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1、XXXXXX 医院检验科免疫室分析项目作业指导书 Elecsys E 170/E 411 神经元特异性烯醇化酶(NSE)文件编号： LAB OP MY020第页，共页版本： A/0生效日期： 2008-02-01111.分析原理采用双抗体夹心法原理，整个过程18分钟完成。 第1步：20l 标本、生物素化的抗 NSE 特异性的单克隆抗体和钌（Ru）标记的抗 NSE 特异性的单克隆抗体混匀，形成夹心复合物。 第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。 第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压
2、后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。仪器通过2点定标曲线以及试剂条码提供的母定标曲线计算出结果。2.标本要求血清：按标准常规方法采集。不要使用血浆。离心1小时。样本 1525度稳定 6小时，28度可稳定 24小时， -20oC 可稳定 3个月。只能冻融一次。不要使用加热灭活的标本。标本和质控品禁用叠氮钠防腐。标本、定标液和质控品在测定前应预温到室温。3.试剂、校准品、质控品和其他所需材料采用罗氏原装配套试剂。试剂：M ： 链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶， 6.5ml 。粒子浓度 0.72mg/ml 。含防腐剂。R1：生物素化的抗 NSE 单克隆抗体（灰盖），1瓶， 10ml，1.0
3、mg/l ，磷酸缓冲液 50mmol/l ，Ph 7.2 ；含防腐剂。R2：Ru(bpy)32+标记的抗 NSE 单克隆抗体（黑盖），1瓶， 10ml。浓度 1.0mg/l ，磷酸缓冲液 50mmol/l ，pH 7.2, 含防腐剂。校准品：Cal 1 阴性定标液（白盖），2瓶，1ml/ 瓶Cal 2 阳性定标液（黑盖），2瓶，1ml/ 瓶两个定标品的 NSE 的浓度范围约为 0.5ng/ml 和50ng/ml ，以缓冲液 / 蛋白（小牛血清白蛋白）为基质，含叠氮钠1%(w/w)。质控品：Elecsys 肿瘤标志物质控品1和2 （PreciControl Tumor Marker）货号 117
4、76452 其他所需材料：Elecsys E170/E411 分析仪Elecsys NSE 稀释液货号 03004864 Elecsys 系统清洗液（ SysClean）货号 11298500 Elecsys E411分析仪 Elecsys 系统缓冲液（ ProCell ）货号 11662988 Elecsys 测量池清洗液（ CleanCell ）货号 11662970 Elecsys 添加剂液（ SysWash ）货号 11930346 Elecsys 适配器 （Adapter for SysClean），货号 11933159, Elecsys 反应杯（ CUP ），货号 1170682
5、9 Elecsys 加样头（ TIP），货号 11706802 Elecsys E170分析仪 Elecsys 系统缓冲液（ ProCell ）货号 04880340 Elecsys 测量池清洗液（ CleanCell ）货号 04880293 Elecsys 试剂针清洗液（ ProbeWash ）货号 03005712 糖XXXXXX 医院检验科免疫室分析项目作业指导书 Elecsys E 170/E 411 神经元特异性烯醇化酶(NSE)文件编号： LAB OP MY020第页，共页版本： A/0生效日期： 2008-02-0122 Elecsys PC/CC杯, 货号03023141 E
6、lecsys 反应杯/ 加针头 /废物袋（ CUP/TIP），货号 12102137 Elecsys 系统清洗适配器（ SysClean Adapter M ），货号 03027651 4.仪器和校准使用仪器：瑞士罗氏诊断公司生产Elecsys 2010/E 170/E 411全自动电化学发光免疫自动分析仪仪器校准 ：每批 NSE 试剂盒必须用新鲜试剂和NSE Cal 1, Cal 2定标一次。另外，以下情况需要再次定标：Elecsys E170 分析仪： 一个月（同一批号试剂） 7 天（放置仪器上的同一试剂盒）各种分析仪均适用的情况：根据要求进行定标：如质控结果超出范围时。5.操作步骤 （以
7、 E 170 为例）5.1 校准操作步骤：在编缉各项目的参数时，已经在ApplicationCalib菜单中定义好了定标类型和几点定标。因此在对各项目进行定标时，只需在定标菜单Calibration中进行即可。进入CalibrationStatus菜单，用鼠标选择需定标的项目，再根据需要点单点定标（BLANK键）或两点定标（TWO POINT 键） 、全点定标（ FULL键） ，再选择其它项目进行相应选择，最后点SAVE ，将定标物放入在 CalibrationCalibrator中定义好的位置，点Start ，再点 Start ，仪器开始定标。在 CalibrationStatus菜单中看定
8、标结果，点Calibration Result键看定标结果，点Reaction Monitor键看每个定标物的反应曲线。5.2 样本检测程序：单个样本输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在 Sequence No 栏输入标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点SAVE 键，样本号自动累加。批量常规标本的输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在 Sequence No 栏输入起始标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点REPEAT ，输入该批标本的最后一个标本号，点OK即可。进样分析，将标本按在Workplac
9、e 菜单中输入的标本号顺序在样本架上排好，放入进样盘内, 按 START 键，输入该批上机标本的起始标本号，再点START 键，仪器自动开始推架检测标本。6.质量控制用Elecsys 肿瘤标志物质控品 1和2 （PreciControl Tumor Marker）。质控品 1和质控品 2至少每 24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施。7.计算方法仪器会自动计算标本的浓度（ng/ml 或者ug/l ）。8.参考范围德国 3家临床中心和罗氏内部总计547例健康人群结果统计如下：16.3ng/ml （9
10、5% 的范围）， 15.7-17.0ng/ml（95可信区间）9.分析性能9.1 精密度XXXXXX 医院检验科免疫室分析项目作业指导书 Elecsys E 170/E 411 神经元特异性烯醇化酶(NSE)文件编号： LAB OP MY020第页，共页版本： A/0生效日期： 2008-02-013310.干扰因素测定结果不受黄疸 ( 胆红素 72mg/dL), 高脂血症 ( 脂肪乳剂 2000 mg/dl) 和生物素（ 5mg/天），必须在末次生物素治疗8小时后采集标本。浓度达1500U/ml的风湿因子对测定无影响。体外对21种常用药物进行试验未发现有药物影响检测结果。高达100000ng
11、/ml 大剂量不产生钩状效应。由于检测试剂中含有单克隆抗体，因此某些接受单克隆鼠抗体治疗或诊断的患者标本检测结果可能有误。Elecsys NSE 试剂盒附带有试剂添加剂以减少以上不良影响。少数病例中极高浓度的链霉抗生物素蛋白和钌抗体会影响测定结果。NSE 浓度升高也见于良性肺部疾病和恶性神经内分泌疾病，如良性肿瘤，髓性甲状腺癌，皮肤Merkel 细胞肿瘤和胰腺及肾上腺癌15-17。必须结合患者病史，各项实验室检查及其它临床资料来综合评估测定结果。11.临床意义糖分解烯醇酶 (2-phospho-D-glycerate hydrolase. EC 4.2.4.11 ，分子量约为 80kD)有多种
12、二聚异构体，由三种亚单位、 和组成。烯醇酶 亚单位见于哺乳动物多种类型组织中，而亚单位则主要见于心脏和肌肉组织。和酶异构体称为神经元特异烯醇化酶（NSE ）或 酶，高浓度存在于神经细胞和神经内分泌细胞以及这些细胞所引发的肿瘤细胞中 1。肺癌： NSE 可作为检测小细胞肺癌首选标志物1，而 CYFRA 21-1 在非小细胞肺癌检测中优于NSE2,3,9。60- 81小细胞肺癌病例NSE 浓度升高 1,7 。尽管 NSE 浓度与转移部位或脑部转移没有相关性，但是与临床分期如疾病进展有很好的相关性 1。首个化疗周期开始后24-72小时NSE 浓度有短暂的升高，原因是肿瘤细胞溶解1。这种NSE 浓度升
13、高可持续 1周或首个化疗周期结束时血清浓度迅速下降（治疗前浓度增加）。相反地，对化疗无反应的患者NSE 浓度持续升高或没有下将到参考范围 1,8 。病情缓解期间， 80-96 患者NSE 浓度正常，而病情复发时NSE 浓度升高。一些病例其1-4月潜伏期中 NSE 浓度升高，常为指数式升高（10-94天浓度翻倍），这与生存期有关1。NSE 可用于评估小细胞肺癌患者预后情况、治疗有效性和相关病因：诊断灵敏度93，阳性预测值 921,7,8 。神经母细胞瘤：62患儿 NSE 血清浓度高于 30ng/ml ，升高值与疾病进展有关。异常NSE 值大小或频率与疾病严重程度有明显的相关性；与无病生存期呈负相
14、关性1。Apudoma 神经内分泌肿瘤： 34患者血清 NSE 浓度升高（ 12.5ng/ml ）1,4 。精原细胞瘤：临床上68-73患者有明显的 NSE 浓度增加 1，与疾病临床分期有关。其他肿瘤：22非肺部恶性疾病患者（任何期别肿瘤）NSE 浓度高于 25ng/ml 。脑部肿瘤如神经胶质瘤、脑脊膜瘤、纤维神经瘤和神经瘤仅偶尔有血清NSE 值升高。在原发脑瘤或脑转移性瘤10和恶性黑色素瘤及肾上腺嗜铬细胞瘤（PC ）患者中，可发现中枢神经系统CNS 的NSE 值升高 1。14% 器官排斥和 46转移性肾癌患者NSE 浓度升高，与病情有关，可作为一个独立的预后因子1,12 。良性疾病：良性肺部
15、和脑部疾病NSE 浓度略有升高（ 12ng/ml ），主要见于 CSF 中，包括XXXXXX 医院检验科免疫室分析项目作业指导书 Elecsys E 170/E 411 神经元特异性烯醇化酶(NSE)文件编号： LAB OP MY020第页，共页版本： A/0生效日期： 2008-02-0144下列疾病患者：脑脊膜炎、弥漫性脑膜炎、脊髓与小脑退化、脑梗塞、脑血肿、蛛网膜下出血、脑外伤、脑炎、器质性癫痫、精神分裂症和 Jakob-Creutzfeld病1,5,6 。12参考文献1. Lamerz R. NSE (Neuronen-spezifische Enolase), -Enolase. I
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