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1、实实 验验 一一 兽医学医学药理理实验目的与要目的与要求及基本技求及基本技术1兽医学医学药理理实验课的目的的目的 通通过过实实验验、实实训训相相结结合合的的方方法法,以以学学生生自自己己动动手手操操作作为为主主,锻锻炼炼学学生生的的动动手手能能力力,熟熟练练用用药药技技能能和和技技巧巧,加加深深巩巩固固药药理理知知识识。同同时时使使大大家家掌掌握握动动物物药药理理实实验验、实实训训的的基基本本操操作作技技术术,掌掌握握动动物物药药理理的的实实验验、实实训训设设计计,熟熟悉悉实实验验、实实训训的的过过程程,并并具具有有整整理理和和分分析析实实验验结结果果以以及及编编写写实实验验报报告告的的能能力
2、力,为为生生产产中中记记录录、整整理理、分分析析临临床床病病例例,制制定定正正确确的的治治疗疗方方案案,合合理理地地使使用用药药物物,有有效效地地防防治治动动物物疾疾病病打打下下坚实的基础。坚实的基础。2实验课的要求的要求一、实验前 1、仔细阅读实验指导,了解实验的目的、要求、实验步骤和操作程序。 2、结合实验内容,复习有关理论,做到充分理解。 3、预测该实验各个步骤应得的结果。 4、注意和估计实验中可能发生的误差。二、实验中 1、实验器材的安放力求整洁、清洁、有条不紊。32 2、按按照照实验步步骤,以以严肃认真真的的态度度循循序序操操作作,不不得得进行行与与实验无无关关的的活活动。注注意意保
3、保护实验动物和物和标本,本,节省省实验器材和器材和药品。品。3 3、仔仔细、耐耐心心地地观察察实验过程程中中出出现的的现象象;要要随随时记录并并联系系讲授内容授内容进行思考。行思考。 如:如:1.1.发生了什么生了什么现象?象? 2. 2.为什么出什么出现这种种现象?象? 4三、实验结束后1、将实验用具整理就绪,所用器械擦洗干净。如有损坏或短少,应立即报告负责教师。临时借用的器械或物品,实验完毕后,点交负责教师。2、整理实验记录,作出实验结论。3、撰写实验报告,按时交给负责教师评阅。5 5四、书写实验报告的具体内容 1 1、姓名,班级,组别、姓名,班级,组别 2 2、实验题目(名称)、实验题目
4、(名称) 3 3、实验目的、实验目的 4 4、实验原理、实验原理 5 5、实实验验方方法法和和步步骤骤包包括括实实验验用用的的动动物物,主主要要器器材材,药品等。药品等。 6 6、实实验验结结果果这这是是实实验验报报告告中中最最主主要要的的部部分分,应应将将实实验验过过程程观观察察到到的的现现象象及及时时、忠忠实实、正正确确、详详细细的的记记录录实实验验结结果果后后,根根据据记记录录填填写写实实验验报报告告。不不可可单单凭凭记记忆忆,否则易发生错误和遗漏。否则易发生错误和遗漏。 6 目目前前,医医学学论论文文多多采采用用文文字字或或三三线线表表、直直方方图图、曲曲线线等等方方式式表表达达实实验
5、验结结果果。同同学学们们要要把把获获得得的的数数据据、文文字字等等原原始始资资料料加加以以整整理理,填填入入实实验验报报告告的的适适当当位位置置。如如用用表格方式,就采用三线表。表格方式,就采用三线表。 7、讨论和结论讨论和结论这是实验报告质量高低的重要部分。这是实验报告质量高低的重要部分。 讨讨论论要要从从实实验验结结果果出出发发,对对实实验验结结果果进进行行科科学学的的分分析析、推推理理。分分析析要要有有理理有有据据,推推理理要要符符合合逻逻辑辑。讨讨论论时时不不应应从从书书本本上上抄抄一一段段理理论论,对对实实验验结结果果做做一一般般的的解解释释,更不应抄袭别人的实验报告。更不应抄袭别人
6、的实验报告。 如有参考资料应注明出处。如有参考资料应注明出处。7 7 如如果果出出现现与与理理论论不不符符的的实实验验结结果果时时,应应寻寻找找原原因因(是是操操作作失失误误?实实验验误误差差?个个体体差差异异?还还是是预预测测的的实实验验结结果果不不科科学学?)。不不容容许许擅擅自自改改动动数数据据,要要在在实实验验和和书书写写实实验验报报告告过过程程中中培培养养严严谨谨细细致致的的工工作作作作风风和和实实是是求求是是的科学态度。的科学态度。8实验一、兽医学药理实验基本操作技术和方法1. 实验动物的抓取与固定2.实验动物性别鉴定和标志3. 实验动物血液、体液的采集4. 实验动物给药方法5.
7、动物实验后的相关问题9实验动物的抓取与固定一、小鼠的抓取与固定一、小鼠的抓取与固定 一般小鼠不会咬人,但抓取时动作也要轻缓。一般小鼠不会咬人,但抓取时动作也要轻缓。 先用右手抓住鼠尾提起,放在实验台等粗糙表面,在其向先用右手抓住鼠尾提起,放在实验台等粗糙表面,在其向前爬行时,用左手的拇指和食指抓住小鼠的两耳和头颈部皮肤。前爬行时,用左手的拇指和食指抓住小鼠的两耳和头颈部皮肤。 然后将鼠体置于左手心中,把后肢拉直,用左手的无名指然后将鼠体置于左手心中,把后肢拉直,用左手的无名指及小指按住尾巴和后肢,前肢可用中指固定,即可作注射或其及小指按住尾巴和后肢,前肢可用中指固定,即可作注射或其他实验操作。
8、他实验操作。1011二、大鼠的抓取与固定大鼠的牙齿很尖锐,不要突然袭击式地去抓它,这样容易咬伤手指。初学者应戴上较厚的棉布手套,其抓取动作与小鼠相似,右手轻轻抓住大鼠的尾巴向后拉,左手抓紧鼠两耳和头颈部的皮肤,并将鼠固定在左手中,右手即可进行操作。如果需要长时间固定做手术时,可参照固定兔的方法,将鼠固定的大鼠固定台上。12三、豚鼠的抓取与固定 先用手掌以稳准的手法迅速扣住豚鼠背部,抓住其肩胛上方,将手张开,用手指握住颈部,或握住身体的四周,再拿起来。怀孕或体重较大的豚鼠,应以另手托其臀部。 14四、兔的抓取与固定 从笼中捉兔时,先轻轻打开笼门,勿使受惊,随之用手伸入笼内,从头前阻拦,兔便匍伏不
9、动。 此时用右手把两耳轻压于手心内,抓住颈部的被毛和皮,提起兔,然后用左手托住它的臀部,兔身的重量大部分落入左手上。切忌用手抓家兔的两耳、提抓腰部或背部。15抓兔的方法1,2,3均不正确,4,5为正确的捉取方法1617动物的标记染色法染色法 涂染红色:涂染红色:0.5%0.5%中性红中性红或品红溶液。或品红溶液。涂染黄色:涂染黄色:3 35%5%苦味酸苦味酸溶液。溶液。黑色:煤焦油的酒精溶黑色:煤焦油的酒精溶液。液。涂染咖啡色:涂染咖啡色:2%2%硝酸银硝酸银溶液。溶液。 18 号牌法号牌法 用金属制的牌号固定于实验动物的耳上。用金属制的牌号固定于实验动物的耳上。 大动物可将号码烙压在圆形或方
10、形金属牌上(最大动物可将号码烙压在圆形或方形金属牌上(最好用塑料、铝或不锈钢的,它可长期使用不生锈),好用塑料、铝或不锈钢的,它可长期使用不生锈),或将号码按实验分组编号烙在栓动物颈部的皮带上,或将号码按实验分组编号烙在栓动物颈部的皮带上,将此颈圈固定在动物颈部。该法适用于狗等大型动将此颈圈固定在动物颈部。该法适用于狗等大型动物。物。 打孔或剪缺口法打孔或剪缺口法 可用打孔机在兔耳一定位置打一小孔来表示一可用打孔机在兔耳一定位置打一小孔来表示一定的号码。如用剪子剪缺口,应在剪后用滑石粉捻定的号码。如用剪子剪缺口,应在剪后用滑石粉捻一下,以免愈合后看不出来。该法可以编至一下,以免愈合后看不出来。
11、该法可以编至1 199999999号,此种方法常在饲养大量动物时作为终身号采用。号,此种方法常在饲养大量动物时作为终身号采用。19常规采血方法一、大鼠、小鼠1、尾静脉取血 剪尾或切破鼠尾静脉采血:使鼠尾静脉充分充血后,用剪刀剪去尾尖,尾静脉知即可流出,用手轻轻从尾根部向尾尖部挤几下,可以取到数滴血。202、摘除眼球采血(眼眶动脉和静脉)用左手抓住鼠,拇指和食指尽量将鼠头部皮肤捏紧,使鼠眼球突出。右手取一无钩弯小镊,在鼠右侧眼球根部将眼球摘去,关将鼠倒置,头向下,此法由于取过程动物未死,心脏不断在跳动,因此取血量比断头法多,一般约可取出4-5%鼠体重的血液量。213、后眼眶静脉丛连续穿刺穿刺部位
12、是在眼球和眼眶后界之间的后眼眶静脉丛。采用特制的硬玻璃吸管,管长15厘米,前端拉成毛细管。 取血时,用手从背部捉住动物,同时用食指和拇指握住颈部,利用对颈部所加的轻压力,使头部静脉淤血,将消毒的吸管用抗凝剂湿润其内壁,从内侧眼角将吸管转向前,并轻压刺入,深约4-5mm就达到后眼眶静脉丛,血液自然进入吸管内。 在得到所需血量后,除去加于颈部的压力,同时抽出吸管。224、断头 用大鼠断头器或粗剪刀在鼠颈部将鼠头剪掉,实验者立即将鼠颈向下,提起动物,对准准备好的容器,鼠血即可从颈部滴入容器内。5、心脏 左手固定鼠,在左侧第3-4肋间,用左手食指摸到心搏,右手取注射器选择心搏最强处穿刺。235、心脏
13、左手固定鼠,在左侧第3-4肋间,用左手食指摸到心搏,右手取注射器选择心搏最强处穿刺。246、颈静脉 作一般颈外静脉分离手术。颈静脉暴露楚后,用注射器针头沿静脉平行方向刺入,抽取所需血量,采用此法取血,体重20克的小鼠可取0.6ml左右,体重300克的大鼠可取血8ml左右。25二、家兔和豚鼠 1、心脏: 将兔仰卧固定在手术台上,把左侧胸部相当于心脏的部位的被毛剪去,用碘伏、酒精消毒皮肤。实验者用左手触摸左侧第3-4肋间,选择心跳最明显处作穿刺。一般由胸骨左缘外3mm处将注射针头插入第三肋间隙。穿刺时最好用左手触诊心跳,在触诊的配合下穿刺。 经6-7天后,可以重复进行心脏穿刺术。家兔一次可采取全血
14、量的1/6-1/5。262、耳静脉采血 拔去耳缘部被毛,用手指弹动兔耳,促进静脉充血。然后用左手拇指和食指压住耳根端,待静脉血液充盈后,针头由接近耳尖部刺入静脉,并顺血管平行方向深入1厘米,将针头与兔耳固定,即可进行采血。采血完毕后,用棉球压住针刺孔,以免出血。 273、颈动脉采血动动脉脉插插管管术术:将将线线一一根根在在远远心心端端结结扎扎动动脉脉,用用动动脉脉夹夹夹夹住住动动脉脉的的近近心心端端,在在结结扎扎线线与与动动脉脉夹夹之之间间的的动动脉脉长长度度越越长长越越好好,一一般般至至少少有有3cm左左右右。将将另另一一条条丝丝线线置置于于此此段段动动脉脉下下方方以以备备插插管管插插入入后
15、后结结扎扎用用。用用锐锐利利的的眼眼科科剪剪刀刀在在尽尽可可能能靠靠远远心心端端结结扎扎处处作作一一斜斜形形切切口口,约约切切开开管管径径的的一一半半,然然后后将将动动脉脉插插管管向向心心脏脏方方向向插插入入血血管管,用用已已穿穿好好的的丝丝线线结结扎扎牢牢固固,并并用用此此丝丝线线在在插插管管的的突突起起上上缚缚紧紧固固定定,以以防防插插管管从从动动脉脉切切口口滑出。滑出。28 实验动物给药方法一、小鼠1、小鼠灌胃给药 将喂管顺咽后壁轻轻往下推,喂管会顺着食管滑入小鼠的胃,插入深度约3cm。 其要点在于动物要固定好,头部和颈部保持很平;进针方向正确,一定要沿着右口角进针,再顺着食管方向插入胃
16、内,决不可进针不顺硬向里插,否则会注入肺内,造成死亡。292注射给药(1)皮下注射给药 作皮下注射常选项背或大腿内侧的皮肤。将皮肤提起,注射针头取一钝角角度刺入皮下,把针头轻轻向左右摆动,易摆动则表示已刺入皮下,再轻轻抽吸。注射量约为0.1-0.3ml/10g体重。30(2)肌肉注射给药 小鼠体积小,肌肉少,很少采用肌肉注射。当给小鼠注射不溶于水而混悬于油或其他溶剂中的药物时,采用肌肉注射。用药量不超过0.1ml/10g体重。31(3)静脉注射给药 用75%酒精棉球反复擦拭尾部,以达到消毒和使尾部血管扩张的目的. 以左手拇指和食指捏住鼠尾两侧,使静脉更为充盈, 右手持4号针头注射器,使针头与静
17、脉平行(小于30角),从尾巴的下1/4处进针, 注射量为0.05-0.1ml/10g体重。 鼠尾静脉血管分布有一定特点:鼠尾左右两侧是两根尾静脉,其位置比较固定,容易注入。 32(4)腹腔注射 使鼠腹部朝上,鼠头略低于尾部,在下腹部靠近腹白线的两恻进行穿刺,保持针尖不动,回抽针栓,如无回血、肠液和尿液后即可注射药液。注射量为0.1-0.2ml/10g体重。进行腹腔注射时应注意: 1、针头刺入部不宜太近上腹部或太 深,以免刺破内脏。 2、针头与腹腔的角度不宜太小,否则容易刺入皮下。 3、用的针头不要太粗,以免药液注射后从注射孔流出。注射后用棉球按一下注射部位。 4、为避免注射后药液从针孔流出,也
18、可在注射时先使针头在皮下向前推一小段距离,然后再刺入腹腔。 33二、家 兔 给 药1 1、灌胃给药、灌胃给药 使用开口器和导尿管灌胃。灌胃时,将动物固定好,把张使用开口器和导尿管灌胃。灌胃时,将动物固定好,把张口器放入上下腭之间,此时动物自然会咬住张口器;实验者用口器放入上下腭之间,此时动物自然会咬住张口器;实验者用左手抓住动物的口,然后右手取适宜的粗细的导尿管,由张口左手抓住动物的口,然后右手取适宜的粗细的导尿管,由张口器中央小孔插入,导管经口沿颌后壁慢慢送入食管内。器中央小孔插入,导管经口沿颌后壁慢慢送入食管内。 插时动作要轻,防止插入气管。插后可在导管口用一根动插时动作要轻,防止插入气管
19、。插后可在导管口用一根动物毛试一下有无随动物呼吸毛有摆动现象,如无即表示已进入物毛试一下有无随动物呼吸毛有摆动现象,如无即表示已进入胃内。胃内。 在导管口处连接装有药液的注射器,即可慢慢灌胃内。在导管口处连接装有药液的注射器,即可慢慢灌胃内。342、静脉给药 先拔去注射部位的被毛,用手指弹动或轻揉兔耳,使静脉充盈,右手持注射器连6号针头尽量从静脉的远端刺入,将药液注入,然后拔出针头,用手压迫针眼片刻。353、肌肉注射给药 多选用两侧臀部或股部进行肌肉注射。固定动物后,右手持注射器,使之与肌肉呈60夹角,一次刺入肌肉。注射完毕后用手轻轻按摩注射部位,帮助药液吸收。4、涂布法给药5、直肠给药和阴道
20、给药36动物实验后的有关问题一、术后护理二、实验动物处死方法 1、颈椎脱臼法 用左手拇指和食指捏住小白鼠头的后部,并用力下压,右手抓住鼠尾,用力向后上方拉,即可使颈椎脱臼,瞬间死亡。372、空气栓塞法 向动物静脉内注入一定量的空气,使之发生栓塞而死亡。兔一般选用耳缘静脉。兔静脉内注入2040ml空气即可致死。3、放血法 轻度麻醉动物后,固定于手术台上,行股部手术。暴露股三角区,分离股动脉(向心端用动脉夹夹住),并插入一根塑料管。打开动脉夹,使血液流入容器内,一般动物35min内即可致死。除股动脉外,常用颈总动脉放血。此法处死动物较为安静,对内脏器官无损伤,使采集病理切片标本,同时采集血液的一种较好的方法。兔可以采用此法处死。384、破坏延脑法: 用器具破坏延脑或用木锤用力击其后脑部。5、开放性气胸法 将动物开胸,造成开放性气胸。这时胸膜腔与大气压相等,肺脏因受大气压缩发生肺萎缩,动物窒息死亡。6、断头法7、药物法蛙类蛙类 常用金属探针插入枕常用金属探针插入枕骨大孔,破坏脑脊髓骨大孔,破坏脑脊髓的方法处死。的方法处死。 39谢谢!实验报告:只抄写药理学实验课的要求40