蛋白质连接技术

蛋白质连接技术蛋白质连接技术蛋白质交联系指将小分子物质（如药物、半抗原等）或大分子大分子物质(如酶、蛋白毒素等)以共价键的方式连接于蛋白质分子，以制备人工抗原、酶标抗体、载体释放药物、抗体导向药物和免疫毒素等交联方法交联方法游离氨基游离氨基 游离羧基游离羧基 苯基苯基 酚基酚基巯基巯基 羟基羟基 咪唑基咪唑基 吲哚基吲哚基 胍基胍基重氮化法重氮化法：： 蛋白蛋白质 连接分子接分子酚羟基的邻位、咪唑环、吲哚环 含芳香胺的化合物副反副反应多，故一般限于人工抗原的制多，故一般限于人工抗原的制备戊二戊二醛法：法：连接两个伯胺接两个伯胺最温和的交联反应之一，可在4~40℃温度范围，pH6.0~8.0的缓冲水溶液中进行，但是缓冲组份中不得含有氨基化合物，本交联方法易形成相同蛋白间的连接；产物的均二性较差因此，多用于酶标抗体的制备过碘酸碘酸盐氧化法氧化法：：蛋白蛋白质 连接分子接分子 氨基 邻二醇比比较温和，可在常温和中性温和，可在常温和中性pH的条件下的条件下进行行混合酸混合酸酐法法：：蛋白蛋白质 连接分子接分子 伯氨基 羧基碳二碳二亚胺法胺法：：蛋白蛋白质 连接分子接分子 伯氨基 羧基由于碳二亚胺的缩合反应没有选择性；易形成蛋白分子间的自身聚合，产生非均一性产物；先将含羧基的药物或半抗原分子与EDC反应，活化羧基后，再加入蛋白反应物，可以减少蛋白分子交联活活泼酯法法：：蛋白蛋白质 连接分子接分子 伯氨基 羧基多元酸多元酸酐法法：：蛋白蛋白质 连接分子接分子 伯氨基 氨基、羟基二异二异氰酸酸酯法法：： 蛋白蛋白质 连接分子接分子 伯氨基 氨基偶氮苯甲酸法偶氮苯甲酸法：：蛋白蛋白质 连接分子接分子 伯氨基 苯基O—羧甲基甲基羟胺法胺法：：蛋白蛋白质 连接分子接分子 伯氨基 酮基对-肼基苯甲酸法基苯甲酸法：：叠氮化法叠氮化法：：蛋白蛋白质 连接分子接分子 伯氨基 羧酸甲酯衍生物氯乙酸乙酸钠法法：：蛋白蛋白质 连接分子接分子 伯氨基 羟基亚胺酸胺酸酯法法：：蛋白蛋白质 连接分子接分子 伯氨基 氨基卤代硝基苯法代硝基苯法：： 蛋白蛋白质 连接分子接分子 氨基、羟基、巯基 氨基、羟基、巯基Mannich反反应法法：：蛋白蛋白质 连接分子接分子 伯氨基 酮、酚类苯苯醌法法：： 蛋白蛋白质 连接分子接分子 氨基、羟基、巯基 氨基、羟基、巯基E11man试剂法法：：两分子蛋白的连接E11man试剂即5．5’—二硫—2，2’—双硝基苯甲酸(DTNB)，该试剂可以与巯基作用马来来酰亚胺基胺基类活活泼酯法法：：蛋白蛋白质 连接分子接分子 伯氨基 巯基SPDP试剂法法：：异型双功能交联剂N-羟基琥珀亚胺基-3—(2-吡啶基二硫)—丙酸酯(SPDP)蛋白蛋白质 连接分子接分子 伯氨基 巯基、氨基苯丁酸氮芥衍生物法苯丁酸氮芥衍生物法：：蛋白蛋白质 连接分子接分子 伯氨基 氨基卤代乙代乙酰衍生物法衍生物法：：连接基团：氨基、巯基双双马来来酰亚胺胺试剂法法：：连接两个巯基三三氯三三嗪试剂法法：：蛋白蛋白质 连接分子接分子 伯氨基 羟基必须注意，第一个分子中不能含有氨基及巯基等亲核性较强的基团，否则，易形成自身聚合。