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1、第五节、提取分离（一）提取（一）提取 1. 1.酸水提取法酸水提取法酸水提取法酸水提取法 2. 2.醇类溶剂提取法醇类溶剂提取法醇类溶剂提取法醇类溶剂提取法 3. 3.与水不相混溶的有机溶剂提取法与水不相混溶的有机溶剂提取法与水不相混溶的有机溶剂提取法与水不相混溶的有机溶剂提取法1.1.酸水提取法酸水提取法（1 1）离子交换树脂法：酸水提取液通过离子交换树脂）离子交换树脂法：酸水提取液通过离子交换树脂（2）沉淀法 酸提碱沉法药 材沉 淀H2OH+/H2O提取；加碱碱化水溶性Alk、杂质不溶或难溶性Alk 盐析法：适用中等弱碱。盐析法：适用中等弱碱。黄藤1%H2SO4水溶液H2O沉淀碱化至pH=
2、9；加NaCl达饱和掌叶防已碱 雷氏铵盐沉淀法季铵碱的水溶液季铵碱的水溶液水溶液水溶液沉淀沉淀(雷氏复盐雷氏复盐)雷氏铵盐沉淀雷氏铵盐沉淀沉沉 淀淀滤滤 液液滤液滤液 (B2SO4)硫酸钡沉淀硫酸钡沉淀季铵碱的盐酸盐季铵碱的盐酸盐加酸水调至弱酸性加新配制的雷氏铵盐饱和/H2O溶丙酮（乙醇）中加Ag2SO4饱和水溶液加入氯化钡（BaCl2） 2. 2.醇类溶剂提取法醇类溶剂提取法 生 药H+ / H2O药 渣醇 液OH-/H2O醇或酸性醇挥醇；加酸水碱性较弱的碱碱性较弱的碱亲水性亲水性AlkCHCl3沉 淀AlkOH-/H2O CHCl3 3. 3.与水不相混溶的有机溶剂提取法与水不相混溶的有机
3、溶剂提取法生生 药药残残 渣渣CHCl3CHCl3H+/H2O碱化（如碱化（如NH4OH）（）（使使Alk游离）游离）渗滤（或浸渍）（如渗滤（或浸渍）（如CHCl3等）等）H+/H2OOH-/H2OAlk沉淀沉淀亲水性亲水性Alk碱性较弱的碱性较弱的Alk（二）分离 溶解性重结晶法 碱性强弱pH梯度萃取 色谱法（二）分离（二）分离生物碱的分离系统分离特定分离多用于基础研究侧重于生产实用总 碱单体Alk的分离类别指酸碱性强弱部位指极性不同依据Alk的理化性质(1)(1)利用生物碱及其盐类的溶解度不同进行分离利用生物碱及其盐类的溶解度不同进行分离 (2)利用生物碱碱性强弱不同进行分离PHPH梯度分
4、离法梯度分离法n n混混合合物物溶溶于于稀稀酸酸水水，逐逐渐渐调调碱碱性性，分分别别用用CHClCHCl3 3萃取萃取 PHPH由低到高，生物碱碱性由弱到强由低到高，生物碱碱性由弱到强n n混合物溶于混合物溶于CHClCHCl3 3中，用缓冲液依次萃取中，用缓冲液依次萃取 PHPH由高到低，生物碱碱性由强到弱由高到低，生物碱碱性由强到弱(3)利用生物碱的特殊功能团性质进行分离： (5)色谱法常用氧化铝作吸附剂硅胶柱：展开剂中一般加少量二乙胺等碱性试剂；大孔树脂Sephdex-LH20各种加压柱：低压柱、中压柱、制备性HPLC等； 提取分离实例长春碱与长春新碱长春花全草长春花全草(干粉80目)苯
5、渗漉液苯渗漉液药药 渣渣苯苯 液液H+/H2O苯渗漉pH=46%酒石酸水溶液萃取过滤，氨水碱化至pH=67 CHCl3提除水杂除水杂除脂杂除脂杂除碱性较强的成分除碱性较强的成分H2OCHCl3弱碱Alk硫酸盐硫酸盐回收氯仿，蒸干溶于无水乙醇H2SO4调pH=3.84.1Alk沉淀溶于H2O，氨水碱化至pH=89 CHCl3萃取除脂杂除水杂精精制制H2OCHCl3游离游离Alk长春碱长春碱醛基长春碱醛基长春碱回收氯仿溶于苯:氯仿(1:2)液中通过Al2O3吸附柱用苯:氯仿(1:2)洗脱色谱分离 （一）色谱法（一）色谱法 1. 1.薄层色谱法薄层色谱法 2. 2.纸色谱法纸色谱法与对照品共薄层，与
6、文献报道的数据进行对照。与对照品共薄层，与文献报道的数据进行对照。 测定理化常数（如：熔点），测定其衍生物的测定理化常数（如：熔点），测定其衍生物的理化数据等来鉴定生物碱。理化数据等来鉴定生物碱。第六节第六节 生物碱的结构鉴定与测定生物碱的结构鉴定与测定 （二）谱学法（二）谱学法 紫外光谱、红外光谱、质谱、核磁共振紫外光谱、红外光谱、质谱、核磁共振UVUV反映分子中所含共轭系统情况；反映分子中所含共轭系统情况；IRIR利用特征吸收峰，鉴定结构中主要官能团；利用特征吸收峰，鉴定结构中主要官能团；NMRNMR各种技术图谱测定结构；各种技术图谱测定结构；MSMS依据文献，结合主要生物碱类型的质谱特依
7、据文献，结合主要生物碱类型的质谱特征进行解析。征进行解析。一、光谱法在生物碱的结构鉴定与测定中的应用(一)紫外光谱 n n当生色团（羰基、双键、苯基和硝基等）在生物碱的整体结构中 时，UV可以反映其骨架类型特征，对其骨架类型的判断和推定有重要作用。如：吡啶、喹啉、氧化阿朴菲等。n n若生色团仅是连接在生物碱的母核上或侧链上时，其UV对判断其母核类型的作用十分有限。不同类型的生物碱具有相同或相似的UV谱，不能由UV谱推断生物碱的骨架类型。如托品类、苄基四氢异喹啉类、二氢吲哚类等。(二)红外光谱1. 1.酮基的吸收酮基的吸收 有跨环效应时，酮基吸收在有跨环效应时，酮基吸收在1660-1690166
8、0-1690cmcm-1-1 2. 2.BohlmannBohlmann吸收带吸收带 在在反反式式喹喹诺诺里里西西丁丁环环中中，凡凡氮氮原原子子邻邻碳碳上上的的氢氢有有二二个个以以上上与与氮氮孤孤电电子子对对呈呈反反式式双双直直立立关关系系者者，且且氮氮孤孤电电子子不不参参与与共共轭轭时时，则则在在2800-27002800-2700cmcm-1区区域域有有2 2个个以以上上明明显显的的吸吸收收峰峰, ,而而顺顺式式异异构构体体则则此峰极弱。此峰极弱。(1)(1)二个以上与氮孤电子对呈反式双直立氢二个以上与氮孤电子对呈反式双直立氢(2) 氮孤电子不参与共轭注意点：(1)在氯仿溶液中测定时，多为
9、二个峰；用KBr压片时，多为一簇峰；(2)含有喹诺里西丁环的生物碱结构类型：喹诺里西丁类、吐根碱类、吲哚碱类中的柯南因-阿马利新类和育亨宾类、异甾碱中原介藜芦碱类和西藜芦碱类； (三)质谱1.难于裂解或由取代基或侧链的裂解产生特征离子包括：a.由芳香体系组成分子的整体或主体结构的生物碱，如：喹啉类、4-奎酮类等。b.具有环系多、分子结构紧密的生物碱。如吗啡碱、秋水仙碱、取代氨基甾体生物碱类。4-奎酮类丰土那明丙素2.主要裂解受氮原子支配 金鸡宁以N原子为中心的裂解（涉及骨架裂解）生成的含N部分多为基峰或强峰，该裂解方式对生物碱基本骨架的测定有重要意义如金鸡宁类、甾体生物碱类等。3.主要由RDA
10、裂解产生特征离子 主要包括含四氢-卡波林结构的生物碱及无N-烷基取代的阿朴菲类等。4.主要由苄基裂解产生特征离子 代表化合物：苄基四氢异喹啉类、双苄基四氢异喹啉等(四)核磁共振谱1、1H-NMR通过分析、J值、裂分情况等多种参数，来确定H的化学环境、个数以及空间位置等。 生物碱品种繁多，但同类型的生物碱的1HNMR谱有规律可循；因此要深刻了解其结构的规律，方能进行1HNMR解析。 13C-NMR在生物碱结构测定中也十分重要，可以通过C的个数和类型等信息来确定化合物分子的骨架类型和立体构型。小结n n第一节 概述 掌握生物碱的定义和存在形式n n第二节 生物碱生物合成的基本原理 了解生物合成的基本原理n n第三节 生物碱的分类掌握生物碱的主要结构类型第四节 生物碱的理化性质n n1.掌握生物碱的形态、颜色、旋光性及生物碱和生物碱盐的溶解性及其应用n n2.掌握生物碱常用的沉淀反应和显色反应及其在鉴定当中的应用。n n3.掌握生物碱的碱性，碱性强弱与生物碱分子结构的关系及其在提取分离中的应用。第五节 生物碱的提取分离n n掌握生物碱提取的一般原理和方法第六节 生物碱结构鉴定与测定n n了解生物碱的结构鉴定方法
