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1、恶性胸腔积液患者T淋巴细胞亚群的变化意义王英禹，张瑞，张志培，周勇安，孙晓雁【关键词】胸腔积液；T淋巴细胞；D4；D8ValuefeasureentfTlyphytesubsetsinpatientsithalignantpleuraleffusins【Abstrat】AI:TeasureTlyphytesubsets(TLS)inperipheralbld(PB)andpleuraleffusin(PE)inpatientsithalignantpleuraleffusins(PE)andtstudythehangesfTLSinPBandPEinpatientsithPEbefreanda
2、fterhetherapy.ETHDS:ThelevelsfTLSinPBandPEinpatientsithPErbenignpleuraleffusin(BPE)andinPBfnralpersnereexainedandpared;ThelevelsfTLSinPBandPEerealsparedbefreandafterhetherapy.RESULTS:ThedistributinfTLSassiilarinPBandPEinpatientsithPE;thelevelfD8+TellinPBfpatientsithPEashigherthanthatinnralpersn(30.6
3、2.4vs20.91.8,P0.05),buttheratifD4+/D8+aslerthanthatinnralpersn(1.780.21vs2.710.35,P0.05),andthelevelfD4+Tellassiilariththenral;paredithBPEpatients,PEneshadlerlevelfD4+TellandratifD4+/D8+(P0.05),buthigherlevelfD8+TellinthEirPBandPE(P0.05);hetherapyulddepressD8+Tell(30.62.4vs24.72.3,31.62.4vs21.94.1,P
4、0.05)andelevatetheratifD4+/D8+(1.780.21vs2.190.19,1.690.30vs2.620.40,P0.05)inPBandPEinpatientsithPE.NLUSIN:ThelevelfTLSinPEanbeknnbyeasuringitinPB;itishelpfulteasurethelevelfTLSinPBandPEfrdistinguishingPEfrBPE;ellediatediunitydepressininPEanbepartlyaeliratedbyhetherapy.【Keyrds】pleuraleffusin；Tlyphyt
5、e；D4；D8【摘要】目的：讨论检测恶性胸腔积液(PE)患者外周血(PB)和胸水(PE)中T淋巴细胞亚群(TLS)的意义及化疗前后TLS的变化.方法：比照良性胸腔积液(BPE)、PE患者外周血和胸水及安康正常人外周血中TLS的程度；比照PE患者外周血和胸水中TLS的程度；比照PE患者化疗前、后外周血和胸水中TLS的程度.结果：TLS在胸腔积液患者外周血和胸水中分布相似；PE患者外周血中D8+T细胞程度高于正常人30.62.4vs20.91.8，P0.05，D4+T细胞相仿，D4+/D8+低于正常1.780.21vs2.710.35，P0.05；与BPE患者相比，PE患者外周血和胸水中D4+T细
6、胞、D4+/D8+较低P0.05，而D8+T细胞较高P0.05；化疗后PE患者外周血和胸水中D8+T细胞程度明显降低30.62.4vs24.72.3，31.62.4vs21.94.1，P0.05，D4+/D8+明显升高1.780.21vs2.190.19，1.690.30vs2.620.40，P0.05.结论：检测外周血可以理解胸水中TLS程度；检测外周血和胸水中TLS程度有助于BPE和PE的鉴别；化疗可局部改善PE患者的细胞免疫抑制状态.【关键词】胸腔积液；T淋巴细胞；D4；D80引言肿瘤的发生、开展与细胞免疫功能降低亲密相关,T淋巴细胞在其中起中心调控作用1.为比拟良性胸腔积液benign
7、pleuraleffusin,BPE和恶性胸腔积液(alignantpleuraleffusin,PE)患者的T淋巴细胞亚群(TLS)分布程度及对原发病的诊断价值，和化疗对其影响，我们选择BPE，PE患者的胸腔积液和外周血及正常安康人外周血进展TLS检测.1对象和方法1.1对象诊断明确PE32(男21，女11)例，平均年龄57.9岁，鳞腺癌4例，腺癌28例；BPE(结核性)29(男17，女12)例，平均年龄45.7岁；正常对照组选自体检合格、肝、肾、肺功能完全正常安康人27(男14，女13)例，平均年龄34.2岁.患者于治疗前行胸腔穿刺术，搜集胸腔积液，同时抽取静脉血10L.P患者经NP方案化
8、疗2个周期后盖诺25g/2ivd1，d8；DDP4050gd13，21d为一周期，搜集胸腔积液，同时抽取静脉血10L.采集体检正常安康人静脉血10L.1.2方法胸腔积液用200尼龙网过滤组织于离心管；参加5LRPI；18，200g离心10in，去除上清液，混悬细胞沉淀于20LRPI，重复离心1次，重混悬细胞沉淀于5LRPI,参加PBS冲洗细胞，室温下，200g离心10in，去除上清液.重复此步骤.混悬细胞沉淀于适量RPI备用.用台盼蓝计数活细胞百分率.将肝素化的新颖去红细胞混悬液室温下参加等量PBS混匀，每10L去红细胞混悬液/PBS混悬液中参加3LFillHypaque液.18，900g，离
9、心30in.移除上层的血浆和血小板，缓慢的转移中层的单个核细胞层到锥形管，用3倍体积的HBSS洗涤细胞，18，490g，离心10in.去除上清液.用HBSS重新混匀细胞、洗涤并离心1次，去除上清液.混悬细胞于RPI备用.用台盼蓝计数活细胞百分率.计数外周血和胸腔积液淋巴细胞，用RPI调整细胞度至2.5109/L，将l06淋巴细胞悬于100LHanks缓冲液(含1g/L牛血清蛋白、0.1g/L叠氮钠)中，分别与20L抗D3AP(UHT1)、抗D4FIT(RPAT4)及抗D8yhre(RPAT8)Ab或相应IgG对照蛋白(均购自美国BDPharingen公司)于4孵化30in，Hanks缓冲液洗涤
10、2次，5g/L多聚甲醛固定.24h内用FAStarPlus流式细胞仪检测D3，D4，D8细胞，计算D4/D8比值.统计学处理：用SPSS10.0统计软件，数据以xsx表示.组间比拟用annhitneyU检验.组内前后比拟用ilxnsignedrank检验.2结果2.1T细胞亚群的差异PE患者外周血(PB)D3+，D8+T细胞高于正常人对照组P0.05，D4+T细胞相仿P0.05，D4+/D8+低于正常人对照组P0.05；BPE患者PBD3+，D4+，D8+均高于正常人对照组P0.05，D4+/D8+相仿P0.05.BPE，PE患者PBD3+T细胞相仿P0.05，前者D4+T细胞、D4+/D8+
11、高于后者，而D8+T细胞低于后者P0.05.BPE，PE中D3+T细胞相仿P0.05，前者D4+T细胞、D4+/D8+高于后者，而D8+T细胞低于后者P0.05.患者外周血和PE中TLS分布相似P0.05表1.2.2化疗后TLS的变化PE患者化疗前、后PB和PE中D3+，D4+T细胞无明显变化P0.05，而D8+T细胞明显降低，D4+/D8+明显升高P0.05，表2.表1胸腔积液患者/正常人T细胞亚群略表2恶性胸腔积液患者化疗后T细胞亚群变化变化略3讨论PE患者外周血D3+，D8+T细胞百分率明显高于安康人，D4+细胞无明显差异，D4+/D8+比值明显低于安康人.提示PED4+/D8+比值降低
12、是由于D8+细胞增高所导致，反映了PE患者的细胞免疫功能处于抑制状态.而BPED3+，D4+，D8+T细胞百分率均高于安康人，D4+/D8+比值无明显差异，反映了BPE患者的细胞免疫功能处于激活状态.在外周血和胸腔积液中，两者的D3+T细胞百分率相似，但PE患者的D4+T细胞百分率、D4+/D8+比值低于BPE患者，D8+T细胞百分率高于BPE患者.提示检测外周血或胸腔积液中TLS，有助于临床上对BPE，PE患者的鉴别诊断.PE患者的外周血和胸腔积液中D3+，D4+，D8+TLS百分率和D4+/D8+比值均相似，说明胸腔积液和外周血的分布程度非常接近，T细胞释放到外周血和分配到胸膜腔的程度有关
13、，通过外周血TLS的检测可反映出胸腔积液T淋巴细胞程度.化疗后D8+T细胞明显降低，D4+/D8+明显升高，而D3+，D4+T细胞无明显变化.提示常规化疗后肿瘤细胞大量坏死或凋亡，肿瘤负荷减少而使免疫抑制因子减少，可局部改善患者的细胞免疫抑制状态，但细胞免疫功能紊乱并未得到完全纠正.D4+T细胞(Th)可分泌IL2，TIFN等细胞因子，并诱导或促进自然杀伤(NK)细胞等多种细胞毒性细胞的活性，共同发挥抗肿瘤作用2.D8+T细胞(Ts)那么抑制机体的免疫功能，与肿瘤的发生、开展和转移亲密相关.恶性胸腔积液患者肿瘤细胞负荷增加，分泌免疫抑制因子增多，在抑制T淋巴细胞增殖、分化过程中造成Ts，Th细
14、胞程度的增、减，以有利于肿瘤在宿主的转移3.因此，细胞比值是反映细胞免疫平衡状态的敏感性指标，本研究结果提示恶性胸腔积液患者存在明显的细胞免疫功能低下、紊乱；T淋巴细胞亚群的测定对恶性胸腔积液的诊断及疗效评估有一定价值；外周血中T淋巴细胞的检测可以反映胸腔积液中T淋巴细胞分布程度.并提示在有效化疗杀伤癌细胞的同时，应辅助以免疫调节治疗，从而进步患者的细胞免疫功能，更有利于延长患者的生存期并改善其生存质量4-5.【参考文献】1萧剑军，何洁冰，何庭宇，等.中晚期肺癌患者T淋巴细胞亚群和红细胞免疫功能检测及临床意义J.广东医学院学报，2002，20(1)：15-16.2SigstadE,DngHP,
15、NielsenS,etal.QuantitativeanalysisfintegrinexpressinineffusinsusingflytetriiunphentypingJ.Diagnytpathl,2022，33(5):325-331.3henYQ,ShiHZ,QinXJ,etal.D4+D25+regulatryTlyphytesinalignantpleuraleffusinJ.AJRespirritareed,2022,172(11):1434-1439.4DalbethN,LeeY.LyphytesinpleuraldiseaseJ.urrpinPuled，2022，11(4):334-339.5AhedS,ShahidRK,RiaiR,etal.alignantpleuraleffusinsinlyphprliferativedisrdersJ.LeukLypha，2022，46(7):1039-1044.
