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1、第六节 单细胞藻类的培养液藻类的生长繁殖需要吸收各种营养元素，单细胞藻类的培养液必须具备这些营养元素,而且在营养成分和数量上都应该符合藻类的需要，各种藻类对营养的需要有很多共同点，所以一些培养液配方，能应用于多种藻类的培养。然而，藻类的不同种类，对营养的要求是有差别的，各有其特殊性，不同种类的培养液配方，当然也应该不同。只有较好地符合培养种类需要的配方，才可能获得较理想的效果。一个培养液配方的提出，首先必须了解这种藻类对营养的要求，要达到这一点，进行一系列的试验是必要的。还必须在使用中验证配方的效果，并在实践过程中不断总结经验，加以改进，使配方达到更理想的水平。 本节内容分培养液成分、培养液配
2、方和培养液的配制三部分。 一、培养液成分 单细胞藻类培养液的成分有下列七类。 (一)大量元素 1氮(N) 单胞藻培养液常用的氮源有硝酸钾(KNO3)、硝酸钠(NaNO3)、尿素(NH2CONH2)、硝酸铵(NH4NO3)、硝酸钙Ca(NO)3)2、氯化铵(NH4C1)、硫酸铵(NH4)2SO4、发酵人尿等。其中以硝酸钠和硝酸钾最常用。但不同的藻类对硝酸态氮和铵态氮的吸收利用情况是不同的，必须根据不同的藻类选择合适的氮源。 2磷(P) 单胞藻培养液常用的磷源有磷酸二氢钾(KH2PO4)、磷酸二氢钠、(NaH2PO4)、磷酸氢二钾(K2HPO4)、磷酸氢二钠(Na2HPO4)4种。海水单胞藻培养液
3、应用磷酸二氢钾，如用磷酸氢二钾所配培养液会产生大量沉淀。 3铁(Fe) 单胞藻培养液常用的铁源有三氯化铁(FeCl3)、硫酸铁(FeSO4)、硫酸高铁Fe2(SO4)3、氧化铁(FeO)、柠檬酸铁(FeC6H5O7)、柠檬酸铁铵Fe(NH4)3(C6H5O7)等。其中最常用的是三氯化铁和柠檬酸铁。无机铁在水中容易形成一种胶体复合物，无可逆反应，不能为生物利用。铁也容易产生沉淀。所以尽管铁在数量上所需很少，但要满足藻类需要却很困难。要保持溶液中可利用态铁的数量，通常采用3种方法，这些方法都取得一定的成功，但都不够十分完善。 (1)在培养液内加入土壤抽出液：由于自然有机质(一般称为腐殖酸)的作用阻
4、止了铁的沉淀和溶胶化(Pringsheim，1963)。 (2)在培养液内加入某种有机酸或其盐类以形成可溶性铁化合物：已证明较有效的有柠檬酸盐和酒石酸盐：迈尔(Myers，1947)证实应用硫酸铁和柠檬酸钠能使小球藻生长十分良好。 (3)应用络合剂：最常用的为乙二胺四乙酸(EDTA)，络合剂能防止铁和微量营养元素沉淀，并按照质量作用定律释放出足够数量的离子供藻细胞利用。 由于无机铁容易形成胶体复合物和沉淀，而有机铁，如柠檬酸铁、酒石酸铁等则是可溶性的，易为藻类细胞利用，在培养液配方中可使用有机态铁代替无机态铁。 因藻类对铁元素需要量不大，也有部分科学工作者，把铁列为微量元素。 4钾(K) 单胞
5、藻培养液中钾的来源常用的有氯化钾(KCl)、硝酸钾(KNO3)、磷酸二氢钾(KH2PO4)、磷酸氢二钾(K2HPO4)等。一般培养液中由于氮、磷元素的加入，也附带加入了钾营养元素。除此以外，可再加入氯化钾。5镁(Mg) 培养液中镁的来源，常用的是硫酸镁(MgSO4)和氯化镁(MgCl2)两种。可以单独使用其中一种，也可两种同时使用。镁元素在天然海水中的含量很大(1 200mg/L以上)，一般是足够的。湛水101号培养液（湛江水产学院）：NaNO30.03g维生素B1200gCo(NH2)2 0.03g维生素B12 200mgKH2PO4 0.005g 人尿 1.5mlFeC6H5O7(1%溶液
6、) 0.2ml海水1 000ml培养绿藻类、金藻类、硅藻类使用。在培养硅藻时应加入0.02g/L硅酸钠。ASP2培养液Provasoli,L.;McLaughlin,J.J.A.;Droop,M.R.1957:NaCl1.8gNnCl20.12mgMgSO47H2O0.5gCoCl20.3gKCl0.06gCuCl20.12gCaC1210.0mgH3BO30.6mgNaNO35.0mg维生素B120.1gK2HPO40.5mg维生素溶液S3（参考第70页）1.0mlNa2SiO310H2O15mgNa2EDTA3.0mg三羟甲基氨基甲烷0.1mgFeCl30.08mg纯水100mlZnCl3
7、15gpH7.67.8培养绿藻类、金藻类、蓝藻类、隐藻类、涡鞭藻类使用。（2）绿藻培养液配方：海洋三号扁藻培养液（海洋研究所，1960）：NaNO30.1g2Na3C6H5O711H2O0.02gKH2PO4 0.01g Fe(SO4)3(1%溶液)10滴海水1 000ml 亚心形扁藻培养液（湛江水产学院）：NaNO30.05g维生素B12200mgKH2PO4 0.005g 人尿 2mlFeC6H5O7(1%溶液) 0.2ml维生素B1200g海水1 000ml培养成亚心形扁藻及其他绿藻使用，多用于小型培养和中继培养，如能加入海泥抽出液20ml，效果更好。亚心形扁藻培养液（厦门水产学院）：（
8、NH4）2SO4200mg海泥抽出液V（参考第60页）20ml过磷酸钙Ca(H2PO4)2H2O+2(CaSO4H2O)30mgFeC6H5O7(1%溶液) 0.5ml海水1 000ml 过磷酸钙溶液的配制：取含有效磷为16%的普通二级过磷酸钙配成3%的母液，过滤，使用时每1000ml海水加入1ml。培养过程中以追肥形式分2次加入0.2%人尿液效果更好。布彻（Butcher）培养液Butcher，（1959）：NaNO30.1g土壤抽出液50mlK2HPO40.05g海水1000ml培养扁藻使用。盐藻培养液：甲液：K2HPO40.05gNaCl510gFeC6H5O70.001g海水500ml
9、海泥抽出液V（参考第60页）2030ml乙液：海水500mlNaNO30.5g使用时，将甲、乙两液混合。如果再加入0.2%0.3%人尿，效果更好。赫特纳（Hutner）培养液Hutner,S.H.(1950)：NaCl0.254gK2HPO420mgMgSO47H2O0.25g醋酸钾0.2gCa(NO3)24H2O15mg甘氨酸0.25gEDTA0.05gZn3.0mgFe0.6mgCu0.5mgMn1.0mg纯水100mlMo1.0mgpH7.5 培养盐藻使用。赖瑟（Ryther）培养液Ryther，J.(1954):NaCl2.67gNa3HPO412H2O2.0mgMgCl26H2O0.
10、22gNa2SiO39H2O2.0mgMgSO47H2O0.32gNa2C6H5O72H2O0.02mgKCl73mgKBr5.8mgNaHCO320mgB1.0mgNH4Cl5.3mg纯水100mlCaCl2150mg培养微绿球藻和Stichococcus使用。屋岛改良培养液（平田八郎，1980）：过磷酸钙Ca(H2PO4)2H2O+2(CaSO4H2O)50g硫酸铵（NH4）2SO4300g海水1m3大量培养海产小球藻使用。（3）硅藻培养液配方：艾伦内尔森（Allen-Nelson）培养液Allen,E.J.et al(1910):A.KNO320.2g纯水100mlB.Na2HPO412
11、H2O4.0gCaCl26H2O4.0gHCl(浓)2.0ml纯水80mlFeCl32.0mlB 液的配制法：先把氯化钙4g溶解于40ml纯水中。另外把磷酸氢二纳4g溶解40ml纯水中，再把三氯化铁溶融液2ml，缓慢滴入，摇动，产生白色沉淀，加热，缓滴入浓盐酸2ml，沉淀的白色沉淀即重新溶解。把以上两溶液混合。使用时，取A液2ml和B液1ml，加入1000ml海水中，充分混合后加热消毒，消后静置24h，然后将上层清液倒出使用。卢因（Lewin）培养液Lewin,J.C.;Lewin,L.A.(1960):Ca(NO3)24H2O0.02gZn0.1mgK2HPO40.05gB0.1mgNa2S
12、iO39H2O0.5mgCo0.1mg胰蛋白1.0gCu0.1mg维生素B121.0gMo0.1mgFe0.3mg海水1000ml米奎尔（Miquel）培养液Miquel,P.(18901893):A.MgSO410gKI0.2g NaCl10g纯水100ml Na2SO45gB.Na2HPO412H2O4g NH4NO31gCaCl26H2O4g KNO32gFeCl3(溶融)2ml NaNO32gHCL(浓)2ml KBr0.2g 纯水80ml每1000ml海水加入A液2ml，B液1ml。须藤培养液须藤俊造（1959）：NaCl24gNaHCO30.168gMgSO47H2O8gNa2Si
13、O30.008gKCl0.7gP1（参考第70页）1mlCaCl22H2O0.37g维生素B120.02gNaNO30.1gNa2HPO412H2O0.125g纯水1000ml 培养中肋骨条藻使用。廖氏改良培养液（转引自张立言等，1989）：KNO360mgNaSiO310mgNa2HPO412H2O10mg海水1000ml培养中胁骨条藻用。中胁骨条藻培养液（厦门大学）：KNO30.4gNaSiO30.02gNa2HPO412H2O0.04gFeSO47H2O0.014g土壤抽出液15ml45国际单位“920”植物生长刺激素海水1000ml硅藻培养液（湛江水产学院）：NaNO30.08g维生素B1200gK2HPO40.008g维生素B12200mgFeC6H5O7(1%溶液)0.2ml人尿1.5mlNa2SiO30.02g海水1000ml培养三角褐指藻、小新月菱形藻、钙质角毛藻、牟氏角毛藻使用。牟氏角毛藻培养液（黄海水产研究所）：NH4NO3520mgFeC6H5O73H2O0.52.0mgKH2P
