是否转录、检测目的基因是否转录mRNAmRNA3 3、检测目的基因是否翻译检测目的基因是否翻译蛋白质蛋白质检测检测鉴定鉴定个体生物学水平鉴定个体生物学水平鉴定（如抗虫、抗病鉴定，基（如抗虫、抗病鉴定，基因工程产品与天然产品功因工程产品与天然产品功能进行活性比较等）能进行活性比较等）429572439gao大量的受体细胞接受不
31、多的目的基因。处理大量的受体细胞接受不多的目的基因。处理的受体细胞中真正摄入了目的基因的很少，必须的受体细胞中真正摄入了目的基因的很少，必须将它从中检测出来。将它从中检测出来。 将每个受体细胞单独培养形成菌落，检测菌落将每个受体细胞单独培养形成菌落，检测菌落中是否有目的基因的表达产物。淘汰无表达产物中是否有目的基因的表达产物。淘汰无表达产物的菌落，保留有表达产物的进一步培养、研究。的菌落，保留有表达产物的进一步培养、研究。无表达产物无表达产物无表达产物无表达产物有表达产物有表达产物无表达产物无表达产物429572439gao429572439gao基因工程的操作过程基因工程的操作过程切切接接转
32、转增增检检429572439gao重组重组DNADNA技术操作过程可形象归纳为技术操作过程可形象归纳为 小小 结结分分分离目的基因分离目的基因 切切限制酶切割目的基因与载体限制酶切割目的基因与载体接接连接重组体连接重组体 转转转入受体菌转入受体菌 筛筛筛选重组体筛选重组体 429572439gao 以以 质质 粒粒 为为 载载 体体 的的DNA 克克 隆隆 过过 程程429572439gao克隆克隆(clone)通过无性繁殖获得来自同一始祖的相同副本通过无性繁殖获得来自同一始祖的相同副本或拷贝的集合。而获取此同一拷贝的过程称或拷贝的集合。而获取此同一拷贝的过程称为为克隆化克隆化(cloning
33、)。DNA克隆克隆技术水平：技术水平：分子克隆分子克隆(molecular clone)即即DNA 克隆克隆 细胞克隆细胞克隆个体克隆（动物或植物）个体克隆（动物或植物）429572439gaoDNA克隆克隆应应用用酶酶学学的的方方法法，在在体体外外将将各各种种来来源源的的遗遗传传物物质质（同同源源的的或或异异源源的的、原原核核的的或或真真核核的的、天天然然的的或或人人工工的的DNA）与与载载体体DNA接接合合成成一一具具有有自自我我复复制制能能力力的的DNA分分子子复复制制子子(replicon)，继继而而通通过过转转化化或或转转染染宿宿主主细细胞胞，筛筛选选出出含含有有目目的的基基因因的的
34、转转化化子子细细胞胞，再再进进行行扩扩增增提提取取获获得得大大量量同同一一DNA分分子子，也也称称基基因因克克隆隆或或重重组组DNA (recombinant DNA) 。 429572439gaoTransform+report gene substrates429572439gao1、有关基因工程的叙述中，错误的是（ ） A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来 B、 限制性内切酶用于目的基因的获得 C、目的基因须由运载体导入受体细胞 D、 人工合成目的基因不用限制性内切酶A2、有关基因工程的叙述正确的是 （ ） A、限制酶只在获得目的基因时才用 B、重组质粒的形成在细胞内完成 C、质粒都可作为运载体 D、蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料D练习练习429572439gao3、基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是 （ ） A、人工合成目的基因 B、目的基因与运载体结合 C、将目的基因导入受体细胞 D、目的基因的检测和表达C练习练习429572439gao
