病理实验技术

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1、1. 图像的定性分析：指用 肉眼、显微镜、电镜等观 察图像结构后对图像的 结构特点和含意所作的 描述、分析、推理和判断。2. 图像的定量分析：是指 用量化的方法、以数字的 表达形式对图像中各种 结构信息的定量描述,及 在此基础上对图像含意 所作的定量分析、推理、 判断和概括。3. 数值图像：是指把图像 画面划分成由数字化的 像素集所构成的图像。各 像素像的灰度值用整数 值来表示。因此所谓数值 图像就是像素灰度值的 二维数组。4. 形态测量学：也称形态 测试学，是指定量测试和 分析组织宏观或微观水 平的二维和三维的形状 与结构的原理、方法及其 应用的一门科学，它通过 有关量化指标反映组织 的结构

2、特点。包括平面测 量学与体视学。6. 几何校正：是将一标准 尺度输入计算机图像分 析系统，计算机根据该尺 度就可确定出在该标准 尺度输入的条件下有关 图像的尺度单位，即图像 中每一像素所代表的实 际尺寸，这一过程通常称 为标定。标准尺度主要有 以下三种形式，宏观标准 尺度、显微标准尺度和超 微标准尺度。7. 光密度校正：也称光密 度标定，它是将一套标准 的光密度片通过显微镜 和（或）摄像机输人图像 分析系统并以此为标准 对光密度参数进行校正。8. 计算机图像分析：指用 计算机图像分析系统对 图像结构的定量测试，以 及在此基础上对图像的 定量描述、理解、识别和 分类。9. 吸光度A（曾称光密度

3、0D）是指光线通过溶液或 某一物质前的人射光强 度与该光线通过溶液或 物质后的透射光强度几 比值的对数，即:A=o（IO / Ib ）10. 积分吸光度（IA）就 是指一定范围内（如核内） 各像素吸光度值之和11流式细胞术（flow cytomertry, FCM） ：流式 细胞术是利用流式细胞 仪进行的一种单细胞定 量分析和分选技术；是单 克隆抗体及免疫细胞化 学技术、激光和电子计算 机科学等高度发展及综 合利用的高技术产物;具 有速度快、精度高、准确 性好等优点，成为当代最 先进的细胞定量分析技 术。12. 基因芯片：又称 DNA 芯片（DNAcMp）,是指固着 在固相载体上的高密度 的

4、DNA 微点阵。具体地 说就是将大量靶基因或 寡核背酸片段有序地，高 密度地 排列在如硅片、 玻璃片、聚丙烯或尼龙膜 等载体上，这就是基因芯 片。基因芯片按功能可分 为三类：表达谱基因芯 片、诊断芯片和检测芯 片。13. 组织芯片：又称组织 微阵列；是将数十个至数 百个小的组织片整齐地 排列在某一载休上而成 的微缩组织切片；组织芯 片的制作主要包括组织 筛选和定位，阵列蜡块的 制作和切片等步骤。14. 超薄切片：由于电镜 电子束穿透能力的限制， 必须把标本切成厚度小 于 0.1um 以下的薄片才 适用，这种薄片称为超薄 切片。常用的超薄切片厚 度是 50-70nm。15. 进行性染色：又称渐

5、进性染色，将组织成分着 色自浅至深，当达到所需 要的强度时，终止染色， 这种方法称为进行性染 色。16. 退行性染色：又称后 退性染色，现将组织浓染 过度，使其超过所需要的 程度，然后再用某些溶液 脱去多余的染色剂，以达 到适当的深度，并使不着 色的组织、细胞的某些成 分脱去色度，而最终使应 该着色部分达到适宜程 度。17. 分化：就是用某些试 剂，将过度染色的或不需 要着色的组织成分上的 颜色除去个过程。18. 蓝化：是指用明矾苏 木素液深染细胞核后，通 过盐酸乙醇分化，切片从 酸性环境中转移至流水 中使之变蓝的过程。19. 原位分子杂交：用已 知碱基顺序并带有标记 物的核酸探针与组织、细

6、胞中待测的核酸按碱基 配对的原则进行特异性 结合，形成杂交体，然后 再用与标记物对应的检 测系统，通过组织化学或 免疫组织化学方法在核 酸原有位置进行细胞内定位。20 抗原修复：组织在 制作过程中，由于化 学试剂的作用封闭了 抗原，又由于热的作 用致使部分抗原的肽 链发生扭曲，致使在 免疫组化的染色过程 中不能将其显示出 来，为了解决上述的 问题，利用化学试剂 和热的作用将这些抗 原重新暴露出来或修 正过来的过程称为抗 原修复 21.探针：是一小段单 链 DNA 或者 RNA 片 段，用于检测与其宜 补的核酸序列。1. 图像分析与图像处理 的不同：在进行图像分析 时，往往要进行图像处 理。图像

7、处理与图像分析 是有密切联系但又不同 的两个概念，有时常被混 淆，将图像处理当作图像 分析，其实不然。图像处 理本质上是指对图像的 修饰，通过这种修饰去除 图像的缺陷或不足，将模 糊图像变为清晰图像或 以新的图像形式来表达 原图像等。在进行图像分 析时，由于图像质量欠佳 或是具体分析的需要，往 往首先要进行图像处理。 通常所说的图像处理几 乎都指数字图像处理或 计算机图像处理。2. 结构参数用于描述图 像的结构特点。图像的结 构特点可通过结构参数 值的大小体现出来。结构 参数是图像定量测试的 具体指标和定量分析的 基础。图像定量分析的结 构参数大致上可分为三 大类：几何学参数、光度 学参数、特

8、化参数。3. 在 测 试 肿 瘤 细 胞 DI 时，最好用什么细胞作标 准二倍体对照？测试肿 瘤细胞 DI 时，都必须有 该肿瘤起源的正常细胞 作对照。这样才能对肿瘤 细胞 DI 值大小的确切含 意作出解释 . 鉴于对正 常对照的需要，应以与肿 瘤起源相同的正常细胞 或所研究细胞的正常态 作为测算时的标准二倍 体细胞。在无法确定其组织 起源时怎么办采用 何种细胞做正常对照？ 应以在所确定的标准二 倍体细胞的条件下，由实 际测得的正常对照细胞 的 DI 值 （士 5%或 10%）作 为判断 DNA 二倍体的标 准。按照这一标准的确定 原则，当标准二倍体细胞 为肿瘤起源的细胞 （ 或 所研究细胞的

9、正常态）， 则判断二倍体细胞的 DI 值为 1（0 51 5 或 0 一 1.1）。其它 DNA 倍体 类型的判断以此类推。4. 计算机图像分析在肿 瘤病理学中的应用:肿瘤 发生发展方面；肿瘤病理 诊断、分类、分型；肿瘤 预后判断；转移和复发； 肿瘤免疫组化和分子病 理学研究方面。5. 计算机图像分析应用 中应注意的问题1 ）设计在先、测试 在后，注意有关测试所需 满足的基本条件。2）.注 意计算机图像分析测试 并不等于体视学测试设 计，同时应注意计算机图 像分析测试中的误差。3）. 注意测试样本的代表性 4）. 注意测试方法和计 算公式的适用条件 5）. 注意现有参数的局限性， 注意新参数的

10、开发和应 用。6）. 注意正确理解和 解释测试参数及结果的 意义，注意参照空间的 陷讲问题。7）. 注意多 种参数的联合应用 ;8）. 注意在切片上对 DNA 进 行定量存在的不足。9）. 对于计算机图像定量诊 断 ，应注意应用诊断试 验的评价方法和有关评 价指标 ;10）. 在临床病 理学应用中应在有非常 可靠、充分和稳定的定量 诊断和鉴别诊断结果依 据的基础上逐步过渡到 临床应用。 1 1）. 注意将 定量病理学与分子病理 学结合，注意发展分子定 量病理学。 1 2）. 注意以 科学的态度对待计算机 图像分析的测试结果，应 充分看到计算机图像分 析的优点和局限性。6. 图像分割指将感兴趣

11、的图像结构从图像中提 取出来，使之与周围相邻 的组织分开。图像分割是 对特定结构进行测试的 基础，没有分割就不可能 对特定图像结构进行准 确测试。分割的好坏直接 影响对特定结构测试的 准确程度。图像分割的方法有手工 分割、灰度分割、色彩分 割。（1）色彩分割就是通过 指定特定的颜色，并将该 颜色的图像结构提取出 来。这种分割方法对于具 有特殊颜色结构的图像 具有良好的分割效果。在 巴氏染色中，胞浆一般呈 绿色，角化上皮细胞浆呈 桔黄色，核呈紫蓝色，因 此，用色彩分割法提取胞 核或角化上皮胞浆等结 构既准确又方便。（2）灰度分割是根据所 设定的灰度阈值进行图 像分割。由于不同的图像 结构往往具有

12、相同的灰 度，这就给分割带来了很 大困难， 常常将一些不 必要的图像结构一同分 割出来。因此单纯的灰度 分割往往不能满足要求， 常常要结合手工分割来 进行图像分割。（3）手工分割就是通过 手工方法借助鼠标器通 过勾描感兴趣的特定结 构来实现图像的分割，它 在图像分割中起重要作 用。在灰度分割中，只要 相邻结构的灰度相同或 相近，就难以分割，就有 必要借助手工分割。手工 分割同样可以和色彩分 割相结合，弥补色彩分割 时的不足。7 什么是流 式细胞仪 的基本结构？流式 细胞仪由三部分构 成 :1 ）、传感系统 : 包括样本递 送系统、样品池、检测系 统、电子传感器和激光源 等;2）、计算机系统 ;

13、3）、 电路、光路和水路系统 : 有电源、光学传导和滤 片、鞘液循环和回收部分 等。8. 流式细胞术样本制备 的基本原则？ a.用于FCM 的样本是单细胞悬液 ;b. 使各种体液和悬浮细胞 样本新鲜 ;c. 针对不同 的细胞样本进行适当的 洗涤，酶消化或 EDTA 处 理；d.新鲜实体瘤组织可 选用或联用酶消化法、机 械打散法和化学分散法 来获得足够数量的单细 胞悬液；e.单细胞悬液的 细胞数应不少于 106。9. 流式细胞术临床常应 用于那些领域？ 1）、外周 血细胞的免疫表型测定 和定量分析； 2）、某一特 定细胞群的筛选和细胞 收集； 3）、细胞耐药基因 的检测； 4）、癌基因和抑 癌基

14、因的检测； 5）、细胞 凋亡的定量研究、细胞毒 功能检测； 6）、细胞内某 些蛋白质和核酸的定量 分析。7）在肿瘤学中的 应用，协助肿瘤的早期诊 断； 8）在细胞免疫中的 作用； 9）在血液病诊断和 治疗中的应用，如白血病 的诊断和治疗及造血干 细胞移植技术等。10. 目前基因芯片主要应 用于那些领域？ A、测序；B、基因表达水平的检测；C、基因诊断；D、药物筛 选。11. 组织芯片的特点：体 积小，信息量大，能高效， 快速和低消耗地进行各 种原位组织学的研究和 观察，并有较好的内对照 及实验条件的可比性。高 通量，大样本，省时迅速， 简便经济，用途广泛，结 果可靠。12. 免疫组化的基本原理

15、 及主要优点：（1）、原理： 应用免疫学及组织化学 原理，对组织切片或细胞 标本中某些化学成分进 行原位定性、定位或定量 研究，这种技术称为免疫 组织化学技术或免疫细 胞化学技术。 （2）、优 点：A、特异性强；B、敏 感性高；C、定位准确， 形态和功能相结合； D、 原位的化学；E、呈色反 应；F、形态、代谢、功 能三结合；G、方法上一 通百通；H、定性可靠， 定位准确，定量可能； I、 跨学科广泛应用。13. 常用免疫组化的方 法：（1）、按标记物质： 免疫荧光法、放射免疫 法、酶标法和免疫金银 法； （2）、按染色步骤： 直接法和间接法； （3）、按结合方式： 抗 原-抗体结合（PAP法

16、） 和亲和连接（ABC法、SP 法）。14. 简述免疫组化在病 理诊断和研究中的作用：（ 1）确定细胞类型；（ 2） 辨认细胞产物；（3）了解 分化程度；（4）鉴定病变 性质；（5）发现微小转移 灶；（6）探讨肿瘤起源或 分化表型；（7）确定肿瘤 分期；（8）指导治疗和预 后【免疫组化中与预后有 关的标记大致可分三类： 类固醇激素受体、肿瘤基 因标记和细胞增殖性标 记】；（ 9）辅助疾病诊断 和分类；（ 10）寻找感染 病因。15. 免疫组化中组织固 定的目的是什么？应注 意哪些方面？1）目的： 为更好保持细胞和组织 原有形态结构，防止组织 自溶，有必要对细胞和组 织进行固定。固定的作用 不仅是使细胞内蛋白质 凝固,终止或抑制外源性 和内源性酶活性,更重要 的是最大限度地保存细 胞和组织的形态结构和 抗原性,使水溶性抗原转 变为非水溶性抗原,可有 效防止组织自溶坏死、抗 原丢失弥散。2）注意