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1、凯氏定氮法测定饲料中蛋白质的不确定度分析吴江市农产品检测中心 黄海1、测定方法：含氮的有机化合物，与硫酸一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫 酸结合生成硫酸铵，然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以盐酸标准溶液 滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数即为蛋白质含量。2、数学模型：蛋白质含量计算公式如下：N (g/100g)= (V厂V0) x C x 0.014/ mx F x10010 HCL式中：V1样品消耗盐酸标准溶液的体积，mlV试剂空白消耗盐酸标准溶液的体积，mlChcl盐酸标准溶液的摩尔浓度，mol/LHCLm一样品质量，g0.0141.000 mol/L盐酸标准溶液相当的氮的质量，
2、gF换算成蛋白质的系数，本实验F为5.71则蛋白质含量的相对不确定度为：u (N) _ Ir u(chcJ 2+ u (N 0)-2n q-CHCL -L N 02.1盐酸标准溶液的相对标准不确定度u (Chcl)/Chcl的分析HCLHCL盐酸标准溶液的不确定度来自三方面：第一，标定盐酸用基准无机碳酸钠纯度为100%土0.05%，按均匀分布转换成标准差为0.0005/朽=0.00029, u(p) /p=2.9 x 10-4。第二，基准称量的变动性，在50g以内称量的变动性通 过10次重复测定统计，标准偏差为0.05mg，天平校正产生的不确定度，按检 验证书给定的土0.1mg，在置信概率95
3、%(K=1.96)时，换算成标准偏差为 0.1/1.96=0.051，即卩u(m)/m=5.4 x 10-4。第三，50ml滴定管的不确定度按检 验证书给定的土0.04ml，按均匀分布换算标准偏差为0.04/朽=0.023m 1，充满 液体至滴定管刻度的变动性通过重复6次测定统计，标准偏差为0.012m 1，滴 定管与溶液温度校正时温度不同引起的体积不确定度，假设差为20C，对水体 积膨胀系数为2.1 x 10-4/0C，则95%置信概率(K=1.96)时体积变化的区间为土50x2x2.1 x 10-4= 土0.021m 1，转换成标准偏差为 0.021/1.96 = 0.011。卩卩 u(V
4、50) /V50=5.6x 10-4。根据以上三项得出的盐酸标准溶液的相对标准不确定 度为：u ( p)2+u (m)2+r u(v 5。)2_ p _ m _L V 50 Ju(ChcL = CHCL=他.9xl0 一 4+(5.4 xl0 一 4+(5.6 xl0 一 4=0.000832.2样品称量的标准不确定度u (m)的分析称量不确定度来自两方面。第一，称量的变动性在 50g 以内，称量的变动 性通过10次重复测定统计，标准偏差为0.05mg。第二，天平校正产生的不确 定度，按检验证书给定的土0.1mg，在置信概率95%(K=1.96)时，换算成标 准偏差为：0.1/1.96=0.0
5、51，此两项得出称量的不确定度为：1)u (m) = .(0.05)2 + (0.051)2=0.071mg2.3 100ml消化瓶体积的标准不确定度u（Vi0o）的分析100ml 消化瓶的不确定度来自三个方面，第一，消化瓶体积的不确定度， 按检验证书给定为土 0.12ml，按照均匀分布换算成标准偏差为 0.12/打= 0.069m 1。第二，充满液体至消化瓶刻度的变动性通过6次重复测定统计，标 准偏差为0.019m 1。第三，消化瓶和溶液的温度与校正温度不同而引起的体积 不确定度，假设差为20C，对水体积膨胀系数为2.1 x 10-4/0C，则95%置信概 率（k=1.96）时体积变化区间为
6、土 100 x2 x2.1 x 10-4= 土0.042ml,，转换成标 准偏差为0.042/1.96=0.021m1，该三项得出的不确定度为：u（V100）= *（0.069匕 +（0.019）2 +（0.021）2=0.075ml（ 2）2.4 20ml移液管的标准不确定度u （V20）的分析20ml 移液管的标准不确定度来源为：第一，移液管体积的不确定度，按 检验证书给定为土0.03ml，按均匀分布换算标准偏差为0.03/朽=0.017ml，第 二，充满液体至移液管刻度的变动性，通过重复 6 次测定统计，标准偏差为 0.012ml，第三，移液管和溶液的温度与校正时的温度不同引起的体积不确
7、定 度，假设差为20C，对水体积膨胀系数为2.1 x 10-4/0C，则95%置信概率（k=1.96）时体积变化区间为土20x2 x2.1 x 10-4= 土0.008ml,，转换成标准偏 差为0.008/1.96=0.004ml，以上三项合成得出的不确定度为：u（V20）= ：（0.017）2 +（0.012）2 +（0.004）2=0.021ml（3）2.5样品扣除试剂空白（V-V）消耗盐酸标准溶液的不确定度u （V10） 的分析用盐酸标准溶液滴定样品和试剂空白是在10ml滴定管中进行的。10ml滴 定管的标准不确定度来源为：第一，滴定管体积的不确定度，按检定证书给定 为土0.02ml,按
8、均匀分布换算成标准偏差为0.02/打=0.012m 1。第二，充满液 体至滴定管刻度的变动性，通过重复6次测定统计，标准偏差为0.010m 1。第 三，滴定管和溶液的温度与校正温度不同引起的体积变化的不确定度，假设差 为20C，对水体积膨胀系数为2.1 x 10-4/0C，则95%置信概率(k=1.96)时体 积变化的区间为土 10 x 2 x 2.1 x 10 - 4 = + 0.004ml ,，转换成标准偏差为 0.004/1.96=0.002m l，以上三项合成得出的不确定度为：u (V10)=u (SV。)=J(0.012)2 +(0.010 匕 +(0.002)24)=0.016ml
9、u( N (%) V100u (V 20)V 20u(V厂V0) 2V1 - V 0 -表 1 计算蛋白质含量不确定度的有关量值参数描述数值标准不确定度相对标准不确定度u (x) /xP基准无水碳酸钠1.00.000292.9 x 10-4M基准的质量0.1325g0.000071g5.4x10-4V5050ml 滴定管50.0ml0.028ml5.6x10-4M样品的质量0.3851g0.000071g1.8x10-4V100100ml 消化瓶100.0ml0.075ml7.5x10-4V2020ml 移液管20.0ml0.021ml1.1x10-3Vi10ml滴定管10ml0.016ml1
10、.6 x 10-3由(1)(2)(3)(4)式可得=7(1.8x 10-4)2 + (7.5 x 10-4)2 + (1.1x 10-3)2 + (1.6X 10-3)2=0.0021蛋白质含量的相对不确定度为Il-nf u(chcl)2+u (N 0)2L chcl -L N 0 -u(N)N$(0.00083)2 + (0.0021)20.0023样品(鱼饲料)测得蛋白质含量为N=44.32g/100g,则u(N)=44.32x0.0023= 0.10g/100g。3、扩展不确定度分析取包含因子 k=2(95%置信概率)，则 u(N)=2xu(N)=2x0.10=0.20g/100g。4、最后结果表示N 蛋白常N土u(N)= (44.32土0.20) g/100g。
