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1、IJ 1/X 1/ IJ第一章绪论1-仪器分析：利用精密仪器进行物理或物理化学分析的方法(或用精密仪器测 量表征物质 的某些 物理或物理化学性质的参数以确定其化学组成.含量及化学结构的一类分析方法L2、仪器分析的特点：(1 )灵敏度高。远高于化学分析，可测定含量极低(如1-6. 10-9，甚至10-12级)的组分，也可以测定微量试样中的组分。(2) 选择性好。适合于复杂组分试样的分析，在单组分测定时，只要把仪器调 整到适宜条件，其他组 分的干扰通常可以避免。分析迅速。适于批量试样分析，用精密分析仪器测量时速度很快，加上计算机技术的应用，分析操作的自动化，结果的自动记录，数字的显示或自动处理，使
2、分析更为迅速。(4) 适于痕量组分的测定。仪器分析相对误差较大，但测定痕量组分时，绝对误差则较小，因此仪器 分析虽不适于测定常量组分，但适于测定微量甚至痕量组分。微量分析一固体0.1-10 mg液体0.01-1ml超微量分析一固休v 0. 1 mg液体v 0.01 ml(5) 适应性强，应用广泛。仪器分析方法有数十种之多，方法功能各不相同。（6）易于自动化。仪器分析使用复杂的精密仪器测量，被测组分的理化性质经检测器可转化为电 信号而记录下来，特别是将微机与仪器相连结，很多操作过程都可以实现自动化。第二章光学分析基础1-光学分析方法：依据物质发射的电磁辐射以及电磁辐射与物质的相互作用而建立的分析
3、方法。2、 电磁辐射：高速通过空间传播的光子流，也称为光，具有波粒二象性。普朗克疽）量子理论认为，辐射能的发射或吸收不是连续的，而是量子化的，每个光量子的能量（E）与其频率（V）及波长（入）之间的关系为：E=hv = h c /A=h c（h为普朗克常数c为光速,为波数）3、 电磁波谱：电磁波按波长顺序排列得电磁波谱，各波谱区所具有的能量不同，其产生的机理也各不相同。4、分子光谱:在辐射能作用下，分子内能级间的断迁产生的光谱称为分子光谱。（物质能级变化等于辐射能时，物质才会被吸收或发射）E= te （电子能）+ tv （振动能）+ tr （转动能5、原子光谱：由于核外电子在不同能级间跃迁而产生
4、的光谱称为原子光谱（atomic spectrum），它包括原子发射光谱、原子吸收光谱和原子荧光光谱。6、光谱分析仪器的组成：（1）辐射源（光源L要求必须有足够的输出功率和稳定性。一般说来，分子吸收光谱常采用连续光源，而荧光光谱和原子吸收光谱常采用线光源。发射光谱采用电弧、火花、等离子休光源。（2） 分光系统。主要由入射狭缝和出射狭缝、准直镜以及色散元件（棱镜或光栅）组 成。作用是将复合光分解成单色光或有一定宽度的波长带。滤光器只能分离出一个波长带（带通滤光器）或只能保证消除给定波长以上或以下的所有辐 射（截止滤光片L单色器可以产生谱带宽度很窄的单色光，而且单色光的波长可以在一个很宽的范围内任
5、意改变。（3）样品池（4）食里检测f辐射的检测多采用光电转换器光子检测器（量子化捡测器）：如硅光电池、光电管、光电倍增管以及硅二 极管；热捡测器：由于红外区辐射的能量比较低，很难引起光电子反射，采用热检测器可根据辐射吸 收引起的热效应来测量入射辐射的功率。（5）记录和显示系统。将光信号转变为电信号，由记录系统将信号处理放大并 以适当的方式显示或记录下来，如直读检流计、电位调节计、数字显示器、记录仪、打印机、荧光屏、计算机处理。第三章紫外可见分光光度法K吸收光谱：将不同波长的光依次通过某一固定浓度和厚度的有色溶液，分别测出它们对各种波长 光的吸收程度（用吸光度A表示），以波长为横坐标，以吸光度为
6、纵坐标作图，画出曲线，此曲 线即称为该物质的吸收光谱曲线（或光吸收曲线）它描述了物质对不同波长光的吸收程度 2、摩尔吸光系数：当溶液的浓度以物质的量浓度（mol-L-1）表示，液层厚度以厘米（cm）表 示时，相应的比例常数k （ k值的大小取决于吸光物质的性质、入射兀波长、溶液温度个和溶剂性质)仞为摩小吸兀系数，以衣小，其单位为L mol-1 ? cm-1o吸收系数：A=Kd A=sl c摩尔吸光系数的物理意义是：浓度为lmol-L-1的溶液于厚度为Icm收池中，在一定波长下测得的吸光度。的吸为了提高分析的灵敏度，通常选择摩尔吸光系数大的化合物进行测定，选择具有最大值的波长作入射光。3、偏离光
7、吸收定律的因素(1) 化学因素：溶液的化学因素引起偏离；(2 )光学因素：非单色光、杂散光、散射光和反射光、非平行光；(3 )比尔定律的局限性引起偏离；(4 )透光率测量误差：暗噪声、讯号噪声。4、参比溶液的选择：选择合适组分的溶液作参比溶液，先以它来调节透射比100%(A=0),然后再测定待测溶液的吸光度。这实际上是以通过参比池的光作测定试为作参比溶液的吸光度。(1) 溶剂参比。当试样溶液的组成比较简单，共存的其他组分很少且对测定波长的光几乎没有吸收， 仅有待测组分与显色剂的反应产物有吸收时，可采用溶剂液，这样可以消除溶剂、吸收池等因素的影 响。(2) 试剂参比。如果显色剂或其他试剂在测定波
8、长有吸收，此时应采用试剂参比溶液。即按显色反应相同条件，只不加入试样，同样加入试剂和溶剂作为参比溶液。这种参比溶液可消除试剂中的组分产生的影响(3) 试液参比。如果试样中其他共存组分有吸收，但不与显色剂反应，则当显色剂在测定波长无吸收时，可用试样溶液作参比溶液，即将试液与显色溶液作相同处理，只是不加显色剂。这种参比溶液可以消除有色离子的影响。(4 )平行操作参比。用不含被测组分的试样，在相同的条件下与被测试样同时进行处理，得到平行操作参比溶液。如正常人血浆(平行操作参比)与待测血药浓度的血样进行平行操作处理。5、单组分定量方法：(1 )工作曲线法，又称标准曲线法。工作曲线的绘制方法是：配制五个
9、以上浓度不同的待测组分的标准溶液，以空白溶液为参比溶液，在选定的波长下，分别测定各标准溶液的吸纸上绘制曲线，此曲线即称为光度。以标准溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，在坐标 工作曲线。(2 )标准比较法。这种方法是用一个已知浓度的标准溶液CS ,在一定条件下，测得其吸收度As,然后在相同条件下测得试液Cx的吸光度Ax;设试液、标 准溶液完全符合朗伯？比尔定律，则Cx=(Ax /As)Cs使用该方法要求：Cx与Cs浓度应接近，且都符合吸收定律。比较法适于个别样品的测定。(3) 比吸光系数法比吸光系数法是利用标准的百分吸光系值进行定量测定。6、多组分定量方法：在多组分的体系中，在某一波长下，如果各
10、种对光有吸收的物质之间没有相互作用，则体系在该波长的总吸光度等于各组分吸光度的和，即吸光度具有加和性，称为吸光度加和性原理。轮，8 紫夕卜光谱吸收带：吸收带是指吸收峰在紫夕卜光谱中谱带的位置类型：(1 )R吸收带由n-TT*跃迁产生。特点是强度弱(&100),吸收波长较长(270nm)o R吸收带随溶剂极性增加而蓝移，但当附近有强吸收带时则产生红移,有时 被掩盖。(2 ) K吸收带由TT-TT*跃迁产生。其特点是强度高(Q404)，吸收波长比R吸收带短(217-280nm)并且随共辄双键数的增加，产生红移和增色效应。共辄烯娅和取代的芳香化合物可以产生这类谱带(3 ) B吸收带它是由苯环振动和T
11、T-TT*跃迁重叠引起的芳香族化合物的特征吸收带。其特点是：在230 - 270nm( &200)谱带上出现苯的精细结构吸收峰，用于辨识芳香族化合物。当在极性溶剂中测定时B吸收带会出现一宽峰，产生红移，当苯环上氢取代后，苯的精细结构也会消失，并发生红移和增色效应。和性带收带属于怀或跃迁4n也是芳香族化合物的特征吸收ma苯!204nm (良带90(为。号带未知试忤tlX定性鉴定 般木用比较兀谱法/（2）推测化合物的分子结构（共辄体系、部分骨架，构型，互变异构体的鉴别）（3）化合物纯度的检测（如果化合物在紫外光区没有明显的吸收峰，而它所含的杂质在紫外光区有较强的吸收峰，就可以检测出该化合物所含的杂
12、质）定量鉴定一般选择入max作测定波长，若在入max处共存的其他物质也有吸收，则应另选较大而共存物质没有吸收的波长作测定波长。原则是被测物如有几个吸收峰，可选无其他物质干扰的、较高的吸收峰。一般不选光谱中靠短波长末端的吸收峰。第四章色谱法1色谱法分类（依据分离原理）: 1 ）吸附色I谱压. 5 . 5 I刀所用固定相为吸附剂I，靠样品组分在吸附剂上的吸附系数（吸附能力）差别而分离。（2 ）分配色谱法（partition chromatography）其固定相为液态利用样品组分在固定相与流动相中的溶解度不同引起分配系数的差别而分离。LLC与GLC都属于分配色谱法范围。流动相的极性大于固定相的极性
13、的液相色谱法，称为反相(RP)色谱法；反之，称为止相(NP)色谱法(3 )体积排阻色谱法(SEC)也称为凝胶色谱法.尺寸排阻色谱法。是以一定尺寸的多孔固休为固定相，以液休为流动相，按分子尺寸大小进行分离的方法。多用于高聚物分子质量分布和含量的测定。(4 )离子交换色谱法QEC)用离子交换树脂为固定相的色谱法称为离子交换色谱法。这种方法是靠样品离子与固定相的可交换基团交换能力(交换系数)的差别而分离。(5 )亲和色谱法(AC|将具有生物活性(如酶、辅酶、抗体等)的配位基键合到非溶性载体或基质表 面上形成固定相。利用蛋白质或生物大分子与亲和色谱固定相表面上配位基的亲和力进行分离的色 谱法，称为亲和
14、色谱法。这种方法专用于分离与纯化蛋白质等生化样品。(6 )化学键合相色谱法：将固定相的官能团键合在载体表面，所形成的固定相称为化学键合相。用化学键合相的色谱法称为化学键合相色谱法，简称键合相色谱法。化学键合相可作为液一液分配色谱法、离子交换色谱法、手性化合物拆分色谱法及亲和色谱法等色谱法的固定相。2、 基线：在一定操作条件下，色谱柱后没有组分，仅有纯流动相进入检测器时的流出曲3、色谱峰：当组分随流动相进入检测器时，检测器的响应信号随时间变化所形成的峰形曲线称为色谱峰。4、正常色谱峰：为对称于尖峰的正态分布曲线，有最高点，以此点的横坐标为中心，曲线对称向两侧快速单调下降。正常色谱峰的对称因子要求
15、在0.95-1.05之间。5、不正常的色谱峰：为畸形峰，有拖尾峰（前沿陡哨，后延拖尾）和前伸峰（前沿平缓，后延陡悄, 06、 保留时间:由进样到某组分色谱峰峰顶的时间间隔为该组分的保留时间(tR)7、死时间：不保留(不溶于固定相或不被固定相所吸附等)组分的保留时间为死时间(to亦即流动相的保留时间8、 调整保留时间:扣除死时间后的保留时间(t b 9、理论塔板数用于评价柱效的参数 1分离度(resolution):分离度相邻两斑点中心至原点的距离之差与两斑点的宽度总和之半的比值，即R=2 ( L1- L2 ) /(W1+W2)式中口、L2分别为组分仁2斑点中心至原点的距离，W仁W2分别为斑点仁2的宽度。R=1.0时相邻两斑点基本分开。11-色谱法的定性分析方法：(1 )利用保留值定性。在特定的色谱系统中，化合物的Rf值的准确性受到诸多因素的影响，显然利用相对保留值Rs进行鉴定可消除一定影响因素，提高重现性。在TLC中还通过变换固定相
