GEL EQ 凝胶成像使用指南1. 翻开主机电源与计算机电源.2. 点击凝胶成像软件,进入 QUANTITY ONE 操作界面.3. 在 FILE 菜单中,选择 GEL EQ 菜单,进入图像采集界面4. 点击 LIVE/FOCUS 菜单,采集图像.(依据被扫胶的要求, 在凝胶成像主机面板上选择 UV/WHITE 紫外光/白光).(如需使用透射白光,则把白光台电源翻开 ,把白光台放在底板上 ,把胶放在白光台上.)5. 调整光圈大小,点击 IRIS 下 OPEN/CLOSE;调整聚焦,点击FOCUSE 下 NEAR/FAR 按钮;调整远近即大小,点击 ZOOM 下相应按钮,直到满足为止.6. 爆光时间一般选择自动 AUTO EXPOSE 即可.7. 假设图像上有高亮红点,说明爆光过度,则须缩小光圈.8. 图像调好后 ,点击 SAVE 键保存.假设需保存为其他格式 ,则在FILE 菜单下选择导出,保存为 JPEG/TIFF 格式文件.9. 关于分析处理见 Quantity One 应用讲义Quantity One 应用讲义本讲义介绍Quantity One 的两个重要分析功能:定量分析和分子量确定。
Quantity One 软件Help Quick Guide 快捷指南提示如何实现一个功能,如定量分析(Volumes Quick Guide),电泳条带分析(Band Analysis),差显分析(Differential Display Analysis),克隆计数(Colony Counting Analysis)等快捷指南下有 1,2,3…步骤,依据提示完成一. 定量分析功能快捷指南Volumes Quick Guide,此功能能对任意所选区域进展定量分析,此分析可以报告 2个结果:相对浓度和确定浓度〔如有浓度标准样品〕1. 选择成像系统或翻开已保存的文件( 软件可以把握 Bio-Rad 全部的成像系统如GelDoc,ChemiDoc,VersaDoc,GS-800,FX,如不是 Bio-Rad 成像系统所摄取的图象,将图象保存为Tiff 文件格式,软件也可进展分析处理)2. Zoom Box,缩放,对图象进展放大观看3. Transform 转化,调整图象的比照度黑白4. Volume Rect Tool 矩形区域选择,如U15. Volume Free hand Tool自由画笔选择区域,可以勾画出无规章外形,如 U26. Volumn Contour Tool等高线勾画区域,自动连接浓度浓度一样的点,如U3上面 3 种方法选择需要定量的区域。
双击所选区域,消灭如下窗口,定义样品类型,如未知样品 Unkonwn(U1,U2…即待计算样品),背景 Background(B1,B2…,软件在算浓度时会将此区域的浓度自动扣除) 或标准样品Standard〔Std1,Std2, 假设该样品是浓度标准样品,即定量标准,需在浓度 concentration 一栏输入该样品的浓度〕7. Select Tool 选择不同区域8. Print Image 打印图像9. Volume Analysis Report 定量报告结果,翻开消灭如下窗口,选择要报告的参数,主要有2 个参数 Volume 和 ConcentrationVolume 为相对浓度,如有浓度标准样品〔Std〕,软件可报告Concentration 确定浓度二.条带分析功能 Band Analysis介绍用此功能对泳道内的全部条带进展分子量确定,相对浓度分析1,2,3 同上4,5,6 确定泳道lane,并可对泳道进展各种调整〔实际试验中泳道往往不是垂直的而消灭各种变形在软件的工具栏中有一Lane Tool 图标,包含有更多泳道编辑工具Lane Tool泳道编辑工具包Band Tool条带编辑工具包7. Lane Background 去除泳道背景,建议不做8. Detect Band,检测泳道内的条带,翻开消灭如下窗口,一般可通过调整sensitivity 灵敏度来调整检测出的条带,或通过人工编辑来增加/削减条带。
翻开工具栏中 Band Tool 条带编辑工具包可看到更多编辑工具〔如上图〕10. Standard 输入分子量标准,软件自带有很多Bio-Rad 的分子量标准,如你用的是自己的标准,进入 New Standard 建立的分子量标准,软件可以选择标准单位是 MW〔蛋白质〕 还是BP〔核酸〕等〔左以以下图〕在Protein-Standard 对话框中输入分子量数值,完成后单击赋值图标〔右以以下图〕,回到图象文件上单击标准样品的泳道,软件自动将所输的分子量数值和泳道内的条带一一对应赋值图标:告知软件哪条是分子量标准样品的泳道输入分子量数值10. Band Attribute 条带属性,在完成第 9 步以后,软件已自动计算出了其他未知条带的分子量,翻开band attribute 选择要报告的参数,这里我们选择Molecular Weight,图象上可以看到全部条带的分子量〔红颜色标记〕,标准分子量为蓝色标记11. Match,跳过不做12. Print Image 打印图象报告结果输出工具13. All Lane Report 全部泳道条带结果报告翻开窗口,选择要报告的参数,如 Mol.Wt.〔分子量,如左以以下图〕,软件将报告结果〔右以以下图〕,在报告的右下脚有一报告输出工具,点击可将报告结果输出成TXT 文本格式或输出至剪贴板,你可把它粘贴到EXCEL,WORD等文件下。