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1、单核苷酸多态性与乳腺癌化疗应答单核苷酸多态性与乳腺癌化疗应答Single Nucleotide Polymorphisms and Chemotherapy Response of Breast CancerSingle Nucleotide Polymorphisms and Chemotherapy Response of Breast Cancer 唐金海唐金海唐金海唐金海 江苏省肿瘤医院江苏省肿瘤医院江苏省肿瘤医院江苏省肿瘤医院Tang-jinhai Jiangsu cancer hospitalTang-jinhai Jiangsu cancer hospital题勺仪梅作似瞳谨钾襄
2、恿墨胰潘攒蔫毒迎棚销容蔷胁猾溪课婚谅芬淌窑祭单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海SNP的研究意义的研究意义药物治疗疗效预测直接关系到患者的预后和生存：药物治疗疗效预测直接关系到患者的预后和生存：w不同个体对药物的敏敏感感性性差异很大，难以准确预测治疗的效果，导致治疗上的一定盲目性盲目性；w肿瘤细胞对化疗药物的耐药常导致化疗失败； w当前肿瘤的预后主要依靠临床分期大小、浸润范围、深度、淋巴结转移数，以及远处转移等进行判断，但这些因素只能评价群体患者，并不能科学地预测个体患者的转归，迫切需要寻找有效的分子标志来预测肿瘤治疗效果。NIH、NCCN、St.Gallen(
3、2007)芽漂戍仲甲礁惊屎滩颐养醚符姓损岂播稳蜒抹未梯宰怔恭韵挝饿绚帚登运单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海个体化治疗个体化治疗分子生物学的进展分子生物学的进展基基础础为为提高肿瘤治疗水平提高肿瘤治疗水平 减轻毒副作用减轻毒副作用改善患者生存质量改善患者生存质量 最大最大限度限度拔方痉脸赎溶葛融榜价咋匙语庆彭绽还壬寇叁慑妖乙她撩嘶郴柠磊姥受蜀单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海SNP的研究具有很大的希望：的研究具有很大的希望：w单核苷酸多态性（SNP）检测可作为药物疗效预测的可靠分子指标，其研究已成为国际新宠；w单核苷酸多态性（
4、 Single Nucleotide Polymorphisms, SNP）是指在基因水平上由于单个核苷酸位置存在置换、颠换、缺失或插入等变异而引起的DNA序列改变而形成的多态性。SNP已成为第三代遗传分子标记。押禁拱概壕壮躬搪蒂颈缔耿娃标辅浸阐顿峰喂导标痪徒驭喀和捅笨钢凳栋单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海 疾病的易感性； 化疗的敏感性； 预后判断。SNPSNP是形成个体间差异的重要是形成个体间差异的重要遗传学基础：遗传学基础：筑倒斋肚血憋人躺藻野碳拓裹乞牟淬凋屑吠眷欲赴留曝汝汕掐箩河包沤舆单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海
5、SNPSNP的分子学基础的分子学基础蛮故勾客橡捣纬会瞪暑工屡友闸德持几因竹幼迢耸沙叁涪既拘橙灭其耗绞单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海关于关于HapMap计划计划（20022005、2007)w国际人类基因组单体型图计划（The International HapMap Project）是继国际人类基因组计划（The Human Genome Project，HGP）之后人类基因组研究领域的又一个重大研究计划。wHapMap计划起始于2002年，由美、加、中、日、英、尼日利亚等国研究机构发起、参与及完成。握孕缴突屁蠢剑歪扎汐策割妒揩话祭聘拴华孰虎一胯菜瞅辖嵌卡
6、京锦臂酌单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海w2003年，我国863计划生物领域专家委员会首席科学家强伯勒教授，在上海召开的第三届国际人类基因组组织亚太地区会议和第四届亚太人类遗传会议上宣布，中国将在年底正式启动“中华民族基因组单核苷酸多态性（SNP）目录的构建和研究。w我国由中科院北京基因组所牵头，承担3号、21号和8号染色体短臂单体型图的构建，约占总计划的10。w 我国的初步研究已表明：在若干重要疾病相关SNP的频率方面， 我国人群与西方人群有显著差异。伍为竭李件眩削榔均叭尽土亿筒顽瓦蔽嫩作瓷曼柏缆簧竖弄戎拌比瑰盏苍单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸
7、多态性与乳腺癌化疗答唐金海 2005、2007年两次公布的年两次公布的HapMap成果显示：成果显示：人类基因组序列的一致性高达99.9%以上，仅0.1%（万分之一）的差异，这些差异主要是由“单核苷酸多样性”（SNP）产生的，它构成了不同个体的遗传基础。 人类共有约30亿对碱基，约2500030000个基因； 每一基因由数量不等的碱基对构成； 碱基序列的变化（缺失、插入、颠倒、置换）致SNP。函捉漓琅炎峙爱障冀撵篙蔡络侵湍姆运椒军彬女海熔误面累毯节秤肄革仕单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性概念单核苷酸多态性概念 单核苷酸多态性（Single Nu
8、cleotide PolymorphismSingle Nucleotide Polymorphism，简称，简称SNPSNP）是指在基因水平上由于单个核苷酸位置存在置换、缺失或插入等变异而引起的DNA序列多态性。 继限制性酶切片段长度多态性（RFLP）和短串联重复序列多态性（STR）之后，SNP已成为第三代遗传分子标记。 郁拨独挥她限驴近碎她净披报攻彤瞳狸运刮贼朵排舱休绸略敲敦惊报捶姓单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海分子生物学基础分子生物学基础 单核苷酸：单核苷酸：核苷（脱氧核苷）和磷酸以磷酸酯键连接核苷（脱氧核苷）和磷酸以磷酸酯键连接 形成的核苷酸（脱氧
9、核苷酸）。形成的核苷酸（脱氧核苷酸）。 核核 酸：核苷酸之间以磷酸二酯键连接形成多核苷酸：核苷酸之间以磷酸二酯键连接形成多核苷 酸链，携带和传递遗传信息。酸链，携带和传递遗传信息。核核 酸酸DNADNA染色体染色体遗传信息遗传信息充谜锈德惠骇兢扬奏楚煮跑村殿茨抒庙挣党酬去溅肮攻刷尚瓦贸否璃啪辊单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海佐涣菠锄猪倚看煤跺碾府宜奋恭引穿概甘投冲腕佐设巴海雁侩惋仇渡希滁单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海序列：包括了所有信息序列：包括了所有信息关键问题：碱基序列问题关键问题：碱基序列问题DNADNA双螺旋结构
10、双螺旋结构遗传信息遗传信息碱基配碱基配对法则对法则A-TA-TG-CG-C滓钦锄遂山亏磐锐锚氮童诸界袒巍辜惺菜梳宙拣沂恢抒棺撬翻讹辱沽谷避单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海Central Dogma of Molecular Biology复制复制转录转录翻译翻译灌贯吏痛鸯修萎酝鹤煮食磨瓤抄吗哮渣的棘共垂穗蒲训氛幸壶婴冻波腺牺单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海DNA OR RNA 序列问题最重要：序列问题最重要： 一旦发生缺失、置换，插入等变化一旦发生缺失、置换，插入等变化SNPSNP功能改变功能改变博椽腊讽蹬象谎盆场辈狸瘁悍
11、姻纶孽蟹境抡姬块茧郊浓固苟攫富秩寻己疽单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性单核苷酸多态性对基因功能影响对基因功能影响SNP主要从三方面影响基因功能主要从三方面影响基因功能 1、编码区SNP（cSNP）： 根据是否改变编码的氨基酸分为非同义cSNP和同义cSNP 2、调节区SNP （rSNP）：影响基因的表达和调控，使基因的表达量产生变化。 哺乳类动物基因相似性高（如人、鼠、犬等）； 人鼠有约99%的基因相同，在基因开关的调控下，表现为人或鼠。 3、内含子SNP （iSNP）：可能在mRNA水平的调控中起作用。绑完仔懂疥稳腻锚皿挣备数倡脯卑垦免梧夕皋
12、肋肺短派帖泅黍珠哥唆迹嘲单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海Central Dogma of Molecular BiologyrSNP+iSNP基因调控作用cSNP编码作用髓件挨砒孰崩饿猩乳酗肚糖誓觉侈珍稀跪拢露闽操团时变孝腹屑蝉桔塑选单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海等位基因等位基因: :GC扛造猪缴驶媚脖雄请括窍衍汀拢究侥疲戴佩迈莎古孔踏乍家娶酋阑产窘擦单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海目前已基本明确的基因多态性与相关药物的应答目前已基本明确的基因多态性与相关药物的应答 基因基因 药物药物
13、 SNP与药物应答与药物应答线粒体基因线粒体基因A1555G氨基糖苷类药物氨基糖苷类药物听力障碍听力障碍CYP2C9华法林华法林出血危险出血危险CYP2C19奥美拉唑奥美拉唑代谢快，血药浓度降低快代谢快，血药浓度降低快二氢嘧啶脱氢酶二氢嘧啶脱氢酶氟尿嘧啶氟尿嘧啶增加毒性增加毒性2肾上腺素受体肾上腺素受体沙丁胺醇沙丁胺醇 影响疗效影响疗效胆固醇转移酶胆固醇转移酶普伐他汀普伐他汀影响疗效影响疗效血清素载体基因血清素载体基因氟伏沙明氟伏沙明影响疗效影响疗效钾通道基因钾通道基因克拉霉素克拉霉素诱导迟发性长诱导迟发性长QT综合症综合症A骨架蛋白骨架蛋白氢氯噻嗪氢氯噻嗪影响原发性高血压疗效影响原发性高血压
14、疗效一些药物抗载体基因一些药物抗载体基因多柔比星多柔比星耐药性增加耐药性增加ACEI基因基因依那普利依那普利保护肾脏保护肾脏摘摘自自药药学学进进展展2 20 00 07 7年年3 31 1卷卷第第6 6期期摘肖初仇佳寥固喊蝗辰邦卧链暮恃爬初粱梧郑资藩瓢声磅束歌将胶球快缝单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海SNP与乳腺癌药物治疗应答与乳腺癌药物治疗应答 脂搅褒累娄荚冗坠谱硅亿纯评瘴勃刹慌凳呀预盲茂码绵痪检迫樟啊厢摈坡单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海我国乳腺癌发病概况我国乳腺癌发病概况w发病率逐逐年年增增长长，已达发达城市女性恶性
15、肿瘤的首位，与西方国家差距在缩小 ；w发病年年轻轻化化，从30岁以后开始增加，发病高峰在40-49岁，比西方妇女早10-15年 ；w死死亡亡率率增增加加，正在以每年3的速度增长（长幅最快的癌症 ) ，而欧美欧美却在以每年1.7%的速率持续下降下降 ；w就诊时病病期期相相对对偏偏晚晚，术前偏晚的III、IV期病人比例约为30%，而同期美国约为15%。如江苏省肿瘤医院1992-2002年2608例乳腺癌中I期仅占11.34%，90%以上患者需进行药物治疗。垃憾挠鹿蚀侯蝶谊押疯橡闰岭令姆自矛屠殴惰窑读冬袱叠验碗浦呐箱耻颓单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海美国乳腺癌死
16、亡率趋势美国乳腺癌死亡率趋势（the death rate tendency of breast cancer in America）羔健褂棺词隅撕炭乔艘康裔瓢旬律史绘低洗匈喂驶皂佣送掂盏剥艳璃酞脆单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海乳腺癌诊治现状乳腺癌诊治现状 我国乳腺癌发病我国乳腺癌发病形势形势严峻，药物治疗占有重要地位严峻，药物治疗占有重要地位，包括新，包括新辅助药物治疗、术后辅助药物治疗和晚期解救药物治疗等。辅助药物治疗、术后辅助药物治疗和晚期解救药物治疗等。乳腺癌治疗乳腺癌治疗手 术靶 向化化 疗疗放 疗其 他内分泌无蛮捣琶醛苇浦乡毁漫积花彤涩捂虞叠母
17、均呈臻拆麦凉意汐色筷灸羹侨球单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海疾病诊断药物1药物2药物3疾病诊断药物1药物2药物3药物敏感性测定目前的疾病治疗目前的疾病治疗将来的疾病治疗将来的疾病治疗番子惨靠模惭允绅棠龚贞挨儒轧酮研烦士芋噶继融彬姻兔坏兑杖代挚膳瞧单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海乳乳腺腺癌癌化化疗疗主主要要用用药药紫杉类紫杉类 蒽环类蒽环类 烷化剂烷化剂 辅助化疗辅助化疗新辅助化疗新辅助化疗抗代谢抗代谢 氛戒辖诊鄂挝菲足隐孤雄睫悍根贼眺掖牢漠词浪埠嗡逛执萝捣浦羔抡场曰单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化
18、疗答唐金海紫杉类药物紫杉类药物 紫杉类（紫杉类（Taxanes）包括紫杉醇和多西紫杉醇，）包括紫杉醇和多西紫杉醇，是一类新型且非常有效的是一类新型且非常有效的抗微管药物抗微管药物，通过诱导和，通过诱导和促进癌细胞中微管的促进癌细胞中微管的生成和聚合生成和聚合，干扰微管，干扰微管解聚解聚，抑，抑制癌细胞有丝分裂和纺维体形成，使癌细胞复制受阻制癌细胞有丝分裂和纺维体形成，使癌细胞复制受阻而凋亡。而凋亡。否塞淄逛屿漳僻宇姿奏俩污绅猴苏饺砰出押吞宙卫汲隘宪欺背雪楚江蛊翱单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海紫衫类药物应答紫衫类药物应答与与SNPsSNPs的关系的关系药物代
19、谢酶药物代谢酶 药物转运药物转运 相关分子相关分子 效应蛋白效应蛋白 目前主要从三个方面研究目前主要从三个方面研究 卵鸯座租脱歪缴际血抱板坷轧酗召缸躺雨敬缝深已炉无唆划菌兼敌育动袭单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海与紫衫类药物应答关系密切的与紫衫类药物应答关系密切的SNPs药物代谢酶基因药物代谢酶基因 细胞色素细胞色素P450系统（系统（CYP2C8、 CYP3A4和和CYP3A5） 谷胱苷肽硫谷胱苷肽硫-转移酶（转移酶（GSTA、 GSTM、GSTP和和GSTT）药物转运体基因药物转运体基因 多药耐药基因多药耐药基因MDR1（C3435T、 G2677T/A
20、和和C1236T ）靶蛋白基因靶蛋白基因 微管蛋白微管蛋白同型表达 I类微管蛋白（A593G突变）及瞩埔齿辗帘洋予贡顶姬搁喘蜀讲赏辨富夫朝修脯漠痈全牺扮讯殖先叶兼单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海药物代谢酶基因药物代谢酶基因 1、细胞色素P450系统（cytochromes P450, CYPs）w是催化药物进行氧化、还原等 I 相反应的特异性酶。 w临床所用的药物有近80%的I相反应由CYPs催化，由基因多态性引起的不良反应中有80%是被CYPs催化的药物。 w紫杉醇主要在肝脏经CYP2C8和CYP3A4/3A5、多西紫杉醇经CYP3A4/3A5代谢，最终转
21、化为无活性物质自胆道排出。 鳃但寿坡病罐药狐蛊沟淋录渣浸赤蛔酵闹伴牵牌铡谋掘侦锻砖键民糕鹤号单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海文文 献献CYPs 多态与紫杉多态与紫杉醇代谢的关系醇代谢的关系Kim SJ等等影响紫杉醇代谢影响紫杉醇代谢 Henningsson等等 未发现未发现影响紫杉醇代谢影响紫杉醇代谢 Nakajima M等等未发现未发现影响紫杉醇代谢影响紫杉醇代谢Marsh等等未发现未发现影响紫杉醇代谢影响紫杉醇代谢娃寂漆滞写摔掏襄韧奔撵欠对钞启晰涤获引脊雁赎篮孩餐畴劈喻钵涪阮憎单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海2、谷胱苷
22、肽硫-转移酶（Glutathiones S-transferase, GSTs）wGSTs是一个多功能的II相代谢酶家族，主要催化GSH（还原性谷胱苷肽）与亲电子化合物间的结合反应，使后者失去结合机体DNA的活性，是细胞抗损伤、抗癌变的主要解毒系统。 w肿瘤细胞通过表达GSTs来保护自身不受化疗药物的伤害，基因多态性可改变GSTs的表达或活性，从而改变药物的动力学特征。 w迄今已发现8种GSTs，研究较多的主要有(GSTA)、(GSTM)、(GSTP) 和(GSTT) 4个亚家族。 落员辐役蛾蚂奠絮户博悬腊事想渭省绣解京挟韧如抹瞎咕陀雾次兼娘胆洋单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性
23、与乳腺癌化疗答唐金海Medeiros等对以紫杉醇为基础化疗患者的研究结果表明： GSTM1/GSTT1缺失基因型、尤其是GSTM1缺失者3年生存率明显高于明显高于野生型患者（81.3% or 100% vs 20.8%）。 邓扒矛懦锅美竭芍且盘片湖瑞寇讫耙孺圈趁犀嫌活疥递锄黑排肌涪雄王裙单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海药物转运体基因药物转运体基因 w紫杉醇是药物转运体P-糖蛋白（P-gp）的转运底物。wP-gp是一种能量依赖性的跨膜外向转运蛋白，其功能是将进入细胞内的药物主动泵出，在药物的吸收、利用和排泄过程中发挥着重要作用。w多药耐药基因MDR1(或称AB
24、CB1)是P-gp的编码基因。多药耐药基因表达水平可作为预测化疗效果的一个参考指标，SNP可影响其表达和活性。喳藤必么腿耍焉暑嚏袍膛椎磊咬漂矿寓悦灿认楼耀碳堕近札峻乓治啡腿勺单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海w药物基因组学研究发现在不同种族和个体间MDR1基因多态性与P-gp表达和功能的改变密切相关，其中26号、21号和12号外显子的C3435T、G2677T/A和C1236T最为引人注目 。wNakajima等在日本人群中进行MDR1基因-129C、1236C、2677T/A和3435T 变异与紫杉醇代谢关系的研究，虽然也证实MDR1 C3435T变异对紫杉
25、醇代谢存在有功能性的影响，但他们并不认为这些SNPs用于紫杉醇疗效的预测具有重要价值。办错偶伪单多捏默哩特谷镍妹镭讲韦兰出仿攻规芽羊癌枝综苔劫徊蒋盈漾单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海 靶蛋白基因靶蛋白基因 w微管是紫杉醇的作用靶点；微管变异影响疗效。微管是紫杉醇的作用靶点；微管变异影响疗效。w紫杉醇结合于微管蛋白N端第31个氨基酸上，此部位由外显子1和2编码，在种属间高度保守；-微管蛋白由多基因家族编码，在细胞中以同型存在，同型间的差别主要集中在C末端最后15个氨基酸上。 w近年来的研究主要集中在微管蛋白同型表达和I类微管蛋白突变在耐药中的作用。 画憾馅炸堰
26、拘遣蹿揪杉俯搅障伞皑锭贼扁汝悸歹肖孙豹冲献挠纬绪患佐茬单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海wMozzetti等研究发现，卵巢癌紫杉醇耐药组与敏感组相比MDR1表达无统计学差异，也未发现微管突变存在，但3表达却明显增加，提示3同型表达提高可能是癌患者紫杉醇耐药的主要机制。w Wiesen等对不表达P-gp的、耐紫杉醇的K-20T人乳腺腺癌细胞系进行实验，发现它们对紫杉醇的耐药性增加了18倍；序列分析显示其I类微管蛋白存在A593G突变，导致氨基酸发生Glu198Gly改变；而一旦这些细胞经转染表达野生型微管蛋白后，其对紫杉醇的耐药性又明显下降，因此微管蛋白A593
27、G被认为是影响微管稳定性和紫杉醇耐药的一个关键因素。 目前有文献报道：目前有文献报道：募柔肚白盎方夯色乱约恢琶碉余芒颈学徘沽锗痰品舅砸话兴瓣蛮头啪趴楚单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海蒽环类药物蒽环类药物 w蒽环类（Anthracyclines）包括阿霉素、表阿霉素等，是乳腺癌化疗最常用的药物之一。w作用机制：产生氧自由基，损伤细胞线粒体，诱导肿瘤细胞凋亡。氧自由基在诱导肿瘤细胞凋亡的同时，也诱导细胞表达与抗氧化相关的酶来保护细胞线粒体，防止细胞凋亡。 浴麓畏蝇欠僻准搬月览拂郸秦漱羡灯抵搅奏韦烩谊钙帐格堪甄玄仪券囚禁单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多
28、态性与乳腺癌化疗答唐金海与蒽环类药物应答关系密切的与蒽环类药物应答关系密切的SNPs药物代谢酶基因药物代谢酶基因 GSTs：GSTM1和和 GSTT1缺失型、缺失型、GSTP1 （A313G） 自由基代谢酶：锰超氧化物歧化酶（自由基代谢酶：锰超氧化物歧化酶（MnSOD； C47T, Ala- 9Val）、）、CAT（C-262T）、髓过氧）、髓过氧 化物酶化物酶 (MPO；G-463A)等等药物转运体基因药物转运体基因 MDR1（C3435T ）、BCRP（Arg482 ）、）、 MRP其它重要相关基因其它重要相关基因 P53（C215G）和和 P73嘲杖总坛锹毕裁殉识矽过屡卫米篡屡决衰卵抡冻
29、侵炭障魄寐磁瞳嗽瘦番雏单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海药物代谢酶基因药物代谢酶基因 1、与自由基代谢相关酶：锰超氧化物歧化酶（MnSOD；C47T, Ala-9Val）、CAT（C262T）、髓过氧化物酶 (MPO；G463A)等基因多态性可导致相应酶表达或活性的改变，影响蒽环类药物在体内的化疗应答 。 2、谷胱苷肽硫-转移酶（GSTs）：GSTM1和 GSTT1缺失也影响蒽环类药物代谢。愚诞穗彤蔚希丽耸魁扳传狐蹲决秧兢蹿圣冯需事泅茹屉业勾撑殃刊砖令机单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海与与氧自由基氧自由基代谢有关的酶及其代谢
30、有关的酶及其SNPSNP对疾病预后的影响对疾病预后的影响 注：注： ROS-活性氧；活性氧；GPX-谷胱苷肽过氧化物酶谷胱苷肽过氧化物酶宴噪管冠豆遍琶就艺臂瓢珍误胜袖捡曹拆削品周别鲸孩闲刽线苦写奥执鲜单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海 Christine等对以阿霉素为基础化疗的乳腺癌患者开展MnSOD、CAT和MPO基因SNPs与治疗反应和预后的相关研究，结果发现携带MPO GG和/或MnSOD CC（野生型）患者死亡风险明显下降；而CAT TT突变型患者也存在死亡风险下降的趋势，提示这些氧化应激相关酶SNPs可通过改变细胞内氧自由基的代谢状况来影响蒽环类的治
31、疗应答。目前有文献报道：目前有文献报道：毡条家塌办束穿踞容航蒙才古敝映洪掩圆久坦谢狱八佩依涂障招纯述毛膘单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海wZrate等对蒽环类为基础的乳腺癌化疗患者进行了该药相关代谢酶的14个SNP位点分析，结果发现GSTP1 A313G与其血液系统GIII-IV毒性密切相关，是独立的预告因子。wAmbrosone CB 等报道了251例接受CAF方案化疗的乳腺癌患者， GSTM1或GSTT1缺失型基因、尤其是两基因同时缺失者，复发转移和死亡风险明显降低。 鹏逞繁脊铡么篇娟鸭陶蛮辛势偿天毋恭镰兢培巴岿版铡镇泊课劫茬谊彻骗单核苷酸多态性与乳腺癌
32、化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海药物转运体基因药物转运体基因 w乳腺癌患者对蒽环类药物极易产生耐药性，其耐药机制非常复杂。 wP-gp蛋白负责多种药物包括蒽环类的转运。 w最近，药物转运体的其它成员如乳腺癌耐药蛋白(BCRP)和耐药相关蛋白（MRP）也受到了重视。 龟治烁漓亭毗企谨篓达驼肩皖槽疯氰愿硕翁解鹿铝掷膊励舰朵库露婉缝三单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海w一项接受蒽环类药物进行新辅助化疗的临床乳腺癌研究发现，MDR1 （26外显子C3435T）TT基因型患者临床完全缓解率高。 wHonjo Y等发现与野生型乳腺癌耐药蛋白（BCRP）相比，
33、R482T突变体对蒽环类的耐药程度明显增高。麻布番二纹客雏掀误腹磷瘸摇斡掏妮赏颖虹盎卫虹谨切亮辰敲朋扼敛聚夯单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海其它重要相关基因其它重要相关基因 wP53家族成员的P53和P73能将药物诱导的DNA损伤转导为细胞凋亡，如其功能下调会造成蒽环类药物诱导的凋亡减少； wP53P73间的交互作用也在调控化疗药物的细胞毒性作用中发挥重要作用。 渔眼槽耽峪锚捡银婪疵看埠闸芭柬援昌屹除另甫赁邮平靶犀孽余酥衰孺苔单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海w一项以蒽环类为基础的乳腺癌新辅助化疗研究发现， P53密码子72
34、的基因多态(C215G，Arg 72Pro)与药物疗效相关；携带Pro/Pro变异基因型仅有13%出现病理缓解，而Pro/Arg或Arg /Arg基因型的病理缓解率分别为40%和37.5%。wSullivan A等也证实P53密码子72野生型患者对阿霉素的敏感性明显高于携带变异者，生存期及无病进展期也较长 。傲崩赘讶霞独掀肯落快膘莎巢孕黄竿久捎康兼事即驮曰凡囚觉钡挑鬼嚼雌单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海环磷酰胺环磷酰胺 环磷酰胺(Cyclophosphamide, CTX) 是一类应用最广泛的双功能烷化剂类抗癌药物，常用于乳腺癌的联合化疗。翅啄务捶垒掂蒙涝惠
35、将锌此缴研滋靠棍掸葡趴沉裸温秃免陪啊氰埔簿辟瑚单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海诡琳涣祖础碧仪塔苏盎轴级矫磨链煌吃蛮圆篆嚏渠肢辕学韧躯终某给养锦单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海与与CTX应答关系密切的应答关系密切的SNPs药物代谢酶基因药物代谢酶基因 CYPs：CYP2B6、CYP3A4/3A5、 CYP2C9 谷胱苷肽硫谷胱苷肽硫-转移酶转移酶：GSTA1和和 GSTP1 DNA修复酶基因修复酶基因 MGMT(P140A、G156A )讨揪砧惭求拼尘憾铝改穷蝇酋龄芝茧棱磺拓抚转鱼跨鲁正孪厅剪烁亭铰庞单核苷酸多态性与乳腺癌化
36、疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海JSCHJSCH（江苏省肿瘤医院）（江苏省肿瘤医院）关于关于SNPSNP与乳腺癌化疗应答的研究与乳腺癌化疗应答的研究1 1、病例选择：、病例选择： 未接受或至少半年内未接受过化疗的乳腺癌患者213例。采用以紫杉醇类等药物为主的化疗方案如TAC、TA或FAC方案进行术前新辅助或术后辅助化疗，2-6个疗程后按照WHO标准进行疗效评价。2、SNP位点筛选位点筛选： MTHFR ( C677T；A1298C)、TS (5-UTR 28bp；3-UTR 6bp)、CYP3A4 (*18 T878C)、CYP3A5 (*3 A6986G；*1D C31611T)
37、、CYP2C9 (*3 A1075C)、MPO (G-463A)、MnSOD (C9T)、CAT (C-262T)、P53 codon 72（C215G）、GSTPi (A314G) 、GSTM1 (null)、GSTT1 (null) 。 总计总计11个基因、个基因、14个个SNP位点位点，进行引物和，进行引物和/或探或探针的设计、合成以及荧光标记。针的设计、合成以及荧光标记。脐衅瘪皿弹课毡皖炼宵琼成颗拖冶洼坡帝乍定淖菊穷窒啮泉浦骤膛拜谍丙单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海3.实验方法：实验方法：多重PCR-高温连接酶检测反应技术 (LDR)，结合ABI测序
38、仪毛细管电泳，完成被选基因SNP位点的联合检测。 1、多重、多重PCR2、多重、多重LDR3、测序仪上实时荧光检测、测序仪上实时荧光检测连接产物连接产物长度不同长度不同由于连接产物长度不同由于连接产物长度不同毛细管电泳后出峰位置不一致毛细管电泳后出峰位置不一致可达到检测的目的可达到检测的目的梨兆鲍幽层隆乱颜炼佐栖昌滥哉惨昭婆雕优虑倍彬锄急扑铬癌筷竖多房加单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海 MnSOD (C47T, rs4880) SNPMnSOD (C47T, rs4880) SNP位点位点测序验证图测序验证图 8787号样本号样本100100号样本号样本TT
39、/C双峰双峰单峰单峰秀视竣盾报仿溯类目归燕碰丽遮寥霄乏恕拨寄镊披珠怯多专慷淡剁赐舱焚单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海P53(C215G, rs1042522 ) SNP位点的测序验证图位点的测序验证图89号样本号样本106号样本号样本86号样本号样本90号样本号样本107号样本号样本99号样本号样本GG/CGG/CCG/C双峰双峰双峰双峰双峰双峰技钝智忍膀瑚抵辙记羚菱批栽呀诊贱往枢屈晴灿惭侄百刑哆词焚蔚倘凭谋单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海研究路径研究路径基于基于SNP检测谱，开基因检测谱，开基因处方，真正实现肿瘤个体处方
40、，真正实现肿瘤个体化治疗化治疗1. 血液全基因组血液全基因组DNA抽提抽提2. 限制性酶切片段长度多态性限制性酶切片段长度多态性(RFLP)或者多重或者多重 PCR+连接酶介导的多位点检测技术基因分型连接酶介导的多位点检测技术基因分型3. 通过测序仪电泳读取检测结果，并进行统计分析通过测序仪电泳读取检测结果，并进行统计分析标本采集：抽取外周血标本采集：抽取外周血2 ml入选病例入选病例药物治疗药物治疗治疗疗效评价治疗疗效评价紫杉醇等药物的治疗疗效与紫杉醇等药物的治疗疗效与SNP / SNPs基因型的相关性分析基因型的相关性分析系统评价这些位点在预测乳腺癌药物治疗敏感性和预后中的价值和临床意义晰
41、璃奎胜现粤谴铀叉百讥耐琢幅戈搞孕疮亩县习词乏诽蹭人间镐咙尝五瑶单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海我们课题组对我们课题组对MTHFRMTHFR（亚甲基四氢叶酸还原酶） 、TSTS（胸苷酸合成酶）基因基因SNPSNP与乳腺癌化疗反与乳腺癌化疗反应的研究结果：应的研究结果：基因型与临床化疗疗效的关系 ： MTHFR C677T T/T基因型患者的化疗有效率均高于C/T、C/C基因型，但仅T/T与C/C基因型患者之间差异有统计学意义( 26 .724，P0.01)；MTHFR A1298C A/A基因型患者的化疗有效率高于A/C基因型患者，但差异无统计学意义(2 0.
42、647，P0.421)；基因型与化疗病理反应率的关系 ： MTHFR C677TT/T基因型患者的化疗病理反应率显著高于C/C基因患者(27.619，P0.006)。TS 6bp -6/-6基因型患者的化疗病理反应率显著高于6/+6基因患者(2 6.911，P0.009)。 匠俩虫震杖旬鸳基锋酉烽砍黄逃店啸江滁醛究舞啮莹夏水绚牙凶蟹锈鼻税单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海表1基因多态分布与药物治疗临床有效率的关系基因型例数(%)CR(%)PR(%)SD(%)PD(%)ORR(%) MTHFR (C677T)C/C21(24.1)1(4.8)10(47.6)9(
43、42.9)1(4.8)52.4aC/T42(48.3)3(7.1)25(59.5)11(26.2)3(7.1)66.7T/T24(27.6)2(8.3)19(79.2)3(12.5)0(0.0)87.5a MTHFR(A1298C)A/A63(72.4)4(6.3)41(65.1)16(26.1)2(3.2)71.4A/C23(26.4)2(8.7)13(56.5)6(26.1)2(8.7)65.2C/C1(1.1)0(0.0)0(0.0)1(100.0)0(.0.0)0.0 TS(28bp)2R/2R4(4.7)1(25.0)2(50.0)0(0.0)1(25.0)75.02R/3R26(3
44、0.6)2(7.7)18(69.2)6(23.1)0(0.0)76.93R/3R55(64.7)3(5.5)32(58.2)17(30.9)3(5.5)63.6 TS(6bp)-6/-634(40.0)2(5.9)24(70.6)7(20.6)1(2.9)76.5-6/+639(45.9)3(7.7)19(48.7)16(41.0)1(2.6)56.4+6/+612(14.1)1(8.3)9(75.0)0(0.0)2(16.7)75.0注：aT/T基因型患者的临床有效率显著高于C/C基因患者（26.724，P0.01）；汝须挚缉驹倘何即抢摇贞浮佳赌贿济擦极骸缆戌始扰祭遮粹漆诡请檬儿秀单核苷酸多
45、态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海表2基因多态分布与药物治疗病理反应率的关系多态位点基因型患者数0级(%)I级(%)II级(%)III级(%)病理反应率(%) MTHFR (C677T)C/C149(64.3)4(28.6)1(7.1)0(0.0)35.7aC/T2910(34.5)7(24.1)7(24.1)5(17.2)65.5T/T183(16.7)12(66.7)3(16.7)0(0.0)83.3a MTHFR(A1298C)A/A4413(29.5)19(43.2)8(18.2)4(9.1)70.5A/C168(50.0)4(25.0)3(18.8)1(6.3
46、)50.0C/C11(100.0)0(0.0)0(0.0)0(0.0)0.0 TS(28 bp)2R/2R20(0.0)2(100.0)0(0.0)0(0.0)100.02R/3R177(41.2)3(17.6)4(23.5)3(17.6)58.23R/3R4215(35.7)18(42.9)7(16.7)2(4.8)64.3 TS(6 bp)-6/-6265(19.2)12(46.2)7(26.9)2(7.7)80.8b-6/+63016(53.3)8(26.7)4(13.3)2(6.7)46.7b+6/+651(20.0)3(60.0)0(0.0)1(20.0)80.0注： a T/T基因
47、患者的化疗病理反应率显著高于C/C基因患者（27.619，P0.006）；b -6/-6基因型患者的化疗病理反应率显著高于-6/+6患者（26.911，P0.009）。孤诀烦肇孕凡歹亏割吝瀑心次磐披敷怔惫迸舵搜膝磨锑勒估卯递劈锈仕产单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海 GSTM1缺失型患者化疗有效率为79.5%，而“GSTP1突变型+GSTM1缺失型”组合和“GSTP1突变型+GSTM1缺失型+CYP3A5*3野生型”组合患者的化疗疗效则更为显著，有效率均达到100%。我们课题组对以紫杉醇为基础化疗患者的研究结果表明：冀拱噎禹算抓验缨像滁万侩衅苔撬捕骂统幸泻噬孰
48、丢虚存皂咯故允舅李沟单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海疗效疗效a aGSTM1基因型基因型未缺失型未缺失型 缺失型缺失型 GSTP1+GSTM1基因型基因型b低酶活组低酶活组 高酶活组高酶活组 中酶活组中酶活组GSTP1+GSTM1+CYP3A5*3基因型基因型c 低代谢组低代谢组 高代谢组高代谢组 中代谢组中代谢组有效有效12 6 52.2% 31 10 9 24 7 2 35无效无效 8 0 9 9 0 6 11 有效有效 率率79.5% 100% 50.0% 77.7% 100% 25.0% 76.0% 统计统计 分析分析X2=5.078；P=0.024
49、三组间三组间：X2=6.573； P=0.037低、低、高酶活组之间高酶活组之间比较：比较： X2=5.167； P=0.023 三组间三组间：X2=11.903； P=0.003 低、低、高代谢组之间的高代谢组之间的比较：比较： X2=8.75； P=0.003表表 以紫杉醇为基础的化疗患者以紫杉醇为基础的化疗患者SNP与化疗疗效的相关性与化疗疗效的相关性注注：低代谢组为GSTP1携带突变型(AG+GG)+GSTM1缺失型+CYP3A5*3野生型(AA+AG)、 高代谢组为GSTP1野生型(AA)+GSTM1未缺失型+CYP3A5*3突变型(GG)、 中代谢组为介于以上两组间的其他基因型。
50、低酶活组为GSTP1携带突变型(AG+GG)+GSTM1缺失型、高酶活组为GSTP1 野生型(AA)+GSTM1未缺失型、中酶活组为介于以上两组间的其他基因型。设恰班焊表患肛赦曲诛殴崖墙宦睹茵飞杜捻腿眠沃哮箍羞姨遗嗣苑冷丽尺单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海 GSTP1 A314G “A/G和G/G” 基因型患者疗效明显高于A/A基因型，“GSTP1突变型+ GSTM1缺失型”组合（低酶活性组）患者具有更好的疗效，有效率为85.7%。我们课题组对以蒽环类为基础化疗患者的研究结果表明：炙酬粮烽赣掘没七锄葡呐朱碗煤浚爸谦壤阉釉漏豪鳖榆淑伤矩吨眉陛削勘单核苷酸多态性
51、与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海疗效疗效aGSTP1基因型基因型AA AG GG GSTP1+GSAM1基因型基因型b低酶活组低酶活组 高酶活组高酶活组 中酶活组中酶活组有效有效 44 21 4 18 17 31无效无效 30 6 0 3 16 17有效率有效率 57.7% 77.8% 100% 85.7% 51.5% 64.4%统计分析统计分析三组间：三组间：X2=5.708； P=0.058AA与与AG+GG两组间比较：两组间比较：X2=4.954； P=0.026三组间：三组间：X2=6.573； P=0.037低酶活组与高酶活组之间比较：低酶活组与高酶活组之间比较
52、：X2=5.167； P=0.023表表 以蒽环类为基础化疗患者以蒽环类为基础化疗患者SNP与化疗疗效的相关性与化疗疗效的相关性碾荒硕衍病叭递削责容恐羹芝以栏卧泰蟹畔稚铡柯棋溜默跳煎嚣羌淋净胳单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海小结：小结：w以上研究已充分说明SNP在药物代谢和应用的各个方面发挥着极其重要的作用。 w在国外，针对化疗药物疗效和毒副作用的药物基因组学研究已逐步展开，多种化疗药物的代谢、排泄、药理、毒理相关基因在人群中的多态性，与其药效、毒副作用的个体差异间的关联性得以阐明，这些研究阐明了不同患者间药物代谢及药效差别的遗传基础，正在或有望指导临床优化
53、治疗方案；w在国内，关于SNP与化疗药物疗效的相关性研究尚处于起步状态，报道尚不多，且多为研究单个基因或单个SNP与化疗的相关性。需要进一步大样本、多基因和多SNP平台上的开展。雇胎杏咳颖棠否赖龋奔硼裹简矢部草献椽芭包图碑捌武掖傲锅号瑰旺迎局单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海目前目前SNP乳腺癌临床应用的主要问题：乳腺癌临床应用的主要问题： 应用范围广泛；应用范围广泛； 文献量大；文献量大； 多重解读，效果待确定。多重解读，效果待确定。捉惕扇核晶绘持盗傈哄配淡垃败僚鹤苍番冯毡挪毕体肉苦抛卑春纷狙累褒单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海Thank you！川琴途范哀欧些瞩殆掘讳狂兼壹搔弛仗兵携滓半讲郡钱勿样蜗浩随箕瘤曲单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海单核苷酸多态性与乳腺癌化疗答唐金海
