中药制剂含量测定

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1、中药指纹图谱与特征指纹图谱中药指纹图谱与特征指纹图谱v指纹图谱：指纹图谱：系指中药包括中药材、饮片、提取物或中成药系指中药包括中药材、饮片、提取物或中成药经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示该中经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示该中药主要化学成分特性的色谱或光谱图谱，中药质量评价中常药主要化学成分特性的色谱或光谱图谱，中药质量评价中常用色谱指纹图谱。用色谱指纹图谱。v特征指纹图谱：系指从中药指纹图谱中选取若干专属性强特征指纹图谱：系指从中药指纹图谱中选取若干专属性强的色谱峰或色谱峰组合组成特征指纹图谱。主要用于中药的的色谱峰或色谱峰组合组成特征指纹图谱。主要用于中药的

2、专属性鉴别。专属性鉴别。中药制剂教研室特点特点中药制剂教研室特点特点中药制剂教研室中药制剂教研室中药制剂分析工作的基本程序？ 一、取样 二、供试品溶液的制备 三、鉴别 四、检查 五、含量测定 六、原始记录和检验报告复 习中药制剂教研室复复 习习TLC鉴别的实验步骤？供试品溶液的制备供试品溶液的制备 对照物的选择对照物的选择薄层板的制备薄层板的制备点样点样展开展开显色与检视显色与检视结果记录与保存结果记录与保存 中药制剂教研室1. 对照品对照：一种或几种对照品对照品对照：一种或几种对照品2. 阴阳对照法：阳性对照液阴阳对照法：阳性对照液/阴性对照液阴性对照液3. 对照药材和对照品同时对照对照药材

3、和对照品同时对照 对照物的选择？复复 习习中药制剂教研室第四章 中药制剂的含量测定 中药制剂教研室大纲要求大纲要求掌握中药制剂含量测定的目的特点掌握中药制剂含量测定的目的特点掌握含量测定样品处理的目的及作用掌握含量测定样品处理的目的及作用掌握方法学考察试验内容掌握方法学考察试验内容熟悉样品提取分离常见的方法及其特点熟悉样品提取分离常见的方法及其特点熟悉色谱法分离净化样品常用填料及其特点熟悉色谱法分离净化样品常用填料及其特点中药制剂教研室概概 述述目的目的 通过制剂中某种成分的通过制剂中某种成分的含量高低含量高低是否符是否符合规定来判定药物是否合格合规定来判定药物是否合格意义意义 保证中药制剂的

4、质量，达到临床用药保证中药制剂的质量，达到临床用药有效、安全、稳定有效、安全、稳定 第一节第一节 样品处理样品处理中药制剂教研室含量测定样品的处理含量测定样品的处理1.除去杂质、纯化样品，提高分析方法的重现性和除去杂质、纯化样品，提高分析方法的重现性和准确度准确度2.富集浓缩或进行衍生化富集浓缩或进行衍生化3.制成便于分析测定的稳定试样制成便于分析测定的稳定试样4.使试样的形式及所用溶剂符合分析测定的要求使试样的形式及所用溶剂符合分析测定的要求目目 的的中药制剂教研室含量测定样品的处理含量测定样品的处理1. 粉碎粉碎2. 提取提取3. 分离净化分离净化步步 骤骤中药制剂教研室含量测定样品的处理

5、含量测定样品的处理一、样品的粉碎一、样品的粉碎目的：目的：1.保证所取样品均匀而有保证所取样品均匀而有代表性代表性，提高测定结果的，提高测定结果的精密度和准确度精密度和准确度2.加速被测定组分的加速被测定组分的提取完全提取完全中药制剂教研室含量测定样品的处理含量测定样品的处理一、样品的粉碎一、样品的粉碎1.避免过细2.避免样品受污染3.避免粉尘飞散及挥发性成分的损失4.避免丢弃不易通过筛孔的部分颗粒粉碎机、研钵、高速匀浆机、玻璃匀浆器粉碎机、研钵、高速匀浆机、玻璃匀浆器细粉：全部通过5号筛（80目），并含能过6号筛（100目）不少于95的粉末注 意设设 备备中药制剂教研室含量测定样品的处理含量

6、测定样品的处理二、样品的提取二、样品的提取 冷浸法（浸泡提取法）冷浸法（浸泡提取法） 回流提取法回流提取法 连续回流提取法连续回流提取法 超声提取法超声提取法 超临界流体提取法超临界流体提取法中药制剂教研室含量测定样品的处理含量测定样品的处理浸泡提取法中供试品的制备方式1.1.部分测定法（分量法）：部分测定法（分量法）： 即将浸泡后的溶液，即将浸泡后的溶液，用适宜滤器滤过，精密量取一定体积，进行用适宜滤器滤过，精密量取一定体积，进行测定测定注：此法不适宜挥发性较大的提取溶剂注：此法不适宜挥发性较大的提取溶剂中药制剂教研室含量测定样品的处理含量测定样品的处理浸泡提取法中供试品的制备方法2.全部测

7、定法（即总量测定法）：将浸泡后的溶液将浸泡后的溶液滤过，滤渣充分用溶剂洗涤至滤过，滤渣充分用溶剂洗涤至提取完全，合并滤，合并滤液及洗液，浓缩或蒸干，残留物用另一溶剂溶解，液及洗液，浓缩或蒸干，残留物用另一溶剂溶解，定量转入量瓶中，稀释至刻度，摇匀，进行测定，稀释至刻度，摇匀，进行测定 注意：注意： 转移完全转移完全中药制剂教研室乙肝宁颗粒（黄芪甲苷）中国药典2005年版一部P291 供试品溶液的制备 取装量差异下的本品，研细，取约5g或1g（无蔗糖），精密称定，加水20ml使溶解，用以水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液20ml分2次洗涤，取正丁醇液，用以正丁醇饱和

8、的水20ml分2次洗涤，取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。中药制剂教研室三、样品的分离净化三、样品的分离净化原则原则：从提取液中：从提取液中除去对测定有干扰的杂质，而除去对测定有干扰的杂质，而又不损失被测定成分又不损失被测定成分依据依据：被测定成分和杂质在理化性质上的差异，被测定成分和杂质在理化性质上的差异，结合测定方法的要求结合测定方法的要求中药制剂教研室含量测定样品的处理含量测定样品的处理三、样品的分离净化（色谱法）三、样品的分离净化（色谱法）固相萃取（固相萃取（ Solid-Phase ExtractionSolid-Ph

9、ase Extraction ）/液液-固萃固萃取（取（Liquid-Solid Extraction)Liquid-Solid Extraction) 当目标分析物与SPE填料极性相似时，样品流过SPE柱后，目标化合物在填料上有较好的保留，而极性与填料相差较远的非目标化合物或杂质直接流出，再用适当洗脱液把目标化合物洗脱、收集，可直接分析或浓缩后分析；或使杂质保留于柱上，直接洗脱被测成分进行测定。原原 理理中药制剂教研室含量测定样品的处理含量测定样品的处理LSE常用的净化剂（填料）常用的净化剂（填料）硅胶、氧化铝硅胶、氧化铝键合相硅胶键合相硅胶大孔树脂大孔树脂聚酰胺聚酰胺硅藻土硅藻土离子交换树

10、脂离子交换树脂中药制剂教研室含量测定样品的处理含量测定样品的处理硅胶硅胶作用机制作用机制：溶质在吸附剂表面的极性吸附作用：溶质在吸附剂表面的极性吸附作用特点：特点：通常适于通常适于酸性和中性物质酸性和中性物质的分离；如分离的分离；如分离碱性物质碱性物质，可在展开剂中，可在展开剂中加入少量稀碱加入少量稀碱（如三乙醇（如三乙醇胺）胺）常见的商品硅胶柱为常见的商品硅胶柱为SEP-PAKLSELSE常用的净化剂常用的净化剂中药制剂教研室含量测定样品的处理含量测定样品的处理键合相硅胶键合相硅胶 借助于化学反应的方法将固定液的官能团键合在硅胶的表面而构成键合相硅胶键合相硅胶。 有机硅烷与硅胶表面化学键合反

11、应，形成的-Si-O-Si-C-键是对溶剂、热和化学稳定的结构LSELSE常用的净化剂常用的净化剂中药制剂教研室含量测定样品的处理含量测定样品的处理键合相硅胶键合相硅胶 常用的有十八烷基（octadecylsilane； C18/ ODS)、氨基、氰基键合相键合相硅胶。分别将氨丙硅烷基（-Si-CH2-CH2-CH2-NH2）及氰乙硅烷基（-Si-CH2-CH2-CN）键合在硅胶上而制成。LSELSE常用的净化剂常用的净化剂中药制剂教研室中药制剂教研室含量测定样品的处理含量测定样品的处理氧化铝氧化铝类型：类型：碱性氧化铝、中性氧化铝和酸性氧化铝碱性氧化铝、中性氧化铝和酸性氧化铝分离机制：溶质在

12、吸附剂表面的分离机制：溶质在吸附剂表面的极性吸附作用极性吸附作用碱性氧化铝碱性氧化铝适于适于碱性和中性物质碱性和中性物质的分离的分离酸性和中性氧化铝酸性和中性氧化铝适于分析适于分析酸性和中性物质酸性和中性物质LSELSE常用的净化剂常用的净化剂中药制剂教研室八宝坤八宝坤顺丸顺丸中国药中国药典典20052005年年版一部版一部P311P311 对照品溶液的制备 取芍药苷芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含30ug的溶液，摇匀，即得。 供试品溶液的制备 取重量差异项下的本品，剪碎，取约2g，精密称定，精密加入70%甲醇50ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇

13、补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液25ml，通过中性氧化铝柱（100200目，2g，内径1cm，用50%甲醇湿法装柱），收集至50ml量瓶中，再用50%甲醇洗脱，收集洗脱液至近刻度，加50%甲醇至刻度，摇匀，即得。 测定法 分别精密吸取对照品溶液10ul与供试品溶液10 15ul，注入液相色谱仪，测定，即得。mg。中药制剂教研室中药制剂教研室含量测定样品的处理含量测定样品的处理大孔树脂大孔树脂类型：类型：极性和非极性极性和非极性特点：表面积大，传质速率较高，具有不同的极特点：表面积大，传质速率较高，具有不同的极性及适于吸附较大分子性及适于吸附较大分子极性大孔树脂极性大孔树脂：为丙稀酰胺聚合物

14、，：为丙稀酰胺聚合物，对极性化合对极性化合物有相对强的吸附力物有相对强的吸附力非极性大孔树脂非极性大孔树脂：为苯乙烯和二乙烯苯的共聚物，：为苯乙烯和二乙烯苯的共聚物，对对非极性水溶性成分有吸附力非极性水溶性成分有吸附力LSELSE常用的净化剂常用的净化剂中药制剂教研室含量测定样品的处理含量测定样品的处理大孔树脂大孔树脂使用处理：使用前用甲醇、乙醇、丙酮等有机使用处理：使用前用甲醇、乙醇、丙酮等有机溶剂除去杂质溶剂除去杂质LSELSE常用的净化剂常用的净化剂中药制剂教研室含量测定样品的处理含量测定样品的处理聚酰胺聚酰胺机制：主要通过与溶质机制：主要通过与溶质形成氢键而产生吸附作用形成氢键而产生吸

15、附作用用于用于含酚、酸、醌含酚、酸、醌类药物样品液的净化分离类药物样品液的净化分离LSELSE常用的净化剂常用的净化剂中药制剂教研室含量测定样品的处理含量测定样品的处理硅藻土、纤维素硅藻土、纤维素亲水性填料亲水性填料机制：机制：分配作用分配作用应用：多以水基质液为固定相，与水不混溶的应用：多以水基质液为固定相，与水不混溶的有机溶剂为流动相，较亲脂的成分从固定相转移有机溶剂为流动相，较亲脂的成分从固定相转移到流动相，而被洗脱。到流动相，而被洗脱。LSELSE常用的净化剂常用的净化剂中药制剂教研室含量测定样品的处理含量测定样品的处理离子交换树脂离子交换树脂特点：可除去样品中的离子，防止组分分解，用

16、特点：可除去样品中的离子，防止组分分解，用于萃取样品液中可解离化合物于萃取样品液中可解离化合物弱酸性药物：中性和碱性条件下用阴离子交换树弱酸性药物：中性和碱性条件下用阴离子交换树脂柱，水及有机溶剂洗脱后，酸性溶液洗目标成分脂柱，水及有机溶剂洗脱后，酸性溶液洗目标成分LSELSE常用的净化剂常用的净化剂中药制剂教研室含量测定样品的处理含量测定样品的处理q活化 以与样品溶剂性质相似的溶剂对SPE柱进行活化， 用量 约1-2ml/100mg。q上样 液态或溶解后的样品倒入活化后的SPE柱，使样品匀速通过SPE柱。q淋洗 用洗脱能力较弱的溶剂淋洗，以去除杂质。q洗脱 用洗脱能力较强的溶剂把仍保留在填料

17、上的目标化合物洗脱、收集。LSELSE使用方法使用方法中药制剂教研室中药制剂教研室LLE与与LSE法的区别法的区别 成本低：减少溶剂的使用量 回收率高 精确度高：无乳化现象 蒸发少 安全 易自动化含量测定样品的处理含量测定样品的处理中药制剂教研室常用定量分析方法常用定量分析方法一、化学分析法一、化学分析法(5)(5)二、可见紫外分光光度法二、可见紫外分光光度法(4)(4)三、三、薄层扫描法薄层扫描法(3)(3)四、气相色谱法四、气相色谱法(2)(2)五、高效液相色谱法五、高效液相色谱法(1)(1)六、荧光分析法六、荧光分析法(6)(6)七、原子吸收分光光度法七、原子吸收分光光度法(7)(7)八

18、、高效毛细管电泳法八、高效毛细管电泳法中药制剂教研室系统适应性内容系统适应性内容一、理论踏板数 二、分离度三、重复性四、拖尾因子中药制剂教研室 理论塔板数理论塔板数( (有效塔板数有效塔板数) )是是衡量色谱柱分离能力高低的重要指标，买来一个色谱柱，一高低的重要指标，买来一个色谱柱，一定先看它给出的柱效指标定先看它给出的柱效指标(N)(N)，就是指，就是指N N的大小，的大小，只有只有N N比较大，对难分离的物质才能够给出满比较大，对难分离的物质才能够给出满意的结果。意的结果。理论踏板数系统适应性内容系统适应性内容中药制剂教研室定义定义 在规定的色谱条件下，注入供试品溶液或内标物质溶液，记录色

19、谱图，量出供试品主成分峰或内标物质峰的保留时间（tR)和半高峰宽(Wh/2)，按下式计算色谱柱的理论塔板数。N=5.54(tR / Wh/2)2保留时间保留时间保留时间保留时间t tR R：从进样开始到组分出现浓度极大点时所需时：从进样开始到组分出现浓度极大点时所需时间，即组分通过色谱柱所需要的时间间，即组分通过色谱柱所需要的时间理论踏板数系统适应性内容系统适应性内容中药制剂教研室系统适应性内容系统适应性内容色谱图：样品被流动相冲洗，通过色谱柱，流经检测器，所得到的信号洗脱时间曲线称为色谱流出曲线（简称流出曲线），即色谱图中药制剂教研室半峰宽W W1/21/2：峰高一半处所对应：峰高一半处所对

20、应的峰宽的峰宽峰宽W W：正态分布色谱曲线两拐点切线与基线相交的截距：正态分布色谱曲线两拐点切线与基线相交的截距系统适应性内容系统适应性内容中药制剂教研室 指待测峰与其他峰、内标峰或特定的杂指待测峰与其他峰、内标峰或特定的杂质对照峰之间的分离情况。质对照峰之间的分离情况。分离度衡量色谱分离条件优劣的参数衡量色谱分离条件优劣的参数系统适应性内容系统适应性内容TLC中药制剂教研室中药制剂教研室 取对照品溶液，连续进样取对照品溶液，连续进样5 5次次，求峰面积，求峰面积的相对标准偏差（的相对标准偏差（RSD),RSD),一般应不大于一般应不大于重复性系统适应性内容系统适应性内容HPLC/GC 同一供

21、试品溶液在同一供试品溶液在同一薄层板上同一薄层板上平行点样的平行点样的待测成分的峰面积测量值的相对标准偏差应不待测成分的峰面积测量值的相对标准偏差应不大于大于，需显色后测定，需显色后测定的相对标准偏差不大于的相对标准偏差不大于TLC中药制剂教研室 拖尾因子T=W/2d1W0.05h: 为峰高处的峰宽d1：为峰顶点至峰前沿之间的距离T应在之间(峰高法定量时）系统适应性内容系统适应性内容中药制剂教研室方法学验证（效能指标）方法学验证（效能指标）一、专属性一、专属性二、线性与范围二、线性与范围三、精密度试验三、精密度试验四、准确度试验四、准确度试验五、稳定性试验五、稳定性试验六、检测灵敏度及检测限的

22、测定六、检测灵敏度及检测限的测定七、耐用性七、耐用性中药制剂教研室专属性专属性（specificity specificity ） v 指在其他成分（杂质、降解物、辅料等）可能指在其他成分（杂质、降解物、辅料等）可能存在情况下，存在情况下，采用的方法能准确测定出被测物的特采用的方法能准确测定出被测物的特性，性，能反映该方法在有共存物时能反映该方法在有共存物时对供试物准确而专对供试物准确而专属的测定能力属的测定能力，是指，是指该法用于复杂样品分析时是否该法用于复杂样品分析时是否受到相互干扰程度的度量。受到相互干扰程度的度量。方法学验证（效能指标）方法学验证（效能指标）中药制剂教研室A:阴性对照溶

23、液色谱图；B:欧前胡素对照品溶液色谱图；C:供试品溶液色谱图方法学验证（效能指标）方法学验证（效能指标）中药制剂教研室线性线性（LinearityLinearity）与范围）与范围 设计的范围内，测试设计的范围内，测试结果结果与试样中与试样中被测物浓被测物浓度度直接呈正比关系的程度直接呈正比关系的程度。方法学验证（效能指标）方法学验证（效能指标）线性的含义线性的含义线性考察的方法线性考察的方法浓度点n应为57，用浓度c对峰高h或被测物的响应值之比进行回归处理，建立回归方程，r（TLC 0.995)中药制剂教研室线性线性（LinearityLinearity）与范围）与范围 确定样品浓度与峰面积

24、确定样品浓度与峰面积/ /峰高是否呈线性关系峰高是否呈线性关系 确定线性范围确定线性范围 直线是否通过原点直线是否通过原点方法学验证（效能指标）方法学验证（效能指标）目的范围的含义 指达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高、低限浓度或量的区间中药制剂教研室qqqqg)g)峰面积峰面积均值均值0.08106201.02885201.0119200.994900.24318605.17249609.8347614.496890.32424805.34619804.7837804.22125804.221250.486361211.549191211.549191211.23081211.2

25、3081210.912351210.912350.648481617.023321617.023321614.73281614.73281612.442381612.442380.810602006.691772006.691772006.55982006.55982006.42786中药制剂教研室中药制剂教研室精密度试验精密度试验（precision）定义 指在规定条件下，指在规定条件下，同一个同一个均匀样品，经多均匀样品，经多次取样测定所得次取样测定所得结果之间的接近程度结果之间的接近程度。用偏差。用偏差（d d）、）、标准偏差标准偏差(SD)(SD)、相对标准偏差相对标准偏差(RSD)(

26、RSD)（变异系数，（变异系数，CVCV）表示）表示。方法学验证（效能指标）方法学验证（效能指标）中药制剂教研室重复性重复性 (repeatability)中间精密度（中间精密度（mid-precision)mid-precision)重现性重现性(reproducibility)精密度试验精密度试验（precision）方法学验证（效能指标）方法学验证（效能指标）中药制剂教研室 在相同条件下，由同一个分析人员测定所得在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度。结果的精密度。重复性重复性(repeatability)(repeatability)方法学验证（效能指标）方法学验证（效能指

27、标） 在规定的范围内，取同一浓度的供试品，至少测6次进行评价或设计3个不同浓度，每个浓度各分别制备3份供试品溶液进行测定，用9次测定结果评价定定 义义要要 求求编号编号取样量（取样量（ml）峰面积峰面积平均峰面积平均峰面积测得量（测得量（g）含量（含量（g/ml）平均值（平均值（g/ml）RSD（%）14.004.00894.21088894.21088898.50323896.357055896.357055182.093182.09345.5245.5244.701.0924.00867.93341867.21960867.576505867.576505176.246176.24644.

28、0644.0634.00876.81049878.23889877.52469877.52469178.267178.26744.5744.5744.00885.51129883.42120884.466245884.466245179.678179.67844.9244.9254.00879.37677877.07513878.22595878.22595178.410178.41044.644.664.00875.81073877.34985876.58029876.58029178.076178.07644.5244.52取同一批号（取同一批号（20100701）的本品）的本品4 ml，

29、精密量取，平行取，精密量取，平行取6份，依法制成供份，依法制成供试品溶液，分别量取试品溶液，分别量取20l各供试品溶液及对照品溶液注入液相色谱仪测定，各供试品溶液及对照品溶液注入液相色谱仪测定，计算欧前胡素含量及相对标准偏差，结果见表，表明方法重复性好。计算欧前胡素含量及相对标准偏差，结果见表，表明方法重复性好。中药制剂教研室 2. 中间精密度 同一实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备所得结果的精密度。 3. 重现性(reproducibility)不同实验室，不同分析人员测定结果的精密度。方法学验证（效能指标）方法学验证（效能指标）已有重现性验证，不需验证中间精密度重现性只有在该分析方法

30、将被法定标准采用时做中药制剂教研室偏差（d）：测量值与平均值之差方法学验证（效能指标）方法学验证（效能指标）中药制剂教研室标准（偏）差（SD或S）方法学验证（效能指标）方法学验证（效能指标）中药制剂教研室相对标准（偏）差（RSD）也称变异系数（CV）方法学验证（效能指标）方法学验证（效能指标）中药制剂教研室 指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，用百分回收率表示。准确度（accuracy）方法学验证（效能指标）方法学验证（效能指标）定 义 回收试验法 加样回收试验法 方 法中药制剂教研室空白+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M。1、回收试验（化学药品）准确度（accurac

31、y）方法学验证（效能指标）方法学验证（效能指标）中药制剂教研室 已准确测定药物含量P的真实样品+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M2、加样回收试验（中药）准确度（accuracy）方法学验证（效能指标）方法学验证（效能指标）中药制剂教研室 规定的范围内，取同一浓度的供试品，用6个测定结果进行评价或设计3个不同浓度，每个浓度各分别制备3份供试品溶液进行测定，用9次测定结果评价 中间浓度加入量与供试品含量控制在1：1 一般要求在95105%范围内 RSD一般在3%以内数据要求准确度（accuracy）方法学验证（效能指标）方法学验证（效能指标）编号编号取样量（取样量（ml）原有量（原有量

32、（g）加入量（加入量（g）测得量（测得量（g）回收率（回收率（%）平均回收率（平均回收率（%）RSD（%）高高13134.1137.808277.422277.422104.01104.0199.022.972.97高高23134.1137.808266.541266.54196.1196.11高高33134.1137.808273.726273.726101.32101.32中中1289.491.868180.066180.06698.6998.69中中2289.491.868182.147182.147100.96100.96中中3289.491.868177.554177.55495.9

33、695.96低低1144.745.93489.61289.61297.7897.78低低2144.745.93488.56688.56695.5095.50低低3144.745.93491.03991.039100.88100.88中药制剂教研室 目的目的 选定最佳的测定时间范围选定最佳的测定时间范围 方法方法 取对照品和样品液各一份，分别在制备后取对照品和样品液各一份，分别在制备后4 4、8 8、1212、1616、2424、48h48h测定测定 求求RSD2.0%RSD2.0%稳定性试验时间时间0h4h8h12h32h40h48hRSD(%)供试品供试品885.8881879.853287

34、8.0195880.7465883.9976894.3388898.10.8608对照品对照品530.5790528.9254531.8159535.3059535.3739541.4097542.50.9771中药制剂教研室检测限（limit of detection， LOD）定义定义 指试样在确定的实验条件下，被测物能被检测出的最低浓度或含量。要求 是限度检验效能指标，无需定量测定，只要指出高于或低于该规定浓度即可。方法学验证（效能指标）方法学验证（效能指标）中药制剂教研室检测限（limit of detection， LOD）确定确定LOD方法方法1.直观法：用一系列已知浓度的供试品进

35、行分析，试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量2.信噪比法：把已知低浓度供试品测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，算出能被可靠地检测出的最低浓度或量。 方法学验证（效能指标）方法学验证（效能指标）一般以信噪比为3：1或2：1时相应浓度或注入仪器的量确定检测限中药制剂教研室 指样品中被测物能被定量测定的最低量，结果应具有一定准确度和精密度要求。 常用信噪比法确定定量限，一般以信噪比（S/N）为101时相应的浓度或注入仪器的量进行确定。定量限（limit of quantitaion， LOQ）方法学验证（效能指标）方法学验证（效能指标）中药制剂教研室1.1.指测定条件有小的变动时，测定结果不受

36、影响的承受程度，为常指测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为常规检验提供依据。规检验提供依据。2.2.开始研究分析方法时，就应考虑其耐受性开始研究分析方法时，就应考虑其耐受性3.3.如果条件要求苛刻，应在方法中写明如果条件要求苛刻，应在方法中写明4.4.变动因素：测试液的稳定性、样品提取次数、时间变动因素：测试液的稳定性、样品提取次数、时间5.5.液相色谱法：液相色谱法：流动相的组成和流动相的组成和pHpH值，不同厂牌或不同批号的同类值，不同厂牌或不同批号的同类色谱柱、柱温，流速等。色谱柱、柱温，流速等。法：不同厂牌或批号的色谱柱、固定相，不同类型的担体及柱温、法：不同厂牌或批号

37、的色谱柱、固定相，不同类型的担体及柱温、进样口和检测器温度等进样口和检测器温度等法：吸附剂或薄层板的型号和厂牌，展开时的温度、湿度等法：吸附剂或薄层板的型号和厂牌，展开时的温度、湿度等耐受性方法学验证（效能指标）方法学验证（效能指标）柱温变动的影响柱温变动的影响 样品样品不同柱温条件下峰面积不同柱温条件下峰面积相对标准偏差相对标准偏差% %35352525对照品对照品535.3740(32h)535.3740(32h)541.07400.68920.6892537.1292(32h)537.1292(32h)541.9327供试品供试品883.9976(32h)883.9976(32h)889

38、.91310.21900.2190887.3354(32h)887.3354(32h)886.9148中药制剂教研室流动相组成比例变化的影响流动相组成比例变化的影响 样品样品不同流动相组成条件下峰面积不同流动相组成条件下峰面积相对标准偏差相对标准偏差% %63:3763:3755:4555:45供试品供试品885.8881885.8881（0h0h）863.01731.7307%1.7307%886.3683886.3683（0h0h）866.3838中药制剂教研室色谱柱的影响色谱柱的影响 样品样品不同色谱柱条件下峰面积不同色谱柱条件下峰面积相对标准偏差相对标准偏差% %色谱柱色谱柱1 1色谱

39、柱色谱柱2 2对照品对照品541.4097(40h)541.4097(40h)543.59810.30960.3096542.4932(48h)542.4932(48h)545.0605供试品供试品894.3388(40h)894.3388(40h)904.46230.47190.4719898.0939(48h)898.0939(48h)899.9722中药制剂教研室流动相流速的影响流动相流速的影响样品样品不同流速条件下峰面积不同流速条件下峰面积相对标准偏差相对标准偏差% %1.0ml/min*1.0ml/min*0.8ml/min0.8ml/min对照品对照品541.0740675.917

40、7915.5415.54541.9327674.57849供试品供试品889.91311106.6318415.8315.83886.91481118.04224供试品（供试品（g/mlg/ml）44.3344.3344.510.2870.287中药制剂教研室常用定量计算方法常用定量计算方法外标法外标法内标法内标法 中药制剂教研室外标法外标法 用与待测组分相同的对照品作对照，以对照品的量对比求算试样中含量的方法叫外标法。 常用定量方法常用定量方法中药制剂教研室 类型类型1 1、外标一点法、外标一点法2、外标两点法、外标两点法3、外标工作曲线法、外标工作曲线法外标法外标法常用定量方法常用定量方法

41、中药制剂教研室=CsVsAsCrVrArCr Vr ArCs Vs As外标法一点法外标法一点法常用定量方法常用定量方法中药制剂教研室 对照品溶液的制备对照品溶液的制备 取芍药苷对照品适量，取芍药苷对照品适量，精密精密称定，加甲醇制成每称定，加甲醇制成每1ml1ml含含30g30g的溶液，的溶液，摇匀，即得。（摇匀，即得。（30.2 g/ml30.2 g/ml） 供试品溶液的制备供试品溶液的制备 取重量差异项下的本取重量差异项下的本品，剪碎，取约品，剪碎，取约2g2g，精密称定，精密加入，精密称定，精密加入70%70%甲醇甲醇50ml50ml，称定重量，加热回流，称定重量，加热回流3030分钟

42、，放冷，分钟，放冷，再称定重量，用再称定重量，用70%70%甲醇补足减失的重量，滤甲醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液过，精密量取续滤液25ml25ml，通过中性氧化铝柱，通过中性氧化铝柱（100100200200目，目，2g2g，内径，内径1cm1cm，用，用50%50%甲醇湿法甲醇湿法装柱），收集至装柱），收集至50ml50ml量瓶中，再用量瓶中，再用50%50%甲醇洗甲醇洗脱，收集洗脱液至近刻度，加脱，收集洗脱液至近刻度，加50%50%甲醇至刻度，甲醇至刻度，摇匀，即得。（）摇匀，即得。（） 测定法测定法 分别精密吸取对照品溶液、供试分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液品溶液10l10

43、l，注入液相色谱仪，测定，即得。，注入液相色谱仪，测定，即得。1、当对照品与供试品溶液进样量均为均为10l时，供试品中芍药苷含量？2、对照品溶液进样量为10l，供试品溶液进样量15l时，供试品中芍药苷含量？中药制剂教研室(C1, A1)(C2, A2)常用定量方法常用定量方法外标法二点法外标法二点法中药制剂教研室散射光强度的对数与组分质量的对数成线性关系。中药制剂教研室编号编号进样量进样量（ugug）峰面积积分值峰面积积分值A A平均峰面积平均峰面积1 10.20120.20125.45115.45115.52375.52375.48745.48742 20.50300.503013.8401

44、13.840113.942913.942913.891513.89153 31.00601.006028.047428.047428.079728.063628.06364 41.50901.509041.998941.998942.214742.214742.106842.10685 52.01202.012055.930955.930955.983355.983355.957155.9571常用定量方法常用定量方法标准曲线法中药制剂教研室中药制剂教研室内标法 一种间接或相对的校准方法间接或相对的校准方法。在分析测定样品中某组分含量时，加入一种内标物质内标物质以校准和消除出于操作条件的波动而

45、对分析结果产生的影响，以提高分析结果的准确度提高分析结果的准确度。 常用定量方法常用定量方法中药制剂教研室1.内标物是原样品中不含有的组分2.内标物的保留时间应与待测组分相近，但彼此能完全分离(R1.5)3.内标物必须是纯度合乎要求的纯物质内标法常用定量方法常用定量方法 对内标物的基本要求中药制剂教研室川芎嗪吡嗪酰胺中药制剂教研室 内标法的优点1.定量结果与进样量的重复性无关2.与其他组分是否出峰无关3.用于测定药物中微量有效成分或杂质的含量4.测定的结果较为准确内标法常用定量方法常用定量方法中药制剂教研室 内标法的缺点v 操作程序较为麻烦v 寻找合适的内标物有困难内标法常用定量方法常用定量方

46、法中药制剂教研室组织样品组织样品1 1：4 4和和和和1 1：8 8（心）（心）（心）（心）匀浆匀浆匀浆匀浆匀浆液匀浆液3000rmin-1 20min匀浆液于具塞试管匀浆液于具塞试管中中水水0.03ml IS2.5ml 萃取液萃取液（环己烷：二氯甲烷（环己烷：二氯甲烷3：1）漩涡混合漩涡混合5min3000转转/分，分，10min取上清取上清2ml上清液上清液氮气流吹干氮气流吹干漩涡混合漩涡混合1min衍生化衍生化： 70，30min30min衍生化物衍生化物氮气流吹干氮气流吹干漩涡混合漩涡混合1minGC-MS分析、检测分析、检测例例中药制剂教研室小小 结结1.系统适应性试验内容系统适应性试验内容2.定量分析方法验证内容（或）效能指标定量分析方法验证内容（或）效能指标3.色谱法分析常用定量计算方法色谱法分析常用定量计算方法中药制剂教研室思思 考考 题题1.1.定量分析方法学考察内容？定量分析方法学考察内容？2.2.内标法的优点？内标法的优点？